通过向感染有HPV的患者施用治疗有效量的来源于原代细胞之生物制品以及诱导针对HPV的免疫应答来治疗人乳头瘤病毒(HPV)的方法。通过向感染有HPV的患者施用治疗有效量的来源于原代细胞之生物制品以及使朗格汉斯细胞(LC)活化来克服HPV诱导之LC免疫抑制的方法。通过向感染有HPV的患者施用治疗有效量的来源于原代细胞之生物制品、使LC活化以及诱导LC向淋巴结迁移来提高LC向淋巴结迁移的方法。通过向感染有HPV的患者施用有效量的来源于原代细胞之生物制品、产生针对HPV的免疫力以及防止新病变发生来产生针对HPV的免疫力的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及逆转免疫抑制的方法。特别地，本专利技术涉及逆转人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus, HPV)的免疫抑制以及治疗HPV感染。
技术介绍
人乳头瘤病毒(HPV)是性传播的DNA病毒家族，其具有超过100种不同的基因型。基于它们所引发的病变谱，所述基因型分为低风险型和高风险型。低风险型主要诱导良性生殖道湿抚和低级别鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesion),而高风险型与肛门生殖器癌的发生有关并且可以在> 99%的子宫颈癌中检测到(其中在约50%的病例中发现HPV 16)。在美国，估计有75%的性活跃人群在其一生中染上至少一种生殖器HPV类型。尽管通过有效的帕帕尼古拉乌(Papanicolaou，Pap))涂片筛查、早期检测和治疗可以使由子宫颈癌导致的发病率和死亡率降低，然而在美国很多移民所来源的发展中国家中，这些措施均不易获得。在发展中国家中，子宫颈癌仍是妇女中癌症相关死亡的第二大原因。重要的是，由于不断变化的人口特征，预计该疾病所造成的负担在接下来的几十年间将显著增加。即使在美国，其筛查计划已使侵袭性癌症的整体比率降低，但是在白种非西班牙裔妇女、黑人妇女、西班牙裔妇女和经济上处于劣势的妇女之间，癌症的发生率仍存在不同。在美国，目前FDA批准之HPV预防性疫苗(GARDASIL (Merck))的外显率令人失望。在2007年，该疫苗仅施用给年龄为13-17岁女孩中的25%、年龄为18-26岁的所有女性中的10%，并且仅给与西班牙裔妇女中的1.1%。此外，该疫苗对已感染所述病毒的妇女(无论其是否已发生(前)癌性子宫颈病变)无效。考虑到感染HPV的终生风险以及疫苗覆盖率严重不足的人群将很可能继续以惊人速度发生子宫颈疾病和其它HPV相关疾病的事实，显然非常需要减轻病毒感染发生后产生之致癌作用的治疗方法。HPV是非裂解性、非包膜病毒。其“早期”和“晚期”蛋白的基因组编码区被命名为“E”和“L”。E蛋白执行对于基因组复制来说关键的调节功能，其中的两种蛋白(E6和E7)在肿瘤发生中发挥重要作用，而两种L蛋白(LI和L2)是自组装的衣壳蛋白，其负责DNA包装和病毒体组装。乳头瘤病毒感染的独特之处在于:其生成周期与增殖中的宿主表皮或粘膜基底上皮细胞的细胞分化相关联。HPV在其生命周期中保持在上基部(suprabasal)，因此其仅与表皮中的细胞(例如基底细胞和朗格汉斯细胞(Langerhans cells, LC)相接触。由于其生成周期与细胞分化相关联，因此很难在体外产生HPV病毒体。作为HPV病毒体的替代物，已开发了能够携带报告质粒的HPV病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)和HPV假病毒体(二者均是在本申请人实验室中建立的技术)。高风险HPV的持久感染是发生子宫颈癌的主要风险因素。虽然大多数感染HPV的妇女清除了病毒，但是所花费的时间可能在数月至数年的范围内。约15%的已感染高风险HPV的妇女不能引发针对HPV的有效免疫应答，这使得病毒持续存在数十年。清除速率慢和缺乏有效免疫表明，HPV以某种方式逃脱了免疫应答。HPV已发展出逃避立即清除的多种逃脱机制，使病毒得以在宿主中复制和持续存在。本申请人已显示HPV利用LC作为免疫逃脱的一种机制，显示于图4中。LC位于皮肤和粘膜的上皮层中，其是与HPV接触的第一个并且是关键性的APC。因此，LC负责起始针对HPV感染的有效免疫应答。一旦识别外来抗原，LC经历包括表型和功能变化的成熟过程，包括共刺激分子⑶80和⑶86、I类和II类MHC、趋化因子受体(例如CCR7)的上调，细胞因子和趋化因子的分泌以及向局部淋巴结的迁移。本申请人已确定，暴露于HPV16 L1L2 VLP的LC不上调共刺激分子和趋化因子受体，不分泌细胞因子和趋化因子，并且不起始针对HPV16 VLP来源之抗原的表位特异性免疫应答。相反，髓样DC被HPV16L1L2 VLP活化，并且一经活化即刺激HPV特异性T细胞。摄入HPV16L1L2 VLP后，DC和LC中起始不同的胞内信号级联反应。当用HPV16L1L2 VLP刺激时，在DC中，有丝分裂原活化的蛋白激酶(mitogen-activatedprotein kinase,MAPK)途径被活化,而其在LC中不活化。然而,在LC中,磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase, PI3K)途径被活化,引发导致Akt失活的信号级联反应。HPV16 E7特异性T细胞能够识别并杀死暴露于HPV16 L1L2-E7嵌合型VLP (chimeric VLP,cVLP)的LC，表明cVLP内化后，HPV肽由LC呈递，但是HPV16 L1L2 VLP抑制LC引发免疫应答。综上，这些数据揭示，在不存在共刺激时，LC呈递HPV来源的肽，因而发生耐受和免疫抑制。这继而可以导致HPV持久感染以及发生癌症的可能性增加。HPV的预防性疫苗诱导产生高效价的HPV中和抗体，并且已显示在长达6.5年的随访中具有高效力以及稳定水平的抗体。然而，在感染HPV的妇女中，一项3期试验未发现经接种组与对照组相比病毒清除加速的证据，确定性地表明基于VLP的预防性疫苗缺乏治疗效力。此外，由于HPV培养时间长、存在几种免疫逃避机制以及仅进行了几年的观察，因此预防性疫苗对癌症预防的持续效力仍有待确定。事实上，约三分之一的子宫颈癌是由除目前疫苗中存在之HPV以外的HPV类型引起的，这增加了难题的范围。因此，需要花费数十年才能够测出针对子宫颈癌率的可计 量效果。同时，对于全世界数以亿计的、目前感染了高风险HPV或者在未来几年内会感染的妇女来说，仍然需要治疗HPV感染和相关病变的疗法。手术是对患有子宫颈上皮内肿瘤(cervicalintraepithelial neoplasia, CIN)病变之患者的标准疗法，其通常据称在一年随访时去除CIN病变的有效率高达90%。然而，当监测妇女的整个生存期时，其有效率较低。多于80%的经历过手术过程的妇女在如下情形下将随后再次需要进行第二次相关过程:手术未去除HPV感染，或者对一种HPV类型的清除激发了继发性HPV感染的再活化。开发中的治疗性疫苗旨在通过活化患者自身的细胞免疫应答来控制恶变，以及靶向(前)癌细胞中存在的抗原。在过去的十五年中，已开发了数种候选疫苗，然而迄今为止还没有一种癌症疫苗得到美国食品药品监督管理局的批准。需要防止HPV感染到达诱导癌症发生阶段的干预手段。这样的干预是可行的，因为利用市售的HPV检测试剂盒(Digene Corp.)可以在早期检测到HPV感染。几条证据证实了细胞免疫系统在控制HPV和相关子宫颈病变的发病机制中的重要性。首先，25 40%的HPV阳性、轻微发育异常的病变自发地或者在局部活检不久之后消退，这表明衰退可能涉及局部炎症的诱导。其次，免疫缺陷与HPV感染的发生率增加有关。衰退中的HPV相关之皮肤疣和生殖器疣常常在病变处存在T淋巴细胞，这表明活跃的针对HPV的细胞介导之免疫应答可能是疾病衰退的要件之一。综上所述，这些研究表明，对HPV感染及其相关疾病的治疗方案应当旨在诱导感染部位的强的本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.12.08 US 61/267,5901.疗人乳头瘤病毒(HPV)感染的方法，其包括如下步骤: 向感染有HPV的患者施用治疗有效量的来源于原代细胞之生物制品；以及 诱导针对HPV的免疫应答。2.权利要求1的方法，其中所述来源于原代细胞的生物制品包括IL-1、IL-2、IL-6、IL-8、TNF-a 和 IFN-Y。3.权利要求2的方法，其中所述来源于原代细胞的生物制品包括浓度为60 6,000pcg/mL 的 IL-1 β、浓度为 600 60, 000pcg/mL 的 IL-2、浓度为 60 6, 000pcg/mL 的IL-6、浓度为 6000 600，000pcg/mL 的 IL-8、浓度为 200 20，000pcg/mL 的 TNF- α 以及浓度为 200 20，000pcg/mL 的 IFN- Y。4.权利要求2的方法，其中所述来源于原代细胞的生物制品还包括IL-7、IL-12、IL-15、GM-CSF 和 G-CSF05.权利要求1的方法，其中所述施用步骤还包括施用选自烷化剂、抗代谢物、抗生素和免疫调节剂的化学抑制剂，以及抑制调节性T细胞。6.权利要求5的方法，其中所述烷化剂是环磷酰胺。7.权利要求5的方法，其中所 述施用步骤还包括施用选自吲哚美辛、布洛芬、塞来昔布、罗非昔布及其组合的NSAID，以及逆转前列腺素所致的局部免疫抑制。8.权利要求7的方法，其中所述施用步骤还包括施用锌，以及提供T细胞功能的营养物。9.权利要求1的方法，其中所述施用步骤进一步限定为将所述来源于原代细胞的生物制品注射入所述患者的上皮中。10.权利要求1的方法，其中所述施用步骤进一步限定为将所述来源于原代细胞的生物制品表面应用至所述患者的上皮。11.权利要求1的方法，其中所述诱导步骤还包括使朗格汉斯细胞(LC)活化的步骤。12.权利要求11的方法，其还包括所述LC分泌活化T细胞和调节免疫的细胞...
【专利技术属性】
技术研发人员：詹姆斯·伊根，马丁·卡斯特，黛安娜·达席尔瓦，哈维·布兰德温，
申请(专利权)人：伊尔克斯治疗有限公司，詹姆斯·伊根，马丁·卡斯特，黛安娜·达席尔瓦，哈维·布兰德温，
类型：
国别省市：
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