一种人脂肪间充质干细胞库及其构建方法技术

本发明专利技术公开一种人脂肪间充质干细胞库及其构建方法，本发明专利技术人脂肪间充质干细胞库由下述步骤构建得到：（1）无菌采集人体脂肪；（2）油脂的去除；（3）胶原酶消化；（4）红细胞的裂解；（5）扩大培养；（6）冻存。人脂肪间质干细胞是脂肪组织中一类多能性干细胞，能诱导分化形成脂肪、骨、软骨、肌肉等组织类型细胞。脂肪组织来源广泛、取材容易、不涉及伦理问题、便于自体移植、给患者带来的痛苦较小；而且与骨髓等来源的间充质干细胞相比，脂肪来源间充质干细胞增殖快，分离效率高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种干细胞库及其构建方法，具体地说是涉及。
技术介绍
间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSC)是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层。间充质干细胞最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。间充质干细胞最早在骨髓中发现，随后还发现其存在于人体发生、发育过程的许多种组织中。目前，我们能够从骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉、肺、肝、胰腺等组织以及羊水、脐带血中分离和制备间充质干细胞，用得最多的是骨髓来源的间充质干细胞。但骨髓来源的间充质干细胞存在以下问题:随着年龄的老化，干细胞数目显著降低、增殖分化能力大幅度衰退；制备过程不容易质控；移植给异体可能引起免疫反应；取材时对患者有损伤,患者有骨髓疾病时不能采集，即使是健康供者，亦不能抽取太多的骨髓。这本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人脂肪间充质干细胞库的构建方法，其特征在于，包括下述步骤：（1）无菌采集人体脂肪；（2）油脂的去除：将脂肪剪碎，收集于离心管中，加入等体积的磷酸盐缓冲液，剧烈震荡后室温静置分层，收集上层部分用磷酸盐缓冲液洗涤；（3）胶原酶消化：加入等体积的胶原酶消化；加入等体积的含10%血清的DMEM?LG终止消化，充分混均后室温静置10min分层；去掉上层，离心，收集下层部分；（4）红细胞的裂解：加入2倍体积的红细胞裂解液重悬3?min，离心，弃上清；用PBS液清洗，40μm滤膜过滤后，向所得细胞中加含10%血清的DMEM?LG培养液，离心收集细胞，并于100U/mL青霉素/链霉素、10%?血清的DME...

【技术特征摘要】
1.一种人脂肪间充质干细胞库的构建方法，其特征在于，包括下述步骤: (1)无菌采集人体脂肪； (2)油脂的去除:将脂肪剪碎，收集于离心管中，加入等体积的磷酸盐缓冲液，剧烈震荡后室温静置分层，收集上层部分用磷酸盐缓冲液洗涤； (3)胶原酶消化:加入等体积的胶原酶消化；加入等体积的含10%血清的DMEM-LG终止消化，充分混均后室温静置IOmin分层；去掉上层，离心，收集下层部分； (4)红细胞的裂解:加入2倍体积的红细胞裂解液重悬3min，离心，弃上清；用PBS液清洗，40 μ m滤膜过滤后，向所得细胞中加含10%血清的DMEM-LG培养液，离心收集细胞，并于100U/mL青霉素/链霉素、10%血清的DMEM-LG中培养，即获得人脂肪间充质干细胞； (5)扩大培养:对人脂肪间充质干细胞进行扩大培养； (6)冻存:收集扩大培养后的人脂肪间充质干细胞于冻存液中，置液氮冷冻，按AB0/RH分型和HLA...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯文峰，列浦昌，佘志勇，方海庆，
申请(专利权)人：广州爱菲科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：