一种诱导间充质干细胞定向分化为成骨细胞的方法技术

本发明专利技术涉及一种使用具有半通透型支架隔离系统的培养小室，定向诱导间充质干细胞分化为成骨细胞的方法，使用Transwell支架培养系统，在嵌套内室接种MSCs，在外室接种成骨细胞，通过控制两种细胞的合理比例，以及适当时间加入特定的细胞因子，快速的诱导MSCs分化为成骨细胞。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，具体而言，是一种使用具有半通透型支架隔离系统的培养小室，定向诱导间充质干细胞分化为成骨细胞的方法。
技术介绍
近年来研究表明，成熟细胞在体外扩增困难，并且会很快老化进而失去增殖能力。 干细胞具有自我复制的能力以及向一种或多种成熟细胞分化的特征。因此体外培养干细胞可以作为组织工程学等生物研究种子细胞的新来源。干细胞分为胚胎干细胞和成体干细胞。胚胎干细胞具有全能性，可以分化成各种类型的细胞，但存在伦理问题和瘤化风险，因此应用受到了限制。成体干细胞取材方便、来源广泛，也可以分化成多种类型的细胞，且培养诱导容易，因此更加适合作为临床应用的种子细胞。间充质干细胞作为成体干细胞的一种，因为其分离培养技术最为成熟，目前应用最为广泛。间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSC)是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层。MSC最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。如间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种成骨细胞的定向诱导方法，所述方法包括如下步骤：步骤(1)、MSCs细胞的获取；步骤(2)、诱导用成骨细胞的获取；步骤(3)、定向诱导MSC细胞为成骨细胞：选用聚碳酯膜(PC)Transwell系统，Transwell系统的孔径0.4～3.0μm，优选3.0μm，Transwell系统可以是适配96孔板、48孔板、24孔板、12孔板或6孔板的系统，优选为适配6孔板的24mm直径的Transwell系统，接种前先用培养基DMEM含10％胎牛血清(FCS)将小室浸润37℃、1h；将上述步骤(1)获得的P3代MSCs细胞接种于Transwell嵌套内，接种细胞量为0.05～10x104cell/孔...

【技术特征摘要】
1.一种成骨细胞的定向诱导方法，所述方法包括如下步骤 步骤(I)、MSCs细胞的获取； 步骤(2)、诱导用成骨细胞的获取； 步骤(3)、定向诱导MSC细胞为成骨细胞 选用聚碳酯膜(PC) Transwell系统，Transwell系统的孔径0. 4 3. O ii m,优选·3.Oum, Transwell系统可以是适配96孔板、48孔板、24孔板、12孔板或6孔板的系统,优选为适配6孔板的24mm直径的Transwell系统，接种前先用培养基DMEM含10%胎牛血清(FCS)将小室浸润37°C、lh ； 将上述步骤(I)获得的P3代MSCs细胞接种于Transwell嵌套内，接种细胞量为0.05 10xl04cell/ 孔，接种密度 I 3xl05cell/ml ； 将上述步骤(2)获得的成骨细胞接种于作为底层细胞外室，接种细胞量为0.05 10xl04cell/孔，MSCs与成骨细胞接种比例为MSCs :成骨细胞=3 2 10 1，优选为MSCs 成骨细胞=4:1; 初始诱导培养基为DMEM (含10 % FCS)，培养温度37°C，C025 %，在初始诱导培养基培养第I 7天时，优选为第3天时，向初始诱导培养基中加入成纤维细胞生长因子(FGF)，FGF浓度为I 100pg/ml,优选10pg/ml ； 步骤(4)、继续培养至第8 12天,优选为第10天,...

【专利技术属性】
技术研发人员：安沂华，董健伸，
申请(专利权)人：安沂华，
类型：发明
国别省市：