本发明专利技术公开了一种预测前列腺癌易感性的试剂盒，属于生物技术领域。本发明专利技术通过提取宿主细胞的基因组DNA，测定受试者的GPRC6A基因第六外显子上rs6901250位点的基因型，预测受试者对前列腺癌的易感性；GPRC6A基因外显子上的rs6901250的基因型为AA时，受试者的易感性最高；rs6901250的基因型为AG或GG时，受试者的易感性较低。本发明专利技术的优点是：首次阐述了rs6901250基因多态性位点与前列腺癌的相关性，提供了一种预测前列腺癌易感性的方法，该方法可用于前列腺癌的早期预防诊断、辅助诊断，还可以用于新药研发。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种预测前列腺癌易感性的方法与试剂盒，更具体的说是通过测定与前列腺癌相关基因GPRC6A的第六外显子上rs6901250位点多态性预测受试者对于前列腺癌的易感性，该方法可用于疾病的辅助诊断和新药开发，属于生物
技术介绍
前列腺癌(prostate cancer, PCa)是发生在男性生殖系统中最常见的恶性肿瘤。美国在对1975-2006癌症发病率进行统计后，估算2010年PCa新发病例为217，730例，位居男性好发肿瘤中第一位，PCa的死亡人数估计为32，050，在男性肿瘤死亡率中位居第二。年龄是PCa的一个重要风险因素，年龄45岁以下的基本很少发病，随年龄的增长而增加。美国癌症协会统计，40岁以下的男性PCa发病率为1/8499,40-59岁男性中为1/38，60_69岁男性中为1/15，70岁以上男性中则为1/8。随着我们国家人口老龄化，PCa的发病率在我国正逐年上升，上海标化发病率从1973 1975年的1. 8/10万上升至1997 1999年的5.5/10万，贵州省南部地区部分县市PCa的发病率已从1994 1998年的1. 72/10万上升到2004 2008年的4. 28/10万，成为威胁我国男性健康的公共问题。目前进行PCa遗传病因研究，多采用大规模全基因组关联研究(Genome-ffideAssociation Studies, GffAS)和小样本多人群中的验证，并且GWAS鉴定的多个PCa易感SNPs已在多个不同人群中被复制确定，证明了 SNPs作为基因组标志的关联分析方法在PCa遗传研究中的有效性。SNPs是指染色体基因组水平上单个核苷酸变异引起的DNA序列多态性，在人群中的频率需>1%，SNPs是双等位基因标记，这种单碱基变化中有70. 1%为同型碱基之间的转换如G/A或T/C，29. 1%为发生在嘌呤和嘧啶之间的颠换。SNPs包含了已知多态性的80-90%，是最常见的遗传变异。 由于生存的选择压力导致SNP在单一基因和整个基因组中的分布呈不均匀性。SNPs在基因非编码区的数量是编码区的4倍，总数可达3百万个。SNPs以其密度高(平均每Ikb就有I个)、代表性强(位于基因内部的SNPs可能直接影响蛋白质结构或表达水平)、遗传稳定性好(同微卫星多态性比较而言)、易于自动化分析(因SNPs在人群中为双等位基因标记，可简单以“+ / 一或1/0”直接分型)等特点成为很好的遗传标志。GPRC6A (G 蛋白偶联受体 C 家族 6 组 A 亚型)(G protein-coupledreceptor, familyC, group 6, member A, GP RC6A)基因是 Wellendorph P 等在 2004 年发现提出的，编码G蛋白偶联受体C家族6组A成员，G蛋白偶联受体(G protein-coupledreceptors, GPCRs)是一类有7次跨膜区域，是人类基因组上由约近千个基因编码的大的受体家族，在许多生理病理进程包括发育、造血、血管生成、炎症、精神障碍、代谢疾病及病毒感染等中起重要作用。研究表明许多GPCRs和他们的配体参与肿瘤发生发展，如内皮缩血管肽类通过与GPCRs相互作用介导组织分化、发育和细胞增殖，通过增强细胞增殖抑制凋亡和调节基质成分在PCa和其他肿瘤中起重要作用。许多趋化因子受体如CXCR4、CXCR2、CCR7等在许多肿瘤表达上调，在肿瘤生长、侵袭和转移中起重要作用。许多被称为内皮分化基因家族的GPCRs是溶血磷脂酸或鞘氨醇-1-磷酸盐的受体，调节细胞的增殖、迁移和生存。如肺腺癌或肺腺癌3期时许多化学因子受体、神经肽受体、激素受体等PAR2(GPR11)、Edg2 (GPR2)等GPCRs表达上调；乳腺癌或乳腺癌3期时PAR2和CXCR-4表达增加；PCa时CXCR-3、GPR68等在PCa组织表达高于正常前列腺组织，其他肿瘤胃癌、转移黑色素瘤等的发展中也有多种GPCRs参与。据估计，市场上接近30%的药物靶标是GPCRs或者与其相关的信号通路，其研发依据部分为许多疾病与GPCRs的变异和多态性关联，因此研究GPCRs与肿瘤包括GPCRs的多态性与肿瘤的关联可以为以干扰GPCRs或其介导的信号通路为基础的药物研发提供理论依据。GPRC6A基因的功能已有研究，GPRC6A广泛表达在脑和外周组织，在睾丸、肾脏、骨骼肌中高表达。GPRC6A敲除的小鼠表现为代谢综合征成骨细胞缺陷介导的骨钙化，肾脏处理钙磷异常，脂肪肝，糖耐受和类固醇合成紊乱等性状。最近的体内体外GPRC6A功能研究也表明其是一个调节PCa生长和肿瘤发展相关的靶分子。再者，GPRC6A是骨-胰腺分泌环中调节骨钙素应答的基因，骨-胰腺分泌环调节胰岛素信号通路，而胰岛素受体和胰岛素样生长因子也在许多研究中被证明与PCa相关。从GPRC6A可以调节激素和影响胰岛素信号通路这两方面支持基因上位点的变异可能会影响PCa的易感性。结合以上对GPRC6A功能的分析，我们推测GPRC6A基因为PCa易感基因并且选择了位于其的rs6901250，在273个PCa患者和606个对照人群中分型后进行关联分析，结果确定了 rs6901250与中国人群PCa关联。rs6901250在染色体上位置为117，220，717，位于GPRC6A的第六外显子上，该外显子有1166个bp，rs6901250是距离该外显子5’端388bp的SNP位点，此位点所在基因组位置可能会导致转录mRNA，及翻译氨基酸序列发生改变，进而影响蛋白质行使功能。经查询检索，截至目前，GPRC6A基因rs6901250与PCa风险还未见有报道。
技术实现思路
本专利技术的主要目的是提供一种预测前列腺癌易感性的方法。本专利技术的第二个目的是提供一种预测前列腺癌易感性的试剂，包括PCR引物和含有该引物的试剂盒。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案一种检测前列腺癌易感性的核苷酸序列，为序列表SEQ ID No.1所示核苷酸序列。所述核苷酸序列为GPRC6A基因第六外显子上包含单苷酸多态性位点rs6901250的核苷酸片段。图1为GPRC6A基因结构及rs6901250多态性变异位点的示意图，GPRC6A基因包含有6个外显子，rs6901250位点标在GPRC6A基因图中第6外显子的相应位置。所述单苷酸多态性位点rs6901250的基因型为AA时，前列腺癌易感性最高；基因型为AG或GG时，前列腺癌易感性较低。一组检测前列腺癌易感性的引物，能扩增得到GPRC6A基因第六外显子上包含单苷酸多态性位点rs6901250的检测前列腺癌易感性的核苷酸序列。所述引物的核苷酸序列分别为序列表SEQ ID No. 2和序列表SEQ ID No. 3所示。一种前列腺癌易感性基因的检测方法，包括如下步骤(I)抽提样品的基因组DNA，扩增GPRC6A基因第六外显子上包含单苷酸多态性位点rs6901250的核苷酸片段；(2)检测步骤(I)产物中单苷酸多态性位点rs6901250的基因型，基因型为AA时，前列腺癌易感性最高；基因型为AG或GG时，前列腺癌易感性较低。所述步骤(I)中的核苷酸片段为序列表SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，rs本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测前列腺癌易感性的核苷酸序列，其特征在于：为序列表SEQ?ID?No.1所示核苷酸序列。
【技术特征摘要】
1.一种检测前列腺癌易感性的核苷酸序列，其特征在于为序列表SEQ ID No.1所示核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的检测前列腺癌易感性的核苷酸序列，其特征在于所述核苷酸序列为GPRC6A基因第六外显子上包含单苷酸多态性位点rs6901250的核苷酸片段。3.根据权利要求2所述的检测前列腺癌易感性的核苷酸序列，其特征在于所述单苷酸多态性位点rs6901250的基因型为AA时，前列腺癌易感性最高；基因型为AG或GG时，前列腺癌易感性较低。4.一组检测前列腺癌易感性的引物，其特征在于能扩增得到权利要求1所述的检测前列腺癌易感性的核苷酸序列。5.根据权利要求4所述的一组检测前列腺癌易感性的引物，其特征在于所述引物的核苷酸序列分别为序列表SEQ ID No. 2和序列表SEQ ID No. 3所示。6.一种前列腺癌易感性基因的检测方法，其特征在于包括如下步骤 (1)抽提样品的基因组DNA，扩增GPRC6A基因第六外显子上包含单苷酸多态性位点rs6901250的核苷酸片段； (2)检测步骤(I)产物中单苷酸多态性位点rs6901250的基因型，基因型为AA时，前列腺癌易感性最高；基因型为AG或GG时，前列腺癌易感性较低。7.根据权利要求6所述的前列腺癌易感性基因的检测方法，其特征在于所述步骤(I)中的核苷酸片段为序列表SEQ ID No.1所不的核苷酸序列，rs6901250...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨泽，赵承孝，刘铭，王建业，史晓红，魏东，朱小泉，杨帆，张耀光，梁思颖，王飞，唐雷，孙亮，
申请(专利权)人：卫生部北京医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。