一种检测个体抗氧化遗传易感性的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种检测个体抗氧化遗传易感性的试剂盒。该试剂盒包括同时检测过氧化氢酶基因（ＣＡＴ）上ｒｓ７６９２１４号ＳＮＰ位点、还原型辅酶叶绿醇基因（ＣＹＢＡ）上ｒｓ４６７３号ＳＮＰ位点、内皮型一氧化氮合成酶基因（ＮＯＳ３）上ｒｓ１７９９９８３号ＳＮＰ位点、胞外过氧化物岐化酶基因（ＳＯＤ３）上ｒｓ１７９９８９５号ＳＮＰ位点、对氧磷酯酶１基因（ＰＯＮ１）上ｒｓ６６２号ＳＮＰ位点的特异性引物对及特异性荧光探针对、用于荧光定量ＰＣＲ检测的常规组件等。本发明专利技术的试剂盒通过同时检测与抗氧化能力密切相关的ＣＡＴ、ＣＹＢＡ、ＮＯＳ３、ＳＯＤ３、ＰＯＮ１的单核苷酸多态性位点基因型来评估个体抗氧化遗传易感性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本专利技术涉及一种检测个体抗氧化遗传易感性的试剂盒， 通过同时检测与抗氧化能力密切相关的过氧化氢酶基因(CAT)、还原型辅酶叶绿醇基因(CYBA)、内皮型 一氧化氮合成酶基因(N0S3)、胞外过氧化物岐化酶基因(S0D3)、对氧磷酯酶1基冈(P0N1)的单核苷酸 多态性位点基因型来评估个体抗氧化遗传易感性。
技术介绍
人体内存在着一个非常重要的平衡系统氧化一还原系统。这一系统调节着体内氧C3由基的产生和代 谢，维持着体内适当的氧化能力和氧t3由基的清除能力，从而保障了生命活动的进行。氧化一还原系统失 衡、过多氧自由基的积累会引起一系列的心脑血管、神经系统、消化系统等疾病以及过早的衰老。因此抗 氧化能力在人的生命活动中十分重要。遗传体质不同的人在相同的环境下有着不同水平的抗氧化能力，面对不同的抗氧化能力缺陷风险需要 采取不同的干涉手段。因此，综合利用现代科学研究成果，开发一项基F分子遗传基础的抗氧化易感遗传 风险检测及个性化干预提示产品会对由于抗氧化能力缺陷而引起疾病的发生起到预警、个性化防治的提示 作用，具有很强的社会意义和市场前景。目前，涉及抗氧化能力的一些基因，己经被很好的进行研究。其作用机制、生化功能、信号通路、调 控、转录等等方面都有明确可靠的研究结果；研究手段、方法、仪器设备和试剂等都已经发展到了一个相 当的高度。目前，经证实并且机理研究清楚的与抗氧化能力密切相关的基冈有过氧化氢酶基因(CAT)、还 原型辅酶叶绿酵基因(CYBA)、内皮型一氧化氮合成酶基因(N0S3)、胞外过氧化物岐化酶基因(S0D3)、对 氧磷酯酶l基因(P0N1)。过氧化氢酶CAT全称catalase，编码此酶的CAT基因位f 11p13，全长33130bp,包含13个外显子， niRNA长2294bp，编码528个氨基酸。过氧化氢酶是人体内一种天然的、很重要的抗氧化酶，在R0S的清 除过程中作为S0D (超氧化物岐化酶)的下游抗氧化蛋白，通过催化超氧阴离子Q由基的自身氧化还原反 应，有效清除自由基,维持体内自由基和氧化还原状态的动态平衡，以避免损伤机体的组织细胞。随着对 许多疾病的研究深入，研究者发现体内的氧化还原状态与常见的一些疾病关系发生有着越来越紧密的联 系，如高血压，动脉粥样硬化，亨廷顿氏综合症(Hungtington' s),阿尔茨海默病(Alzhemeimer)等。 由于其抗氧化的特性，过氧化氢酶基因目前己成为心血管疾病研究的候选基。rs7692M是位丁-过氧化氢酶 基因启动子区域上的一个A/G多态，即A-844G多态，在世界人群中该多态的分布为G: A=0. 40: 0.60。有 研究表明，此位点的多态性可导致下游过氧化氢酶的表达水平的不同，从而影响与原发性高血压的发病有 关的脂质过氧化等生理生化反应。通过分别将含有-844A和-844G的的CAT基因启动子的片断克隆到pGL3 载体中，转染293细胞，再进行荧光素酶检测，最后发现此多态性位点为G时的荧光素酶表达水平比为A 时要高，而且具有显著性差异。关于这种由A和G造成的转录调控水平的差异，研究表明可能是由T两种 启动子结合了两种不同的转录因子，或对同一种转录因子的亲和力不同。A等位基冈含有MZF1和AP2的结 合位点，AP2调节表皮和神经特异基因的表达，而MZF1参与造血过程的调节；G等位基因含有Ikaros-2 和LYK-1的结合位点，Ikaros-2是淋巴细胞发育的土要调节冈子。此项研究表明此多态性位点的存在会影 响卜游过氧化氛酶的表达。CYBA为NAD(P)H氧化酶编码基因，是血管平滑肌细胞和内皮细胞氧G由基最重要的来源。由氧Q由基 诱发的氧化应激反应，参与了高血压、动脉粥样硬化、心肌梗死等心血管病的发生发展。CYBA编译的酶是 中胚层来源的多种细胞膜上的一组酶类。它不仅存在于巨噬细胞、神经细胞，而且还存在于心血管系统的 内皮细胞、平滑肌细胞和血管外膜成纤维细胞。NAD(P)H氧化酶系统是一个多个亚单位组成的酶的复合体， 包括P22phox 、 P47phox 、 P67phox 、 Rac和gp91phox或其他Nox家族。而在所有的NAD(P)H氧化酶中 P22phox亚单位是决定酶活性的关键部分。NADP在NAD(P)H氧化酶作用下形成MD(P)H,并通过P22phox 将电子传递给氧，形成超氧阴离子或其衍生物，此过程是血管壁上活性氧的主要来源途径。rs4673是位于 第16号染色体上CYBA基因上的一个C/T多态，引起基因编码蛋A的第72个氨基酸由His变为Tyr。在世界人群频率C: 0.72T: 0.28;亚洲人群中C: 0.93 T: 0.07。 CYBA基因第242位核苷酸的C点突变为T， 使氨基酸序列第72位组氨酸被酪氨酸取代，组氨酸是血红蛋白的结合位点，C-*T突变与NAD(P)H氧化海 功能降低密切相关，而NAD(P)H氧化酶在冠心病等心脑血管疾病发生发展中起着重要的作用。内皮型一氧化氮合成酶NOS3即nitric oxide synthase 3 (endothelial cell),常用名为eNOS。 eNOS 主要分布于冠状血管及心腔面的内膜，主要功能是参与精氨酸和脯氨酸代谢，并催化生成(N0)。 一氧化 氮是一种内皮松弛因子，具有舒张血管、调节血流、抑制血管平滑肌细胞增殖、抑制血小板和白细胞粘附 等重要功能，参与了多种疾病的病理生理过程。在该基因第7外显子上，894位碱基G突变成T (G894T， rsl799983),相应蛋白产物第298位上的谷氨酸则被替换成大冬氨酸(Glu298Asp)，这个位点的突变导致 eNOS功能受损，N0产生减少，血管紧张性增高而引起高血压。2004年，van Onna等人发现了在动脉动脉 粥样硬化患者中，eNOS基因298Asp多态要明显高f对照组(0R=1. 44， 95%CI=1. 00-2. 09)。动脉粥样硬 化与高血压经常是相伴发生的；而且催化的动脉血管，更是诱发高血压的原因。2005年，Zhu等人在美国 人群中，证实了 eN0S基因的298Asp多态，可以影响到高血压发生的性别偏向和发病年龄，以及高血.压发 病风险的增加。Pereira等人于2006年的最新发表的研究显示，eNOS基因的298A印多态在高血压患者中 的分布，依据血压高低有区别。在血压值高T正常血压的50^的病人中，298Asp多态表现除了显著的相 关性。同时，他们还指出，298Asp多态会严重影响到病人的血脂含量。最后，他们得到结论是，298Asp 多态会影响到血脂的量，并调节血压。贾崇奇等对中国人群研究了内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)基因第7 外显子G894T(Glu298Asp)变异与超重交互作用对早发冠心病的影响。发现eNOS基因G894T变异与超重在 早发冠心病的患病中存在明显的正相加模型交互作用，使早发冠心病患病危险性增加近3倍；G894T变异 与超重同时存在时，早发冠心病患病危险性中约27%是由于-两者交互作用所导致。S0D3 (Superoxide dismutase , extracellular)基因为胞外过氧化物岐化酶编码基因。S本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测个体抗氧化遗传易感性的试剂盒，其特征在于：包括同时检测过氧化氢酶基因上ｒｓ７６９２１４号ＳＮＰ位点、还原型辅酶叶绿醇基因上ｒｓ４６７３号ＳＮＰ位点、内皮型一氧化氮合成酶基因上ｒｓ１７９９９８３号ＳＮＰ位点、胞外过氧化物岐化酶基因上ｒｓ１７９９８９５号ＳＮＰ位点、对氧磷酯酶１基因上ｒｓ６６２号ＳＮＰ位点的特异性引物对及特异性荧光探针对、Ｔａｑ酶、ｄＮＴＰ混合液、ＭｇＣｌ↓［２］溶液、荧光定量ＰＣＲ反应缓冲液、去离子水。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：冯哲民，邹祖烨，
申请(专利权)人：上海主健生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：31[]