缢蛏抗菌肽基因的PCR重组制备抗菌肽的方法与用途技术

本发明专利技术是一种缢蛏抗菌肽基因的PCR重组制备抗菌肽的方法，它以缢蛏血窦淋巴细胞为材料，从中提取总RNA，设计特异引物，采用嵌套PCR方法，获得258bp大小的scp基因，将其插入pPICZαA表达载体，转入毕赤酵母GS115,得到表达菌株LGS-3，通过表达条件优化，获得其最佳表达条件为温度28℃，甲醇浓度1%，诱导表达时间为72h。诱导表达的产物抗菌肽对凡隆气单胞菌具有较强的抑制活性。将其应用于泥鳅养殖，饲料中添加0.5%的抗菌肽制剂，可使泥鳅在投放凡隆气单胞菌的情况下存活率提高48%左右，产量的增加28.55%左右。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种抗菌肽的方法与用途，特别是一种缢蛏抗菌肽基因的PCR重组制备抗菌肽的方法与用途。
技术介绍
随着水产养殖业的迅速发展，水产病害日趋严重，防治过程中抗生素甚至一些禁用药物的大量长期使用，不仅威胁食品安全，而且破坏了水生环境，许多细菌产生了明显的耐药性，影响了水产养殖业的可持续性发展。滥用抗生素也使我国水产品出口屡屡受阻，给水产业造成了巨大损失。因此寻求抗菌力强、抗菌谱广、活性稳定的抗菌素替代品成为防治水产病害的当务之急。抗菌肽是生物体内产生的一类对抗外源性病原体致病作用的防御性肽类活性物质，具有广谱抗菌活性，同时有“传统抗生素”无法比拟的优越性不会诱导抗药菌株的产生，有希望成为新一代抗菌剂。抗菌肽添加到养殖鱼类的饲料中，不仅可以抑制和消灭水生环境中的病原微生物，提高鱼体的免疫能力，而且可以避免抗生素在鱼体中的蓄积，提高水产品质量。目前国内外研究以从生物体分离纯化抗菌肽为主，此方法得到的抗菌肽量少成本较高，因此很难得以广泛应用。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种新的对水产疾病具有防治效果的缢蛏抗菌肽基因的PCR重组制备抗菌肽的方法。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种缢蛏抗菌肽基因的PCR重组制备抗菌肽的方法，其特征在于，其步骤如下：（1）收集缢蛏血淋巴10?mL，4℃、4000?rpm下离心25?min得到血淋巴细胞，弃上清液，收集沉淀物于1.5?mL?RNase?free的EP管，加入1?mL?Trizol，吹打混匀后室温静置5?min，每管加500?μL氯仿，振摇30s，冰浴3?min，然后在4℃，12000?rpm下离心15?min，吸取上清液，转移至另外一支RNase?free?的EP管，用体积比为24：1的氯仿：异戊醇抽提至无蛋白沉淀，吸取上清液，加4℃预冷的500?μL异丙醇，混匀，冰上静置l0?min，4℃，12000?rpm离心15?...

【技术特征摘要】
1.一种缢蛏抗菌肽基因的PCR重组制备抗菌肽的方法，其特征在于，其步骤如下 (1)收集缢蛏血淋巴10mL，4°C、4000 rpm下离心25 min得到血淋巴细胞，弃上清液，收集沉淀物于1. 5 mL RNase-free的EP管,加入I mL Trizol,吹打混勻后室温静置5 min,每管加500 μ L氯仿,振摇30s,冰浴3 min,然后在4°C, 12000 rpm下离心15 min,吸取上清液，转移至另外一支RNase-free的EP管,用体积比为24 1的氯仿异戍醇抽提至无蛋白沉淀，吸取上清液，加4°C预冷的500 μ L异丙醇，混匀，冰上静置10 min,4°...

【专利技术属性】
技术研发人员：李联泰，安贤惠，朱明，
申请(专利权)人：淮海工学院，
类型：发明
国别省市：