本发明专利技术涉及一种与脑血管狭窄有关的Ⅰ型神经纤维瘤NF1基因突变核苷酸序列及其应用，本发明专利技术的一种与脑血管狭窄有关的核苷酸序列，其与NF1中包含的相应核苷酸序列相比在以下位置发生了突变：c.541C>T，自NF1基因编码区第1位碱基起算，所述突变导致患者发生脑血管狭窄。研究发现，该无义突变存在于所有合并脑血管狭窄的NF1家系患者，但不存在于NF1家系中正常的人群中。该突变点可为类似临床症状脑血管狭窄动物模型的建立提供了依据，并进一步为散发的NF1患者潜在的脑血管狭窄进行超早期诊断及预防。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种与脑血管狭窄有关放入核苷酸序列，具体涉及一种与脑血管狭窄有关的分离自I型神经纤维瘤NFl基因的突变核苷酸序列及其在脑血管狭窄诊断中的应用，属于疾病诊断领域。
技术介绍
脑血管狭窄是危害人类健康的常见病，可导致高致残率、高致死率的缺血性脑卒中。其发病机制不完全清楚，从而使脑血管狭窄的防治陷入“瓶颈”。目前，尽管随着脑卒中I级预防、2级预防知识的普及，动脉支架、颈动脉内膜剥脱及颅内外动脉搭桥技术的应用，部分患者的脑缺血症状得到缓解，致残率、致死率在一定程度上得到控制，但由于脑血管狭窄的发病原因、发病机制尚不完全清楚，而目前针对脑血管狭窄的防治仅仅处于疾病下游水平，其结果是治标不治本。同时近年来脑血管狭窄的发病率越来越高，发病年龄越来越趋于年轻化，而且常常找不到发病诱因，所以基因水平寻找到脑血管狭窄的发生机制，从根本上降低该病的发生率，是防治脑血管狭窄的新的突破口之一。近年来，Nfl基因与血管性疾病的关系正在成为新的研究热点，但Nfl基因突变位点多变、类型不定，突变与脑血管狭窄之间的关系尚不明确。NFl是一种常见的常染色体显性遗传病，病因明确，即由17号染色体上的Nfl基因突变所致。在自然人群中的发病率约为1/3500，20°/Γ60%有家族史，发病无明显的性别差异。临床表现主要为累及全身皮肤的多发性神经纤维瘤，同时NFl还可累及多个器官系统，发生肾动脉狭窄、脑血管狭窄、视神经胶质瘤、脊柱侧凸、椎管内或颅内肿瘤等。1989年，Nfl基因被定位于人类染色体17qll.2，并于1990年克隆出该基因。Nfl基因是人类基因组中较大的基因，全长350kb，含60个外显子，其转录部分的长度约ll-13kb。NFl基因在Genbank的登录号为NM_00104 2492. 2。从功能上来看，Nfl基因是抑癌基因，其编码的由2838个氨基酸组成的蛋白质即神经纤维瘤蛋白(neurofibromin)是一种肿瘤抑制物，在机体多个组织与器官均有表达，如平滑肌细胞、血管内皮细胞及施旺细胞。神经纤维瘤蛋白的主要功能域(GAP-related domain, GRD)由第21_27a外显子编码，与GTP酶激活蛋白家族有同源性，能够激活体内的Ras-GTPase，导致结合状态的GTP水解，Ras失活，因此GRD是Ras信号转导的一种负调节因子，而Ras是机体的癌基因，如Nfl基因发生突变，神经纤维瘤蛋白的质或量发生改变，Ras活性增高，从而可产生神经纤维瘤甚至恶性周围神经鞘瘤(Malignant Peripheral nerve sheath tumor, MPNST)。Nfl基因结构复杂，突变位点多变，突变类型不定，且在Nfl全长基因存在大量假基因，因此，Nfl基因突变的筛查仍将是一个具有挑战性的工作。根据人类基因突变数据库(HGMD)显示(http:1l www. hgmd. org/),截止到2011年4月，共发现Nfl基因的1273个突变，包括错义突变、剪切突变、插入、缺失及复杂重排等，但突变缺乏明显的热点区域，大多数散发病例各自携带特异的突变位点，由于不同的NFl患者临床症状不一，所以甚至在同一个家系患者中的不同成员之间也存在不同的突变位点及突变类型。在2000年以前，很少有人关注Nfl基因与血管性疾病的关系，直到近几年，Nfl基因与脑血管病之间的可能存在的关联也多为单纯的临床病例报道，对于Nfl基因与血管之间的关系鲜有深入研究，不过人们发现NFl伴发的血管病变病程缓慢，呈进行性损害。患者早期症状隐匿，可无不适症状，随着病情发展，出现的临床症状可因病变累及血管的部位和损伤程度而不同。但目前尚未找到Nfl基因与脑血管狭窄相关的突变位点及突变类型。在1993年，Ahlgren-Beckendorf等对Nfl与血管病变的关系进行了初步的实验研究，他们检测到血管壁上有Nfl的表达，并且发现Nfl催化域的表达和替代剪切模式在血管平滑肌细胞增殖过程中不断发生着改变，提示Nfl在血管平滑肌的发育和血管病理过程当中可能发挥着一定的作用，但没有继续深入的探讨。两年后，Norton再次证实了血管内皮细胞和平滑肌细胞中有神经纤维瘤蛋白的表达，目前已认为动脉壁的内在损害是NFl患者的重要表现，其血管病理过程中可能是由于神经纤维瘤蛋白的功能改变所致。2006年，Li等人发现神经纤维瘤蛋白是初级血管平滑肌细胞RAS-诱导信号通路的一个新的负调控子，Nfl基因突变可导致神经纤维瘤蛋白的质量发生改变，对RAS-信号通路抑制作用减弱，ras活性增强，从而导致神经纤维瘤及血管病的发生。在Nfl+/-鼠模型中发现失控的RAS-信号通路可致新生血管内膜增厚而致血管狭窄的发生。从Nfl+/-小鼠及缺乏神经纤维瘤蛋白的病人中取得血管内皮细胞和平滑肌细胞，并且鉴定了一个独立的Ras效应器通路，该通路严格地受到神经纤维瘤蛋白的调控，从而限制着血管平滑肌细胞的增殖和迁移，维持着血管壁血管平滑肌的稳定。同期，对于Nf+/-杂合突变小鼠神经纤维瘤中的高度血管化及小鼠体内血管发生的增加，Li和Munchhof探讨了神经纤维瘤蛋白调控新生血管形成的生化机制和其在内皮细胞中的功能，发现不论在体内还是体外，缺乏神经纤维瘤蛋白的内皮细胞的增殖和迁移发生了改变，这个改变与神经纤维瘤蛋白源的生长因子有关。2007年，针对NFl患者高发的心血管疾病、脑血管梗塞性疾病，Xu等人获得平滑肌细胞Nfl基因敲除小鼠(NflsmKO)，这些小鼠出现了相应的血管损害，内膜血脯氨酸增多以及Ras的下游效应器-丝裂原活化的蛋白激酶异常活化。如果在NflsmKO小鼠平滑肌细胞表达NflRas调控域(GTP酶活化的相关蛋白域)，那么内膜血脯氨酸增多症状可以得到恢复。体外实验发现Ras效应器活性同样恢复正常，提示平滑肌细胞受损后，Nfl调控Ras在平滑肌细胞的增生过程中具有关 键作用。2008年，Lasater等人总结发现Nfl+/-小鼠血管内有新内膜形成，血管平滑肌细胞的过度增生，在血小板源生长因子(platelet-derived growthfactor-BB, PDGF-BB)的刺激下高度活化Ras-Erk信号转导通路，提示神经纤维瘤蛋白通过PDGF-BB-Ras-Erk信号轴控制着血管壁内环境的稳定，包括血管内皮细胞(ECs )和血管平滑肌细胞(VSMCs)。动脉受损后TOGF-BB由血管内局部的血小板或其它细胞释放。也就是说这个信号通路上的任一环节受抑制，都会有利于与Nfl基因相关的血管性疾患的恢复，提示Nfl基因是血管性疾病的一个潜在治疗靶点。Milewicz同样提出Nfl基因的突变是多种增生性血管疾病发生的重要因素。为了探讨Nfl缺失所致血管性疾病的具体内环境变化，Lasater等认为神经纤维瘤蛋白可调控每种类型细胞的功能。然后通过在小鼠的内皮细胞，血管平滑肌细胞，及骨髓衍生细胞(BMDC)细胞中敲除Nfl基因，以观察究竟那种类型的细胞对小鼠体内新的内膜形成起到了关键作用，最后证实了在BMDC中Nfl的失活对新生内膜的形成是必要的，对Nfl+/-外周血分析发现血管内在新生血管内膜处有显著的巨噬细胞的聚集，提示炎症反应的存在，这与血管炎症及血管闭塞性疾患明显相关，再次本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种与脑血管狭窄有关的Ⅰ型神经纤维瘤NF1基因突变核苷酸序列，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列选自下组：(a)编码脑血管狭窄突变蛋白多肽的核苷酸序列；(b)与(a)中所述核苷酸序列互补的核苷酸序列，其中所述编码脑血管狭窄突变蛋白多肽的核苷酸序列与NF1中包含的相应核苷酸序列相比在以下位置发生了突变：c.541C>T，自NF1基因编码区第1位碱基起算，所述突变导致患者发生脑血管狭窄。
【技术特征摘要】
1.一种与脑血管狭窄有关的I型神经纤维瘤NFl基因突变核苷酸序列，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列选自下组(a)编码脑血管狭窄突变蛋白多肽的核苷酸序列；(b)与(a)中所述核苷酸序列互补的核苷酸序列，其中所述编码脑血管狭窄突变蛋白多肽的核苷酸序列与NFl中包含的相应核苷酸序列相比在以下位置发生了突变c. 5410T,自NFl基因编码区第I位碱基起算，所述突变导致患者发生脑血管狭窄。2.如权利要求1所述的核苷酸序列，其含有选自下组的核苷酸序列(I)编码具有SEQ ID NO :2所示氨基酸序列的多肽的核苷酸序列；(2) SEQ ID NO :1所示的核苷酸序列；(3) SEQ ID NO :3所示的核苷酸序列。3.一种与脑血管狭窄有关的多肽，它包括具有SEQ ID NO :2所示氨基酸序列的多肽， 或其含有氨基酸序列SEQ ID NO :2的保守性变异多肽或其活性...
【专利技术属性】
技术研发人员：凌锋，梁建涛，霍丽蓉，鲍遇海，
申请(专利权)人：首都医科大学宣武医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。