本发明专利技术涉及基因工程技术领域，是一种双峰驼UCP2蛋白，该双峰驼UCP2蛋白基因、重组蛋白及其克隆方法具有SEQIDNO.1中从核苷酸第59-1852位的核苷酸序列。本发明专利技术双峰驼UCP2蛋白是一种具有多种生物学功能的蛋白质，它在能量代谢和脂肪酸代谢中有着关键的调控作用,因此,通过对UCP2从基因、蛋白质和抑制剂等多方面的研究,必然会为肥胖、胰岛素抵抗综合症、Ⅱ型糖尿病等疾病的预防和治疗带来新的希望，因此本发明专利技术具有很大的应用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程
，是一种双峰驼UCP2蛋白基因、重组蛋白及其克隆方法。
技术介绍
解耦联蛋白2 (UCP2)是1997年发现的一种新的解偶联蛋白，它是线粒体内膜载体家族的一员。与其类似物UCPl相比，UCP2在棕色脂肪组织中含量较低，但在体内分布广泛，因而引起人们的关注。UCP2的主要功能是控制ATP合成，即通过介导线粒体质子泄漏，将质子驱动中贮存的能量以热能的形式释放，最终引起ATP生成减少。此外，UCP2还可调节脂肪酸代谢、控制活性氧的产生。UCP2在调节大脑功能，抑制细胞死亡方面也起着重要作用。UCP2基因定位在与肥胖和高胰岛素血症显示连环遗传的染色体区1，UCP2在参与脂肪和能量代谢的组织中表达，因此促使人们对其与代谢紊乱尤其是2型 糖尿病的关系产生了兴趣。人UCP2基因定位于染色体llql3。UCP2基因结构于1998年阐明，其蛋白由309个氨基酸残基组成，相对分子质量约为32k，理论的等电点为9. 74。其序列与其类似物UCPl和UCP3分别有59 %和73 %的相似性。人UCP2基因与鼠相同，均含8个外显子和7个内含子，分别跨越8和6. 3 kb长的区域。与其他线粒体载体家族成员相似，UCP2有两种转运模式一是利用对基质特异的载体，另一种则是通过特异性较低的通道。根据目前的研究，若能提高UCP2在特异组织中的表达，可减少脂肪堆积而对抗肥胖，对非乙醇性脂肪肝亦有保护作用，同时也是一种简单有效的减肥方法。若能选择性减少β细胞中UCP2的表达，可成为防治2型糖尿病的一个新的靶点。由于肥胖和2型糖尿病是多基因作用的结果，除UCP2基因的效应外，还应积极探索其它相关基因的作用，以及这些基因是否与UCP2基因有协同作用。在动物方面UCP2基因遗传变异方面的报道较少，至今尚未发现克隆获得双峰驼UCP2基因编码蛋白序列以及对动物UCP2基因进化规律研究的报道。UCP2在能量代谢和脂肪酸代谢中有着关键的调控作用，因此，通过对UCP2从基因、蛋白质和抑制剂等多方面的研究，必然会为肥胖、胰岛素抵抗综合症、II型糖尿病等疾病的预防和治疗带来新的希望。双峰驼有较强的耐旱和沉积脂肪能力，尤其是在水草充足的季节，驼峰能在短时间内沉积大量脂肪，很适合进行脂类和能量代谢研究。
技术实现思路
本专利技术提供了一种双峰驼UCP2蛋白基因，该双峰驼UCP2蛋白基因的重组蛋白编码序列是一种在线粒体中控制ATP合成，调节脂肪酸代谢、控制活性氧的产生等密切相关的基因，其核苷酸序列与牛的UCP2蛋白核酸序列ΝΜ_001033611.1具有92%的相似性。本专利技术的技术方案之一是通过以下措施来实现的一种双峰驼UCP2蛋白基因，其特征在于该基因具有SEQ ID NO.1中从核苷酸第59-1852位的核苷酸序列，其同牛UCP2基因蛋白编码序列同源性为92. 00%，编码氨基酸序列同源性为95. 00%。本专利技术的技术方案之二是通过以下措施来实现的一种双峰驼UCP2蛋白基因的重组蛋白。下面是对上述专利技术技术方案的进一步优化或/和改进 上述重组蛋白具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。上述重组蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO. 2。上述重组蛋白通过设计一对引物从双峰驼UCP2蛋白中得到双峰驼UCP2蛋白基因，该引物对的核苷酸序列正向引物为SEQ ID NO. 3和反向引物为SEQ ID NO. 4，其序列信息如下SEQ ID NO. 3 :5’ - ATGGTTGGACTGAAGCCTTCA-3’，SEQ ID NO. 4 01igo dT。本专利技术的技术方案之三是通过以下措施来实现的一种双峰驼UCP2蛋白基因的克隆方法，按下述步骤进行第一步，组织分离(Isolation);第二步,总RNA的分离(TotalRNA isolation),总RNA的分离(Total RNA isolation)包括提取RNA的准备工作、组织总RNA提取、组织总RNA的鉴定；第三步，全长cDNA的克隆(Cloning of Full-length cDNA)，全长cDNA的克隆(Cloning of Full-length cDNA)包括引物设计及合成、RT-PCR扩增、克隆和测序，该引物对的正向引物为SEQ ID NO. 3和反向引物为SEQ ID NO. 4，其序列信息如下SEQ ID NO. 3 :5’ - ATGGTTGGACTGAAGCCTTCA-3’，SEQ ID NO. 4 01igo dT。本专利技术双峰驼UCP2蛋白是一种具有多种生物学功能的蛋白质，它在能量代谢和脂肪酸代谢中有着关键的调控作用，因此，通过对UCP2从基因、蛋白质和抑制剂等多方面的研究，必然会为肥胖、胰岛素抵抗综合症、II型糖尿病等疾病的预防和治疗带来新的希望，因此本专利技术具有很大的应用价值。附图说明附图1为双峰驼UCP2蛋白基因RT-PCR产物电泳图。附图2为双峰驼和牛、人、鼠、猪等14种动物用Clustal X中对齐的UCP2蛋白氨基酸序列同源性比较结果图。附图3为本专利技术双峰驼UCP2蛋白氨基酸序列和牛、人、鼠、猪等14种动物UCP2蛋白氨基酸序列构建的系统进化树图。具体实施例方式本专利技术不受下述实施例的限制，可根据本专利技术的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。实施例1 :一种双峰驼UCP2蛋白基因，其特征在于该基因具有SEQ ID NO.1中从核苷酸第59-1852位的核苷酸序列，其同牛UCP2基因蛋白编码序列同源性为92. 00%，编码氨基酸序列同源性为95. 00%。实施例2 :—种双峰驼UCP2蛋白基因的重组蛋白。实施例3 :重组蛋白具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。实施例4 :重组蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO. 2。实施例5 :重组蛋白通过设计一对引物从双峰驼UCP2蛋白中得到双峰驼UCP2蛋白基因，该引物对的核苷酸序列正向引物为SEQ ID NO. 3和反向引物为SEQ ID NO. 4，其序列信息如下SEQ ID NO. 3 :5’ - ATGGTTGGACTGAAGCCTTCA-3’，SEQ ID NO. 4 01igo dT。实施例6 :—种双峰驼UCP2蛋白基因的克隆方法，按下述步骤进行第一步，组织 分离(Isolation);第二步，总 RNA 的分离(Total RNA isolation),总 RNA 的分离(TotalRNA isolation)包括提取RNA的准备工作、组织总RNA提取、组织总RNA的鉴定；第三步，全长 cDNA 的克隆(Cloning of Full-length cDNA),全长 cDNA 的克隆(Cloning ofFull-length cDNA)包括引物设计及合成、RT-PCR扩增、克隆和测序，该引物对的正向引物为SEQ ID NO. 3和反向引物为SEQ ID NO. 4，其序列信息如下SEQ ID NO. 3 :5’ - ATGGTTGGACTGAAGCCTTCA-3’，SEQ ID NO. 4 01igo dT。双峰驼UCP2蛋白基因cDNA序列的克隆1. 组织分离(Is本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种双峰驼UCP2蛋白基因，其特征在于该基因具有SEQ?ID?NO.1中从核苷酸第59?1852位的核苷酸序列，其同牛UCP2基因蛋白编码序列同源性为92.00%，编码氨基酸序列同源性为95.00%。
【技术特征摘要】
1.一种双峰驼UCP2蛋白基因，其特征在于该基因具有SEQ ID NO.1中从核苷酸第 59-1852位的核苷酸序列，其同牛UCP2基因蛋白编码序列同源性为92. 00%，编码氨基酸序列同源性为95. 00%。2.一种根据权利要求1所述的双峰驼UCP2蛋白基因的重组蛋白。3.根据权利要求2所述的重组蛋白，其特征在于该重组蛋白具有SEQID NO.1所示的氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。4.根据权利要求2或3所述的重组蛋白，其特征在于该重组蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO. 2。5.根据权利要求2或3所述的重组蛋白，其特征在于通过设计一对引物从双峰驼UCP2 蛋白中得到双峰驼UCP2蛋白基因，该引物对的核苷酸序列正向引物为SEQ ID NO. 3和反向引物为SEQ ID NO. 4，其序列信息如下SEQ ID NO. 3 :5’ - ATGGTTGGACTGAAGCCTTCA-3’，SEQ ID NO. 4 01igo dT。6.根据权利要求4所述的重组蛋白，其特征在于通过设计一对引物从双峰驼UCP2蛋白中得到双峰驼UCP2蛋白基因，...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈钢粮，
申请(专利权)人：新疆旺源驼奶实业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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