本发明专利技术涉及基因工程技术领域，是一种双峰驼肌球蛋白基因、重组蛋白及其克隆方法，该双峰驼肌球蛋白基因，其特征在于该基因的核苷酸序列具有SEQIDNO.1所示的序列，该肌球蛋白的氨基酸序列为SEQIDNO:2。对包括SEQIDNO.1在内的九个物种的九条肌球蛋白基因的氨基酸序列构建了系统发生树，结果发现：双峰驼与牛、人的肌球蛋白亲缘关系最近，与大熊猫的亲缘关系最远。同时，本发明专利技术研究双峰驼的肌球蛋白序列及进化树可以直观的表现出双峰驼肌球蛋白序列与其他物种此蛋白序列的差异，对研究双峰驼及其他物种以及人类的耐力运动提供一定的理论依据促进运动生理学的发展。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程
，是一种。
技术介绍
肌球蛋白(myosin)肌原纤维粗丝的组成单位。存在于平滑肌中。在肌肉运动中起重要作用。其分子形状如豆芽状，由两条重链和多条轻链构成。两条重链的大部分相互螺旋形地缠绕为杆状，构成豆芽状的杆，重链的剩余部分与轻链一起，构成豆芽的瓣。被激活后，具有活性的、能分解ATP的ATP酶。其分子量约为51万。在粗丝中，都是分子的头朝向粗丝的两端，呈纵向线性缔合排列。肌球蛋白是由森特 吉奥尔吉(A Szent 一 Gyrgyi, 1942)分离出来的,但是相当于现在所说的肌动球蛋白物质是库恩(W. Khne，1859)最初从蛙抽提出来的，并被命名为肌球蛋白。肌球蛋白的ATP酶活性是由苏联的V. A. Engelhardt夫妇(1939)发现的。肌球蛋白作为细胞骨架的分子马达，是一种多功能蛋白质，其主要功能是为肌肉收缩提供力。纤丝滑动学说(sliding filament theory)认为肌肉收缩是由于肌动蛋白细丝与肌球蛋白丝相互滑动的结果。在肌肉收缩过程中，粗丝和细丝本身的长度都不发生改变，当纤丝滑动时，肌球蛋白的头部与肌动蛋白的分子发生接触、转动，最后脱离的连续过程，其结果使细丝进行相对的滑动。1986年Spudic h实验室首次建立体外模拟滑动体系，测试肌球蛋白与肌动蛋白相互滑动产生的力。在1994年F iner等人成功地用双光钳进行单分子运动测试，这样就可以在单分子水平上进行肌丝滑动研究以及测试其产生力量的大小，从而对肌球蛋白进行了更深入的研究。2005年，E1-Mounayri等比较了不善运动的人、经常参加运动的人和优秀的越野滑雪选手股外肌单根肌纤维MHC组成，研究发现，与经常参加运动和优秀的越野选手相比，不善运动人的肌纤维以I型和II a型MHC为主，另外还含有比例相对较高的(约20%) II b型MHC和II a/ II b共存型MHC ;经常参加运动的人股外肌含有I型MHC的纤维明显增加，含有II b以及II a/ II b共存型MHC的纤维明显减少。 有“沙漠之舟”之称的骆驼由于沙漠地面极为松软，限制了骆驼的狂奔疾驰，而沙漠食物的匮乏以及水源的奇缺，又使骆驼不得不具有较快的行走速度和持久的耐力。长期自然选择的结果，使骆驼的体形结构又比其他动物特殊，其颈部较长，呈“乙”字形，有利于保持身体平衡；体躯较短，前腿长，支持面小而重心高，便于躯体的前移和迈出较大的步伐；后肢短而呈刀状，具有较强的推动力和耐久力。由于骆驼同其他动物相比有持久的耐力，可以适应沙漠中食物的匮乏及水源的奇缺，肌球蛋白是肌肉运动中非常重要的一种蛋白，所以研究骆驼的肌球蛋白有非常重要的意义
技术实现思路
本专利技术提供了一种，肌球蛋白作为细胞骨架的分子马达，是一种多功能蛋白质，其主要功能是为肌肉收缩提供力，通过利用该双峰驼肌球蛋白的基因编码序列构建系统发生树，可以直观的表现出双峰驼肌球蛋白序列与其他物种肌球蛋白序列的差异，对研究双峰驼及其他物种以及人类的耐力运动提供一定的理论依据促进运动生理学的发展。本专利技术的技术方案之一是通过以下措施来实现的一种双峰驼肌球蛋白基因，该基因的核苷酸序列具有SEQ ID NO.1所示的序列。下面是对上述专利技术技术方案之一的进一步优化或/和改进 上述基因的核苷酸序列具有SEQ ID NO.1中21-5939位的序列。本专利技术的技术方案之二是通过以下措施来实现的一种含有双峰驼肌球蛋白基因的重组蛋白。下面是对上述专利技术技术方案之二的进一步优化或/和改进 上述重组蛋白的氣基酸序列具有SEQ ID NO. 2所不的序列。上述重组蛋白为具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。上述重组蛋白通过设计一对引物从双峰驼肌球蛋白中得到双峰驼肌球蛋白基因，该引物对的核苷酸序列信息如下 反引物，SEQ ID NO. 4 (反向):5，- ATGGGCAAGC TGCTCCAGCA GC -3，， 正引物，SEQ ID NO. 3 (正向):5，- CTGGCTGCTG GAGCAGCTTG CC -3，。本专利技术的技术方案之三是通过以下措施来实现的一种双峰驼肌球蛋白基因的克隆方法，其特征在于按下述步骤进行 第一步，总RNA提取，采取双峰驼组织样品后，对组织样品进行组织总RNA提取； 第二步，引物设计及合成，引物对的核苷酸序列信息如下 正引物，SEQ ID NO. 3 (正向)5’ - ATGGGCAAGC TGCTCCAGCA GC -3’， 反引物，SEQ ID NO. 4 (反向):5，- CTGGCTGCTG GAGCAGCTTG CC -3，； 第三步，RT-PCR扩增，利用反转录试剂盒对组织样品中的蛋白基因进行反转录，并对待扩增的DNA片段进行RT-PCR扩增； 第四步，蛋白基因的克隆，首先对PCR扩增的DNA片段进行回收，然后将回收的DNA片段同T载体连接形成感受态细胞，将感受态细胞进行转化培养成单菌落，取少量该单菌落进行PCR扩增，对扩增后的单菌落鉴别T载体上是否含有目的DNA片段，若有目的DNA片段，将单菌落放入培养基中进行过夜培养，最后对质粒进行回收。本专利技术双峰驼肌球蛋白基因是一种在肌肉运动中起重要作用的蛋白的基因，与骆驼能适应沙漠中食物的匮乏以及水源的奇缺，有较快的行走速度和持久的耐力有很大关系，是非常重要的一种蛋白质，同时，本专利技术研究双峰驼的肌球蛋白序列及进化树可以直观的表现出双峰驼肌球蛋白序列与其他物种此蛋白序列的差异，为以后研究双峰驼及其他物种中的耐力研究提供实验数据，对研究双峰驼及其他物种以及人类的耐力运动提供一定的理论依据促进运动生理学的发展。因此本专利技术具有很大的应用价值。附图说明图1.双峰驼肌球蛋白基因RT-PCR产物电泳图 图2.构建系统发生树所用肌球蛋白氨基酸同源性比较 图3.不同物种肌球蛋白氨基酸序列系统进化树具体实施例方式本专利技术不受下述实施例的限制，可根据本专利技术的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步描述 实施例1，一种双峰骑肌球蛋白基因，该基因的核昔酸序列具有SEQ ID NO.1所不的序 列。该序列是肌原纤维粗丝的组成单位，存在于平滑肌中，在肌肉运动中起重要作用的蛋白的基因，本专利技术中的双峰驼肌球蛋白基因的核苷酸序列是通过以双峰驼肝脏组织中总RNA为模板，参考人、鼠、牛等物种的肌球蛋白基因的同源序列设计引物，进行反转录PCR而获得的基因核苷酸序列SEQ ID NO.1。可根据实际需要，对上述双峰驼肌球蛋白基因作进一步优化或/和改进 双峰驼肌球蛋白基因的核苷酸序列具有SEQ ID NO.1中21-5939位所示的序列。在SEQ ID NO.1中，RT-PCR产物长度为5953bp，电泳结果见附图1，其中21-23位为起始密码子ATG，5937-5939位为终止密码子TGA，21-5939位为编码蛋白质区域(CDS)。实施例2，一种双峰驼肌球蛋白基因的重组蛋白。可根据实际需要，对上述双峰驼肌球蛋白基因的重组蛋白作进一步优化或/和改进: 重组蛋白的氨基酸序列具有SEQ ID N0:2所示的序列。将双峰驼肌球蛋白基本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种双峰驼肌球蛋白基因，其特征在于该基因的核苷酸序列具有SEQ?ID?NO.1所示的序列。
【技术特征摘要】
1.一种双峰驼肌球蛋白基因，其特征在于该基因的核苷酸序列具有SEQ ID NO.1所示的序列。2.根据权利要求1所述的双峰驼肌球蛋白基因，其特征在于该基因的核苷酸序列具有 SEQ ID NO.1 中 21-5939 位的序列。3.一种含有权利要求1或2所述的双峰驼肌球蛋白基因的重组蛋白。4.根据权利要求3所述的重组蛋白，其特征在于该重组蛋白的氨基酸序列具有SEQID NO. 2所示的序列。5.根据权利要求3或4所述的重组蛋白，其特征在于该重组蛋白为具有SEQID NO. 2 所示的氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。6.根据权利要求3或4所述的重组蛋白，其特征在于通过设计一对引物从双峰驼肌球蛋白中得到双峰驼肌球蛋白基因，该引物对的核苷酸序列信息如下正引物，SEQ ID NO. 3 (正向)5’ - ATGGGCAAGC TGCTCCAGCA GC -3’，反引物，SEQ ID NO. 4 (反向):5，- CTGGCTGCTG GAGCAGCTTG CC -3，。7.根据权利要求5所述的重组蛋白，其特征在于通过设计一对引物从双峰驼肌球蛋白中得到双峰驼肌球蛋白基因，该引物对的核苷酸序列信息如下正引物，SEQ ID...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈钢粮，
申请(专利权)人：新疆旺源驼奶实业有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。