本发明专利技术涉及基因工程技术领域，是一种双峰驼α-乳白蛋白基因、重组蛋白及其克隆方法；该基因是一种乳品中除具有易消化吸收的特点外、还具有杀菌和诱导肿瘤细胞凋亡的功能密切相关的基因，具有SEQIDNO.1中从核苷酸第4-432位的核苷酸序列。本发明专利技术双峰驼α-乳白蛋白是乳清蛋白的主要成分之一，具有调节产乳的功能，还有细胞溶解活性，诱导细胞生长抑制和细胞凋亡等多种功能，是驼乳中非常重要的一种蛋白质，本发明专利技术构建的双峰驼的α-乳白蛋白序列及进化树可以直观的表现出双峰驼α-乳白蛋白与其他物种此蛋白序列的差异，为以后驼乳在食品中的添加和进一步的生化研究提供实验数据，所以本发明专利技术具有很高的应用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程
，是一种。
技术介绍
α -乳白蛋白(alpha-lactalbumin)是主要的乳清蛋白成分之一,具有调节产乳的功能，还有细胞溶解活性，诱导细胞生长抑制和细胞凋亡等多种功能。最近的研究发现，它可能具有抗癌功能，此外，乳白蛋白在氨基酸比例结构方面，以及在功能特性上与人乳都非常相似的。临床研究显示，富含α-乳白蛋白的婴儿配方奶粉是安全的。α-乳白蛋白含有丰富的色氨酸，色氨酸有助于促进宝宝的神经发育，是调节睡眠、食欲情绪的重要因子。而且，α-乳白蛋白是必需氨基酸和支链氨基酸的极好来源，也是唯一能与金属元素和钙元 素结合的乳清蛋白成分。α-乳白蛋白在牛乳中研究的较多，α-乳白蛋白(a-1actalbumin)是牛乳的特异蛋白之一，也是乳清蛋白主要成分之一，占总乳清蛋白10%，牛乳中含量为0.5 mg/mL至2mg/mL，分子量为14175U，由123个氨基酸组成。α -乳白蛋白是必需氨基酸和支链氨基酸的极好来源，是惟一能结合钙的乳清蛋白，它所特有的4个天冬氨酸残基的肽循环位置均能结合钙离子。α-乳白蛋白所含的2个脯氨酸可以中断其一级结构，导致易受蛋白酶水解。Merin等(2001)对内蒙古阿拉善双峰驼分娩后第I次所挤的初乳成分进行了研究，结果表明，乳清蛋白氮主要由血清白蛋白和免疫球蛋白组成。随泌乳时间的延长，阿拉善双峰驼驼乳氮分布中酪蛋白比例逐渐升高，乳清蛋白氮比例逐渐降低。24小时后到90天泌乳期内，非蛋白氮占总氮比例变化不大，为5. 26%至7. 89 %。尽管总氮含量随泌乳进行逐渐下降，但在7天至90天泌乳期内，酪蛋白氮及乳清蛋白氮占总氮百分比较为恒定，分别在77. 59%至80. 36%和12. 50%至15. 52%，乳清蛋白氮酪蛋白氮比例在15 85左右。在食品蛋白中，α-乳白蛋白所含有的色氨酸的比例最高。大量实验表明食用较高色氨酸含量的蛋白，有助于提高血液中复合胺的释放，在动物实验中发现其有抗焦虑的作用，因此牛奶中的α-乳白蛋白日益引起人们的关注。因此婴幼儿配方乳制品中α-乳白蛋白的含量是衡量其营养成分和品质的标准之一。α-乳白蛋白在蛋白结构、氨基酸序列及DNA序列上与溶菌酶有极大的相似性，在氨基酸水平上牛乳中α-乳白蛋白与牛溶菌酶有62. 6%的相似性及35. 8%的一致性。内蒙、新疆地区是双峰驼的主要产地，骆驼资源丰富，是当地重要的经济动物。驼乳在成分、含量等方面与牛乳有一定的区别，因此，研究驼乳中的α-乳白蛋白就显得尤为重要。我们参考了其他九种动物的α-乳白蛋白基因序列，克隆并测序得到了双峰驼驼乳中α -乳白蛋白基因的cDNA序列，并对十种物种基因的CDS序列进行同源性比较并作进化树，为今后研究双峰驼驼乳中α-乳白蛋白提供基础资料。目前，国内外对酪蛋白、α-乳球蛋白等的研究较多，但是国内几乎没有对双峰驼α-乳白蛋白基因方面的研究的相关研究。
技术实现思路
本专利技术提供了一种双峰驼α-乳白蛋白基因，该基因是一种乳品中除具有易消化吸收的特点外、还具有杀菌和诱导肿瘤细胞凋亡的功能密切相关的基因，其氨基酸序列与人、鼠、牛等物种α -乳白蛋白氨基酸序列具有很高的相似性。本专利技术的技术方案之一是通过以下措施来实现的一种双峰驼α-乳白蛋白基因、该基因是一种乳品中除具有易消化吸收的特点外、还具有杀菌和诱导肿瘤细胞凋亡的功能密切相关的基因，具有SEQ ID NO.1中从核苷酸第4-432位的核苷酸序列。本专利技术的技术方案之二是通过以下措施来实现的一种双峰驼α-乳白蛋白基因的重组蛋白。下面是对上述专利技术技术方案之二的进一步优化或/和改进 上述重组蛋白的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。上述重组蛋白为SEQ ID NO. 2所示的氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。上述重组蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO. 2。上述重组蛋白通过设计一对引物从双峰驼α-乳白蛋白中得到双峰驼α-乳白蛋白基因，该引物对的核苷酸序列正向引物为SEQ ID NO. 3和反向引物为SEQ ID NO. 4，其序列信息如下SEQ ID NO. 3 :5’ - ATGAAGCTCTTCTTCCCCGCC -3’，SEQ ID NO. 4 :5’ - TATTCTGTGCTGTCATTGTTTTG -3’。本专利技术的技术方案之三是通过以下措施来实现的一种双峰驼α-乳白蛋白基因的克隆方法，按下述步骤进行第一步，组织分离(Isolation);第二步，总RNA的分离(Total RNA isolation),总 RNA 的分离(Total RNA isolation)包括提取RNA 的准备工作、组织总RNA提取、组织总RNA的鉴定；第三步,全长cDNA的克隆(Cloning of Full-lengthcDNA)，全长 cDNA 的克隆(Cloning of Full-length cDNA)包括引物设计及合成、RT-PCR扩增、克隆和测序，该引物对的核苷酸序列正向引物为SEQ ID NO. 3和反向引物为SEQ IDNO. 4，其序列信息如下SEQ ID NO. 3 :5’ - ATGAAGCTCTTCTTCCCCGCC -3’，SEQ ID NO. 4 :5’ - TATTCTGTGCTGTCATTGTTTTG -3’。本专利技术双峰驼α-乳白蛋白是乳清蛋白的主要成分之一，具有调节产乳的功能，还有细胞溶解活性，诱导细胞生长抑制和细胞凋亡等多种功能，是驼乳中非常重要的一种蛋白质，本专利技术构建的双峰驼的α-乳白蛋白序列及进化树可以直观的表现出双峰驼α-乳白蛋白与其他物种此蛋白序列的差异，为以后驼乳在食品中的添加和进一步的生化研究提供实验数据，所以本专利技术具有很高的应用价值。附图说明附图1为双峰驼α-乳白蛋白基因RT-PCR产物电泳图。附图2为双峰驼和和人、鼠、牛等动物用Clustal X中对齐的α -乳白蛋白氨基酸序列同源性比较结果图。附图3为本专利技术双峰驼α-乳白蛋白氨基酸序列和人、鼠、牛等动物α-乳白蛋白氨基酸序列构建的系统进化树图。具体实施例方式本专利技术不受下述实施例的限制，可根据本专利技术的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。实施例1 : 一种双峰驼α -乳白蛋白基因，该基因是一种乳品中除具有易消化吸收的特点外、还具有杀菌和诱导肿瘤细胞凋亡的功能密切相关的基因，具有SEQ ID NO.1中从核苷酸第4-432位的核苷酸序列。实施例2 :—种双峰驼α-乳白蛋白基因的重组蛋白。 实施例3 :重组蛋白的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。实施例4 :重组蛋白为SEQ ID NO. 2所示的氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。实施例5 :重组蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO. 2。实施例6 :重组蛋白通过设计一对引物从双峰驼α-乳白蛋白中得到双峰驼α-乳白蛋白基因，该引物对的核苷酸序列正向引物为SEQ ID NO. 3和反向引物为SEQ IDNO. 4，其序列信息如下SEQ ID NO. 3 :5’ - ATGAAGCTCTTCTTCCCCGCC -3’，SEQ ID NO. 4:5’ - TATTCTGTGCTGTCATTGTTTTG -3’。实施例7本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种双峰驼α?乳白蛋白基因，其特征在于该基因是一种乳品中除具有易消化吸收的特点外、还具有杀菌和诱导肿瘤细胞凋亡的功能密切相关的基因，具有SEQ?ID?NO.1中从核苷酸第4?432位的核苷酸序列。
【技术特征摘要】
1.一种双峰驼α-乳白蛋白基因，其特征在于该基因是一种乳品中除具有易消化吸收的特点外、还具有杀菌和诱导肿瘤细胞凋亡的功能密切相关的基因，具有SEQ ID NO.1中从核苷酸第4-432位的核苷酸序列。2.一种根据权利要求1所述的双峰驼α-乳白蛋白基因的重组蛋白。3.根据权利要求2所述的重组蛋白，其特征在于该重组蛋白的核苷酸序列为SEQID NO.1。4.根据权利要求2或3所述的重组蛋白，其特征在于该重组蛋白为SEQID NO. 2所示的氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。5.根据权利要求2或3所述的重组蛋白，其特征在于该重组蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO. 2。6.根据权利要求4所述的重组蛋白，其特征在于该重组蛋白的氨基酸序列为SEQID NO. 2。7.根据权利要求2或3所述的重组蛋白，其特征在于通过设计一对引物从双峰驼 α-乳白蛋白中得到双峰驼α-乳白蛋白基因，该引物对的核苷酸序列正向引物为SEQ ID NO. 3和反向引物为SEQ ID NO. 4，其序列信息如下SEQ ID NO. 3 :5’ - ATGAAGCTCTTCTTCCCCGCC -3’，SEQ ID NO. 4 :5’ - TATTCTGTGCTGTCATTGTTTTG -3’。8.根据权利要求4所述的重组蛋白，其特征在于通过设计一对引物从双峰驼α-乳白蛋白中得到双峰驼α-乳白蛋白基因，该引物对的核苷酸序列正向引物为SEQ ID Ν0.3和反向引物为SEQ ID NO. 4，其序列信息如下SEQ ID NO. 3 :5’ - ATGA...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈钢粮，
申请(专利权)人：新疆旺源驼奶实业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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