本发明专利技术涉及基因工程技术领域，是一种双峰驼A-FABP蛋白基因、重组蛋白及其克隆方法。通过克隆测序获得双峰驼A-FABP基因的核苷酸序列，并对不同物种A-FABP基因的CDS序列进行同源性比较，了解和验证A-FABP基因的结构特点，为今后研究A-FABP基因与双峰驼脂类和能量代谢的关系提供基础资料。双峰驼A-FABP蛋白是一种具有多种生物学功能的蛋白质，它在能量代谢和脂肪酸代谢中有着关键的调控作用,因此,通过对A-FABP从基因、蛋白等多方面的研究,必然会为肥胖、胰岛素抵抗综合症、Ⅱ型糖尿病等疾病的预防和治疗带来新的希望，具有很大的应用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程
，是一种双峰驼A-FABP蛋白基因、重组蛋白及其克隆方法。
技术介绍
脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(adipocytefatty cid binding protein, A-FABP), 又称FABP4或ap2,是脂肪酸结合蛋白(fatty acid binding proteins, FABPs)家族中的一员。其最早是在脂肪组织中被发现。A-FABP分布广泛，但主要是在脂肪细胞和巨噬细胞中表达。人A-FABP基因定位于第8号染色体q21，小鼠A-FABP基因定位于第3号染色体， 猪A-FABP基因定位于4号染色体。猪A-FABP基因同人、小鼠和大鼠A-FABP基因序列相比， 分别有90%，83%及81 %的相似性。小鼠A-FABP基因4个外显子分别编码24，58，34和16 个氨基酸，3个内含子分别为2629，840，和471 bp。鸡A-FABP基因4个外显子也分别编码 24，58，34和16个氨基酸，3个内含子分别为I 240，224和I 284 bp。人A-FABP基因4个外显子亦分别编码24，58，34和16个氨基酸，3个内含子大小分别为2496，910，和498 bp。 对FABPs氨基酸组成进行比较分析发现，种间同型FABP具有较高相似性，并且这种相似程度大于同种不同型FABP相似性。A-FABP蛋白通过影响脂代谢过程中的关键酶及其受体的表达，参与细胞内信号转导，在脂类的代谢和转运中起着重要作用。A-FABP可以结合各种细胞内脂肪酸，可能介导细胞腔隙间的脂质转运，也可以与激素敏感脂肪酶形成一个1:1的复合物，提高脂肪酶的效率，从而促进脂解和脂肪酸从脂肪细胞流出。此外，A-FABP可以调节脂肪和肌肉组织中脂肪酸的成分和利用率。动物实验表明A -FABP是动脉粥样硬化的主要介质。 Makowski和Boord等对载脂蛋白E (APOE) 2/2的小鼠模型的研究发现，不管给予小鼠高脂肪饮食还是低脂肪饮食，敲除A-FABP基因几乎可以完全保护小鼠不受动脉粥样硬化的危害。但给予I年的高脂肪的致动脉粥样硬化的饮食，AP0E2/2 A -FABP2/2组小鼠的幸存率为67%，明显高于AP0E2/2对照组，主要是由于动脉粥样硬化斑块的稳定性。 A-FABP与各种疾病的关系主要与其调节脂质和参炎症反应有关，与代谢综合征，2型糖尿病，多卵巢综合征，动脉粥样硬化和肿瘤进展关系密切。但其能否成为这些疾病的预测和临床诊断指标，有待深入研究；另外A-FABP与其他与代谢综合征关系密切的疾病， 如非酒精性脂肪肝的关系也有待研究。在动物方面A-FABP基因遗传变异方面的报道较少，至今尚未发现克隆获得双峰驼A-FABP基因编码蛋白序列以及对动物A-FABP基因进化规律研究的报道。A-FABP在能量代谢，炎症反应起重要调节作用，和某些肿瘤的临床分期及病理分化程度有较好的对应关系，因此，通过对A-FABP从基因、蛋白质和抑制剂等多方面的研究，必然会为肥胖、胰岛素抵抗综合症、II型糖尿病等疾病的预防和治疗带来新的希望。双峰驼有较强的耐旱和沉积脂肪能力，尤其是在水草充足的季节， 驼峰能在短时间内沉积大量脂肪，很适合进行能量代谢研究。
技术实现思路
本专利技术提供了一种双峰驼A-FABP蛋白基因、重组蛋白及其克隆方法，A-FABP蛋白通过影响脂代谢过程中的关键酶及其受体的表达，参与细胞内信号转导，在脂类的代谢和转运中起着重要作用，本专利技术克服了上述现有技术之不足，提供了一种新的双峰驼 A-FABP蛋白的编码核苷酸序列，该序列是一种在能量代谢，炎症反应起重要调节作用的基因，通过对A-FABP从基因、A-FABP蛋白等多方面的研究，必然会为肥胖、胰岛素抵抗综合症、II型糖尿病等疾病的预防和治疗带来新的希望，具有很大的应用价值。本专利技术的技术方案之一是通过以下措施来实现的一种双峰驼A-FABP蛋白基因， 该基因的核苷酸序列具有SEQ ID NO.1所示的序列。下面是对上述专利技术技术方案之一的进一步优化或/和改进上述基因的核苷酸序列具有SEQ ID NO.1中70-825位的序列。本专利技术的技术方案之二是通过以下措施来实现的一种双峰驼A-FABP蛋白基因的重组蛋白。下面是对上述专利技术技术方案之二的进一步优化或/和改进上述重组蛋白的氣基酸序列具有SEQ ID NO. 2所不的序列。上述重组蛋白为具有SEQ ID NO. 2所示的氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。上述重组蛋白通过设计一对引物从双峰驼A-FABP蛋白中得到双峰驼肌球蛋白基因，该引物对的核苷酸序列信息如下正引物，SEQ ID NO. 3 (正向):5，- ATGTGCGATGCGTTTGTGGGC-3’，反引物，SEQ ID NO. 4 (反向)01igo dT。 本专利技术的技术方案之三是通过以下措施来实现的一种双峰驼A-FABP蛋白基因的克隆方法，其特征在于按下述步骤进行第一步，总RNA提取，采取双峰驼组织样品后，对组织样品进行组织总RNA提取； 第二步，引物设计及合成，引物对的核苷酸序列信息如下正引物，SEQ ID NO. 3 (正向):5，- ATGTGCGATGCGTTTGTGGGC-3’，反引物，SEQ ID NO. 4 (反向)01igo dT ；第三步，RT-PCR扩增，利用反转录试剂盒对组织样品中的蛋白基因进行反转录，并对待扩增的DNA片段进行RT-PCR扩增；第四步，蛋白基因的克隆，首先对PCR扩增的DNA片段进行回收，然后将回收的DNA片段同T载体连接形成感受态细胞，将感受态细胞进行转化培养成单菌落，取少量该单菌落进行PCR扩增，对扩增后的单菌落鉴别T载体上是否含有目的DNA片段，若有目的DNA片段， 将单菌落放入培养基中进行过夜培养，最后对质粒进行回收。本专利技术双峰驼有较强的耐旱和沉积脂肪能力，尤其是在水草充足的季节，驼峰能在短时间内沉积大量脂肪，很适合进行能量代谢研究。本专利技术通过克隆测序获得双峰驼 A-FABP基因的核苷酸序列，并对不同物种A-FABP基因的CDS序列进行同源性比较，了解和验证A-FABP基因的结构特点，为今后研究A-FABP基因与双峰驼脂类和能量代谢的关系提供基础资料。双峰驼A-FABP蛋白是一种具有多种生物学功能的蛋白质，它在能量代谢和脂肪酸代谢中有着关键的调控作用，因此，通过对A-FABP从基因、蛋白等多方面的研究， 必然会为肥胖、胰岛素抵抗综合症、II型糖尿病等疾病的预防和治疗带来新的希望，具有很大的应用价值。附图说明附图1为双峰驼A-FABP基因RT-PCR产物电泳图。附图2为构建系统发生树所用A-FABP蛋白氨基酸同源性比较。附图3为不同物种A-FABP氨基酸序列系统进化树具体实施方式下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步描述实施例1，一种双峰驼A-FABP蛋白基因，该基因的核苷酸序列具有SEQ ID NO.1所示的序列。本专利技术中的双峰驼A-FABP蛋白基因的cDNA序列是通过以双峰驼肝脏组织中总RNA 为模板，参考牛、人、鼠等物种的A-FABP蛋白基因的同源序列设计引物，进行反转录PCR而获得的新基因序列。获得的双峰驼A-FABP蛋白基因cDNA序列见SEQ ID NO.1。可本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种双峰驼A?FABP蛋白基因，其特征在于该基因的核苷酸序列具有SEQ?ID?NO.1所示的序列。
【技术特征摘要】
1.一种双峰驼A-FABP蛋白基因，其特征在于该基因的核苷酸序列具有SEQ ID NO.1所示的序列。2.根据权利要求1所述的双峰驼A-FABP蛋白基因，其特征在于该基因的核苷酸序列具有SEQ ID NO.1中70-825位的序列。3.一种含有权利要求1或2所述的双峰驼A-FABP蛋白基因的重组蛋白。4.根据权利要求3所述的重组蛋白，其特征在于该重组蛋白的氨基酸序列具有SEQID NO. 2所示的序列。5.根据权利要求3或4所述的重组蛋白，其特征在于该重组蛋白为具有SEQID NO. 2 所示的氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。6.根据权利要求3或4所述的重组蛋白，其特征在于通过设计一对引物从双峰驼 A-FABP蛋白中得到双峰驼肌球蛋白基因，该引物对的核苷酸序列信息如下正引物，SEQ ID NO. 3 (正向):5，- ATGTGCGATGCGTTTGTGGGC-3’，反引物，SEQ ID NO. 4 (反向)01igo dT。7.根据权利要求5所述的重组蛋白，其特征在于通过设计一对引物从双峰驼A-FABP蛋白中得到双峰驼肌球蛋白基因，该引物...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈钢粮，
申请(专利权)人：新疆旺源驼奶实业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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