转基因蛋白的定量分析制造技术
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利技术背景随着重组DNA技术越来越多地被用于产生商业和工业用途的转基因植物，这对开发分析转基因植物系的高通量方法产生了需要。这样的分析方法对于性状发现研究、产品开发、种子生产和商业化是必需的，并且有助于具有期望的或最佳的表型的转基因植物的快速开发。而且，目前用于人类消费的GM植物的安全性评估的建议指南要求在亲本和转化作物之间在DNA和蛋白质水平上进行表征。开发的新植物品种包括日益复杂的遗传修饰，尤其是包括叠加的基因和性状。当前用于分析本领域优选的转基因植物的方法包括基于DNA的技术(例如PCR和/或RT-PCR)；使用报告基因；Southern印迹；和免疫化学。所有这些方法都受限于各种缺点。尽管之前已经公开了质谱，但现有方法由于缺乏有选择性且灵敏的定量而受到限制。对用于植物中转基因表达产物的定量的选择性且灵敏的高通量方法仍然存在需要。专利技术概述本专利技术涉及使用质谱法对来自植物的复杂蛋白样品进行定量多路分析的方法。在一些实施方案中，本公开涉及维持转基因植物品种的方法，通过(例如)分析转基因植物品种的多个世代而选择性且灵敏地定量多重化的(multiplexed)转基因蛋白。在一个方面，提供了对基于植物的样品中的一种或多种具有已知氨基酸序列的感兴趣蛋白质进行定量的高通量方法。该方法包括：(a)从基于植物的样品中提取蛋白质；(b)消化从步骤(a)提取的蛋白质获得肽(peptides)；(c)在单一步骤中分离各肽；(d)从具有已知氨基酸序列的感兴趣蛋白质中确定多个特征肽；(e)使用高分辨率精确质谱法(HRAMMS)测量所述多个特征肽；和(f)基于所述特征肽的测量...
【技术保护点】
一种对基于植物的样品中的具有已知氨基酸序列的一种或多种感兴趣蛋白质进行定量的高通量方法，该方法包括：(a)从基于植物的样品中提取蛋白质；(b)消化从步骤(a)提取的蛋白质以获得肽；(c)在单一步骤中分离所述肽；(d)从具有已知氨基酸序列的感兴趣蛋白质中确定多个特征肽；(e)使用高分辨率精确质谱法(HRAM MS)测量所述多个特征肽；和(f)基于所述特征肽的测量，对具有已知氨基酸序列的感兴趣蛋白质定量。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.06.10 US 62/010,137;2014.06.10 US 62/010,126;1.一种对基于植物的样品中的具有已知氨基酸序列的一种或多种感兴趣蛋白质进行定量的高通量方法，该方法包括：(a)从基于植物的样品中提取蛋白质；(b)消化从步骤(a)提取的蛋白质以获得肽；(c)在单一步骤中分离所述肽；(d)从具有已知氨基酸序列的感兴趣蛋白质中确定多个特征肽；(e)使用高分辨率精确质谱法(HRAMMS)测量所述多个特征肽；和(f)基于所述特征肽的测量，对具有已知氨基酸序列的感兴趣蛋白质定量。2.权利要求1的方法，其中所述肽通过柱色谱在单一步骤中被分离。3.权利要求2的方法，其中所述柱色谱包括液相柱色谱。4.权利要求1的方法，其中在单一步骤中获得对应于感兴趣蛋白质的肽的质谱数据。5.权利要求1的方法，其中所述一种或多种感兴趣蛋白质包括两种感兴趣蛋白质。6.权利要求1的方法，其中所述一种或多种感兴趣蛋白质包括四种感兴趣蛋白质。7.权利要求1的方法，其中所述基于植物的样品来自转基因植物。8.权利要求7的方法，其中所述一种或多种感兴趣蛋白质包括在转基因植物中转基因表达的预期产物。9.权利要求1的方法，其中所述一种或多种感兴趣蛋白质包括5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶(2mEPSPS)、芳氧基链烷酸酯双加氧酶-12(AAD-12)、和/或膦丝菌素乙酰转移酶(PAT)。10.权利要求1的方法，其中所述多个特征肽包含选自SEQIDNO:2-25、27-45、和47-60的至少一个序列。11.权利要求1的方法，其中所述多个特征肽包含选自SEQIDNO:2-25、27-45、和47-60的至少两个序列。12.权利要求1的方法，其中所述多个特征肽包含选自SEQIDNO:2-25、27-45、和47-60的至少三个序列。13.权利要求1的方法，其中所述多个特征肽包含(1)SEQIDNO:3、12、和21；(2)SEQIDNO:28、29、和34；和/或(3)SEQINNO:49、55、和56。14.权利要求1的方法，其中所述多个特征肽由(1)SEQIDNO:3、12、和21；(2)SEQIDNO:28、29、和34；和/或(3)SEQINNO:49、5...
【专利技术属性】
技术研发人员：T·J·阿曼，B·W·谢弗，R·C·希尔，J·R·吉尔伯特，G·单，
申请(专利权)人：美国陶氏益农公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。