引物及该引物检测BCR/ABL融合基因ABL激酶区耐药突变位点的方法技术

本发明专利技术涉及引物及该引物检测BCR/ABL融合基因ABL激酶区耐药突变位点的方法，包括（1）提取RNA；（2）RNA反转录合成cDNA；（3）以cDNA为模板，分别以BCR(p210)-F和ABL(p210)-R为上下游引物，BCR(p190)-F和ABL(p190)-R为上下游引物进行第一轮PCR扩增，获得扩增产物；（4）以ABLKinase-F和ABL?Kinase-R为上下游引物进行第二轮PCR扩增；（5）扩增产物测序。本发明专利技术还公开了利用巢式PCR获得BCR/ABL融合基因中ABL激酶区片段，再利用特异性引物进行测序的方法，在一个反应体系中可以检测所有常见的BCR/ABL融合基因ABL激酶区耐药突变，降低了实验的成本，极大的提高了基因测序结果的准确性和灵敏度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属生物
，具体来说是引物及该引物检测BCR/ABL融合基因ABL激酶区耐药突变位点的方法。
技术介绍
慢性髓细胞性白血病(chronicmyeloid leukemia, CML)细胞有 t (9 ；22) (q34 ；qll)易位形成的费城染色体(Ph chromosome)和BCR/ABL融合基因，它们在血液病研究中占有重要地位。在发现Ph染色体后的30多年里，临床广泛用细胞遗传学方法检测Ph染色体做CML的诊断和疗效监测。尤其近十余年，分子生物学方法检测BCR/ABL融合基因的应用逐渐普及。甲磺酸伊马替尼(别名格列卫，imatinib)是针对BCR/ABL融合蛋白设计的十分有效的药物，近几年在CML和Ph+急性淋巴细胞性白血病(acute lymphocyticleukemia, ALL)治疗中应用越来越多，但是部分患者最终出现耐药，耐药相关的BCR/ABL融合基因ABL激酶区突变检测备受重视。BCR/ABL融合基因见于95%以上CML患者，也见于20% 25%成人ALL和2% 4%儿童ALL患者,约6%成人急性髓细胞性白血病(acute myeloblast本文档来自技高网...

【技术保护点】
引物，包括扩增引物和测序引物，其特征在于：所述扩增引物序列如下：BCR_p210?F:5’?TGACCAACTCGTGTGTGAAACTC?3’、ABL_p210?R：5’?TCCACTTCGTCTGAGATACTGGATT?3’、BCR_p190?F:5’?ACCGCATGTTCCGGGACAAAAG?3’、ABL_p190?R：5’?ACAGCATTCCGCTGACCATCAATAAG?3’、所述测序引物序列如下：ABL?Kinase?F：5’?TGGTTCATCATCATTCAACGGTGG?3’、ABL?Kinase?R：5’?AGACGTCGGACTTGATGGAGAACT?3’。

【技术特征摘要】
1.引物，包括扩增引物和测序引物，其特征在于所述扩增引物序列如下BCR_p2IO-F:5， -TGACCAACTCGTGTGTGAAACTC-3，、ABL_p210-R :5’ -TCCACTTCGTCTGAGATACTGGATT-3’、BCR_pl90-F:5， -ACCGCATGTTCCGGGACAAAAG-3，、ABL_pl90-R :5’ -ACAGCATTCCGCTGACCATCAATAAG-3’、所述测序引物序列如下ABL Kinase-F :5’ -TGGTTCATCATCATTCAACGGTGG-3’、ABL Kinase-R :5’ -AGACGTCGGACTTGATGGAGAACT-3’。2.根据权利要求1所述引物，其特征在于所述的引物序列是向扩增引物或测序引物的5’端或/和3’端延长的序列。3.根据权利要求1所述引物，其特征在于所述的引物序列是和扩增引物或测序引物同源性大于85%的序列。4.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：李小青，孙黎，陈然，叶贵，李金欢，郝玮，梁超，韩韬，涂赞兵，方国伟，陈贵，黄士昂，
申请(专利权)人：武汉康圣达医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：