本发明专利技术为IL-31单克隆抗体的可变区序列和使用方法。提供了来源于具有对于IL-31的亲和力的免疫球蛋白的抗原结合位点的新型组合物。组合物展示能够特异性结合人IL-31的抗体分子的免疫结合特性。提供了来源于相同或不同免疫球蛋白部分的CDR区域。还提供了其中VH和VL结构域相连接的单链多肽。sFv分子可包括可具有生物活性或提供其他有用部分的附着位点的辅助多肽部分。组合物用于特异性结合测定、亲和纯化方案、药物或毒素靶向、成像以及用于炎性疾病的遗传或免疫治疗。因此本发明专利技术提供了新的多肽、编码此类多肽的DNA、包含此类DNA的表达盒以及诱导所述多肽产生的方法。本发明专利技术还提供了单克隆抗体的可变区的氨基酸序列和这些单克隆抗体或抗体片段与人IgG4?Fc分子结合的用途。
【技术实现步骤摘要】
IL-31单克隆抗体的可变区序列和使用方法本申请是申请日为2007年9月4日、专利技术名称为“IL-31单克隆抗体的可变区序列和使用方法”、申请号为200780036666. O的申请的分案申请。专利技术背景皮肤在免疫系统中起着重要的作用并由多层组成。表皮是表面层。表皮下面是真皮，一层结缔组织。真皮下面是皮下组织，一层大量的脂肪组织。循环T淋巴细胞在正常和炎性条件下迁移至皮肤。皮肤淋巴细胞抗原(CLA)被认为是一种对皮肤具有趋向性的 T 细胞的归巢受体(homing receptor)。Santamaria-Babi, L. , Eur. J. Dermatol. 14:13-18，2004。已知几种皮肤疾病表达高水平的CLA+T细胞，包括特应性皮炎、接触性皮炎、药物诱发的变应性反应、与皮肤向性(skin-tropic)病毒和病毒相关的搔痒症、白癜风、皮肤T 细胞淋巴瘤、斑秀(alopecia aerata)、红斑痤疮、普通粉刺、结节性痒疫以及大疱性类天疱疮。存在对治疗这类皮肤T细胞介导的疾病的需要。所证实了的细胞因子家族的体内活性显示了其它细胞因子、细胞因子激动剂和细胞因子拮抗剂的巨大临床潜力，以及对它们的需要。IL-31，一种新鉴定的细胞因子。 IL-31当在小鼠中过度表达时，导致皮炎样症状。已经将皮肤归巢T细胞和表皮角质细胞 (kerationcyte)牵连于人类皮肤疾病的病理学中。本专利技术通过提供致炎细胞因子IL-31的拮抗剂来解决这些需要。本专利技术的这种拮抗剂可阻断、抑制、减少、对抗或中和IL-31的活性，包括可溶性IL-31RA受体和抗-1L-31中和抗体。本专利技术进一步提供了在炎性疾病中为此的用途，以及相关的组合物和方法。单克隆抗体技术已提供·了大量的用于鉴定和治疗疾病的治疗剂以及诊断剂。许多临床应用已集中在于小鼠细胞中产生的但特异性结合人抗原的鼠抗人单克隆抗体。此外，还开发了由人和非人氨基酸序列组成的嵌合抗体。特别地，已描述了具有来源于例如鼠免疫球蛋白的融合至来源于人免疫球蛋白的恒定区的可变区的杂种抗体分子。参见例如，美国专利 No. 4，816，567; Winter 等(1991)Nature349:293-299;和 Lobuglio 等(1989) Proc. Nat. Acad. Sc1. USA86:4220-4224。此外，因为恒定区不是抗原识别或结合所需要的， 因此不含有Fe部分的抗体片段例如F(ab)、F(ab’ )2和Fv已表明示为用于临床治疗的有用候选物。已描述了许多包含啮齿类抗原结合位点的重组或生物合成的分子。特别地，已描述了具有通过只将啮齿类结合位点而非完整的可变结构域嫁接入人免疫球蛋白重链和轻链结构域而直接建立在人抗体上的啮齿类抗原结合位点的分子。参见例如，Riechmann等 (1988) Nature 332:323-327 和 Verhoeyen 等(1988) Science239:1534-1536。具有其中可变结构域的至少一个互补决定区(CDRS)来源于鼠单克隆抗体并且分子的剩余免疫球蛋白来源的部分来源于人免疫球蛋白的分子已在1994年9月21日公布的英国专利公开号 GB2, 276，169中进行了描述。也已描述了许多单链抗原结合位点多肽和单链Fv(sFv)分子。 参见例如，属于Huston等的美国专利Nos. 5, 132, 405和5, 091, 513;以及以属于Ladner等的美国专利No. 4，946，778。抗体的Fe结构域的效应子作用包括吞噬作用、炎症介质的释放、抗体产生的调控以及最重要地依赖抗体的细胞介导的细胞毒性(ADCC)和补体依赖细胞毒性(⑶C)。这些效应子作用的任一个被诱导的程度取决于Fe结构域与相关蛋白质介质的相互作用、Fe Y受体和Clq的相关作用，并且差异取决于I gG亚类恒定区(Fe)和它们与这些蛋白质的相互作用。IgGl的Fe结构域与免疫系统效应细胞上的Fe Y RI,、Fc Y RIIa和Fe Y RIII相互作用。不同Fe Y受体的精确作用仍待阐明,但Fe Y RIIIA据认为是NK细胞而且还是单核细胞和巨噬细胞上主要表达的最重要的ADCC介导受体。IgGl也结合Clq并且可触发主要由表达Fe YRIII的NK细胞介导的⑶C。IgG4Fc结构域具有大大减少的对不同Fe Y受体和Clq的结合亲和力，相应于减少的ADCC和⑶C。然而IgGl通常显示对ADCC和⑶C两者的高活性，IgG4据认为具有低ADCC或⑶C活性至无ADCC或⑶C活性。当与其他IgG同种型mAb相比,效应器阴性IgG4mAb的结合亲和力大大减少,如果不是被消除的话。然而，与Brambe I I受体(FcRn)相互作用的能力保持在IgG4中，从而通过延长的半衰期影响IgG4同种型mAb的药物动力学。因此，存在对提供与人IgG4Fc分子结合的用于治疗IL-31介导的炎症的抗人 IL-31的氨基酸序列的分子的需要。附图概述附图说明图1 是来自克隆 292. 12. 3. 1,292. 84.1. 6,292. 63. 5. 3 和 294. 144. 3. 5 的轻链和重链的可变结构域的氨基酸序列的比对。图1 :根据Kabat编号的序列，其中CDR用下划线标明。图2是来自克隆292. 12. 3.1和292. 84.1. 6的轻链和重链的可变区的氨基酸序列的比对。图2 :根据Kabat编号的序列，其中⑶R用下划线标明。图3和4是小鼠抗人IL-31单克隆抗体的轻链和重链可变区的氨基酸序列的比对。图3 :来自Bin IA的小鼠抗-人IL31杂交瘤的预测的VL和VL的氨基酸序列的比对， 其中，对残基进行了编号并根据Kabat对CDR进行了定义；用下划线标出CDR;N_连接的糖基序标亮成灰色”表示与上面的序列一致。图4 :来自Bin IA的小鼠抗-人IL31杂交瘤的预测的VL和VL的氨基酸序列的比对，其中，对残基进行了编号并根据Kabat对CDR进行了定义；用下划线标出CDR ；N-连接的糖基序标亮成灰色；“.”表示与上面的序列一致。专利技术详述在更详细地示于本专利技术之前，定义下列术语对于理解其是有帮助的。如在此使用的，术语“抗体”包括多克隆抗体、亲和-纯化的多克隆抗体、单克隆抗体，以及抗原-结合片段，例如F(ab’)2和Fab蛋白水解片段。一般而言，工程化的完整抗体或片段，例如嵌合抗体、Fv片段、单链抗体等，以及合成的抗原-结合肽和多肽也包括在内。非人抗体可通过移植非人CDR至人的框架区和恒定区，或通过整合整个非人的可变结构域(任选通过置换暴露残基用类似人的表面来“掩饰”它们，其中产物是一种“镶嵌化的 (veneered)”的抗体)来进行人源化。在一些情况中，人源化抗体可在人可变区框架结构域中保留非-人残基，以增强正常的结合特性。通过人源化抗体，可延长生物半衰期，并减小在施用给人 时不利的免疫反应的可能性。术语“嵌合抗体”指其轻链和重链基因通常通过遗传工程，从属于不同种属的免疫球蛋白可变区和恒定区基因构建而来的抗体。例如，可将来自小鼠单克隆抗体的基因的可变区片段与人恒定区片段，例如Y I和Y 3连接。因此，典型的治疗性嵌合抗体是一种杂合蛋白，其由来自小鼠抗体的本文档来自技高网...
【技术保护点】
分离的单克隆抗体或其抗原?结合片段，所述单克隆抗体或抗原?结合片段与在美国典型菌种保藏中心保藏的、具有ATCC专利保藏名称PTA?6815的杂交瘤产生的单克隆抗体竞争对由SEQ?ID?NO：2的氨基酸残基27?164组成的多肽的结合，其中所述单克隆抗体具有人IgG4重链免疫球蛋白恒定结构域，和其中所述抗原?结合片段还包含人IgG4重链免疫球蛋白恒定结构域，并且其中所述单克隆抗体或抗原?结合片段减少了所述多肽在其同源受体上的信号转导。
【技术特征摘要】
2006.09.01 US 60/824,403;2007.02.20 US 60/890,7921.分离的单克隆抗体或其抗原-结合片段，所述单克隆抗体或抗原-结合片段与在美国典型菌种保藏中心保藏的、具有ATCC专利保藏名称PTA-6815的杂交瘤产生的单克隆抗体竞争对由SEQ ID NO :2的氨基酸残基27-164组成的多肽的结合，其中所述单克隆抗体具有人IgG4重链免疫球蛋白恒定结构域，和其中所述抗原-结合片段还包含人IgG4重链免疫球蛋白恒定结构域，并且其中所述单克隆抗体或抗原-结合片段减少了所述多肽在其同源受体上的信号转导。2.权利要求1的分离的单克隆抗体或抗原-结合片段，其中所述单克隆抗体或抗原-结合片段是人源化的。3.分尚的多核苷酸，其编码， a)权利要求1-2任一项的单克隆抗体或抗原-结合片段； b)分离的单克隆抗体或其抗原-结合片段，包含轻链可变区和重链可变区，其中所述轻链可变区含有下列⑶R 具有SEQ ID NO: 54所示氨基酸序列的CDRl; 具有SEQ ID NO:55所示氨基酸序列的CDR2;和 具有SEQ ID NO:56所示氨基酸序列的CDR3; 所述重链可变区含有下列CDR 具有SEQ ID NO: 51所示氨基酸序列的CDRl; 具有SEQ ID NO:52所示氨基酸序列的⑶R2;和 具有SEQ ID NO:53所示氨基酸序列的⑶R3; 其中，所述单克隆抗体具有人IgG...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·W·西亚戴克，J·比尔斯伯勒，S·莱纳，
申请(专利权)人：津莫吉尼蒂克斯公司，
类型：发明
国别省市：
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