本发明专利技术涉及一种胃黏膜样品中幽门螺旋杆菌的化学发光免疫测定法，包括以下步骤：（a）制作带检测物质的样品稀释液、（b）抗体-抗原复合体的形成、（c）把步骤（b）的样品和步骤（b）所得到的抗体-抗原复合体进行分离、（d）抗体-抗原-抗体复合体的形成、（e）发光底物的添加和（f）测定标记的抗体的量，所述样品稀释液含有蛋白质和碱性物质，样品稀释液的pH在8.0~10之间。本发明专利技术胃黏膜样品中幽门螺旋杆菌的化学发光免疫测定法通过含有蛋白质和碱性物质的样品稀释液，保证了试验结果的准确性，同时采用的发光底物成本低廉，而复合型增强剂使光信号增强而持久。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种胃黏膜样品中幽门螺旋杆菌的化学发光免疫测定法。
技术介绍
幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori ,H. pylori)是一种在人的胃肠道上部发现的细菌，已经发现它与胃十二指肠疾病如消化性溃疡、胃炎和其它疾病有关。按来源把该细菌属弯曲杆菌属，然后根据有关它的超微结构和脂肪酸组分方面更详细的资料再分在螺杆菌属。幽门螺旋杆菌的检测方法很多，常用方法有(I)细菌培养法。该方法是诊断幽门螺旋杆菌的“黄金标准”。该方法能直接证明H.pylori的存在，无假阳性出现，同时还可作药敏试验。对不同菌株作遗传因子研究。但是，分离培养技术条件较高。且需一定的培养时间，可有假阴性出现，尚未能广泛开展。(2)尿素酶试验。幽门螺旋杆菌能够产生大量很高活性的尿素酶，而其他细菌罕有如此高的尿素酶活性。基于此原理，多采用pH〈6.0，一般情况下试剂颜色不变。如果胃内有H.pylori感染，当标本放人试剂中,H. pylori所产生的尿素酶则分解尿素产生氨,使pH升高，导致剂酚红变色-粉红色。尿素酶试验方法简便实用、快速灵敏。能在I分钟内判断结果，且镜检完后就可及时治疗。(3)组织病理学检查方法较多，有HE染色、Warthin-Starry染色、Giemsa染色、 石炭酸复红染色、Gimenez染色、吖啶橙染色、间接免疫光法、相差显微镜观察、无标记抗体 PAP染色法、双特异抗体酶免疫染色法、寡核苷酸探针检查等方法。以Warthin-Starry染色、Gimenez染色效果最佳而常用。但是该检测方法繁琐费时，需要一定的技术，有一定的假阳性。(4)呼气试验。感染H. pylori的患者口服同位素标记的尿素溶液。则尿素分解后产生的同位素C02从肺呼出。对于已经做胃肠镜检查后的所获得的胃黏膜活检标本，主要采用快速尿素酶法和病理检测两种方法检查可能存在的幽门螺旋杆菌。一般而言，这两个检测方法具有较高的一致性，但是，并不是可以相互取代，仍然有不一致的地方。不一致的原因可有(1)H.pylori胃内分布有差异，快速尿素酶法是检测一块组织。存在标本取样能否取到的问题， 而病理只是一块组织几块切片，取样的问题更为突出。(2)尿素酶活性和H. pylori的不一致。虽然H. pylori能够产生大量很高活性的尿素酶，而其他细菌罕有如此高尿素酶活性。但是目前发现，抑酸药物、一些抗菌素等会影响尿素酶试验，而抑酸药物有可能为患者服用。(3)pH法，因为其他混杂的尿素酶，颜色判断的视觉误差等存在假阳性。(4)病理形态学上可有其他相似的螺杆菌、弧菌等干扰。免疫学检测主要是利用抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种手段，我国免疫学的检测基本历经了放射免疫法(RIA)、酶联免疫法(ELISA)和化学发光免疫法(CLIA)， 化学发光免疫法(Chemiluminescence Immunoassay, CLIA)是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。其检测原理与放射免疫(RIA)和酶免疫(EIA)相似，不同这处是以发光物质代替放射性核素或酶作为标记物，并藉助其自身的发光强度直接进行测定。化学发光免疫法既具有放射免疫的高灵敏度，又具有酶联免疫的操作简便、快速的特点，易于标准化操作，且测试中不使用有害的试剂，试剂保持期长，近年来临床上已应用于检测各种激素、肿瘤标志物、药物及其他微量生物活性物质，但是由于样本取样困难等原因很少应用于胃黏膜样品中幽门螺旋杆菌的检测，而传统的对于胃黏膜样品中幽门螺旋杆菌的检测不是很可靠，存在一定的假阳性，检测结果不准确，同时成本高。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述不足，提供一种成本低廉，检测结果直观、准确的胃黏膜样品中幽门螺旋杆菌的化学发光免疫测定法。本专利技术的目的是这样实现的一种胃黏膜样品中幽门螺旋杆菌的化学发光免疫测定法，包括以下步骤Ca)制作带检测物质的样品稀释液将含有幽门螺旋杆菌的一种胃黏膜样品悬浮于样品稀释液；(b)抗体-抗原复合体的形成把样品稀释液中的胃黏膜样品与抗幽门螺旋杆菌抗原的第一种多克隆抗体接触以形成抗体-抗原复合体；(C)把步骤(b)的样品和步骤(b)所得到的抗体-抗原复合体进行分离；Cd)抗体-抗原-抗体复合体的形成把步骤(C)得到的分离后的抗体-抗原复合体暴露于抗幽门螺旋杆菌抗原的第二种多克隆抗体，并把抗幽门螺旋杆菌抗原的第二种多克隆抗体的一部分与复合体反应，其中所述的第一种多克隆抗体和第二种多克隆抗体中的其中一种多克隆抗体结合在一种固体载体上，而另一种多克隆抗体用一种检测剂(酶)进行标记；Ce)发光底物的添加在含有抗体-抗原-抗体复合体的固体载体中添加发光底物；Cf)测定在酶催化作用下发光底物产生的光信号的量所述样品稀释液含有蛋白质和偏碱性物质，样品稀释液的PH在8. (TlO之间。本专利技术胃黏膜样品中幽门螺旋杆菌的化学发光免疫测定法，所述步骤(a)中样品稀释液中的蛋白质为选自胎(小)牛血清、正常山羊血清、豚鼠血清、马血清、酪蛋白、白蛋白、明胶和牛血清白蛋白中的一种。本专利技术胃黏膜样品中幽门螺旋杆菌的化学发光免疫测定法，所述步骤(a)样品稀释液中的碱性物质包含但不限于三羟甲基甲胺基丙磺酸、N, N-双(2-羟乙基)甘氨酸、三羟甲基氨基甲烷、N-三-(羟甲基)甲基氨基乙酸、4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸半钠盐、N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸、3- (N-吗非啉)乙磺酸、四硼酸钠缓冲液、碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种或多种组合，其中碱性物质为PH大于8的缓冲液。本专利技术胃黏膜样品中幽门螺旋杆菌的化学发光免疫测定法，所述步骤(a)样品稀释液中还设有胃蛋白酶抑制剂。本专利技术胃黏膜样品中幽门螺旋杆菌的化学发光免疫测定法，所述胃蛋白酶抑制剂包含但不限于抑肽素、硫柳汞中的一种。本专利技术胃黏膜样品中幽门螺旋杆菌的化学发光免疫测定法，其中步骤(d)中固体载体为酶标反应板或纤维素膜。本专利技术胃黏膜样品中幽门螺旋杆菌的化学发光免疫测定法，其中步骤(d)中检测剂选自辣根过氧化物酶。本专利技术胃黏膜样品中幽门螺旋杆菌的化学发光免疫测定法，其中步骤(d)中检测剂选自辣根过氧化物酶。本专利技术胃黏膜样品中幽门螺旋杆菌的化学发光免疫测定法，所述步骤(e)中发光底物为鲁米诺(Luminol)底物,鲁米诺(Luminol)底物含有鲁米诺、过氧化氢和复合型增强剂。本专利技术胃黏膜样品中幽门螺旋杆菌的化学发光免疫测定法，所述复合型增强剂为对碘苯酚。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是本专利技术胃黏膜样品中幽门螺旋杆菌的化学发光免疫测定法通过含有蛋白质和碱性物质的样品稀释液，保证了试验结果的准确性，同时采用的发光底物成本低廉，而复合型增强剂使光信号增强而持久。具体实施方式 本专利技术测定胃黏膜样品中幽门螺旋杆菌的化学发光免疫测定法，具体操作步骤如下Ca)制作带检测物质的样品稀释液将含有幽门螺旋杆菌的一种胃黏膜样品悬浮于含有蛋白质和碱性物质的样品稀释液， 样品稀释液的PH在8 10为宜，其中pH=8的时候，检测的效果最好，另外还添加有胃蛋白酶抑制剂，胃蛋白酶抑制剂包含但不限于抑肽素、硫柳汞中的一种。其中蛋白质是指选自胎(小)牛血清、正常山羊血清、豚鼠血清、马血清、酪蛋白、本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种胃黏膜样品中幽门螺旋杆菌的化学发光免疫测定法包括以下步骤：（a）制作带检测物质的样品稀释液将含有幽门螺旋杆菌的一种胃黏膜样品悬浮于样品稀释液；（b）?抗体?抗原复合体的形成把样品稀释液中的胃黏膜样品与抗幽门螺旋杆菌抗原的第一种多克隆抗体接触以形成抗体?抗原复合体；（c）把步骤（b）的样品和步骤（b）所得到的抗体?抗原复合体进行分离；（d）抗体?抗原?抗体复合体的形成把步骤（c）得到的分离后的抗体?抗原复合体暴露于抗幽门螺旋杆菌抗原的第二种多克隆抗体，并把抗幽门螺旋杆菌抗原的第二种多克隆抗体的一部分与复合体反应，?其中所述的第一种多克隆抗体和第二种多克隆抗体中的其中一种多克隆抗体结合在一种固体载体上，而另一种多克隆抗体用一种检测剂进行标记；（e）发光底物的添加在含有抗体?抗原?抗体复合体的固体载体中添加发光底物；（f）测定发光底物产生的光信号的量其特征是：所述样品稀释液含有蛋白质和碱性物质，样品稀释液的pH在8.0~10之间。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：奚伟红，王布强，王京，高淑舫，朱丹丹，
申请(专利权)人：江苏创生生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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