幽门螺杆菌抗原群制造技术

本发明专利技术提供了一组幽门螺杆菌新型抗原，并公开了这些抗原在诊断幽门螺杆菌感染中的用途，包括上述诊断的具体方法及可用于这种方法中的试剂盒。此外，还提供了这些抗原的新型抗原性片段，以及含有至少一种抗原或者含一种或多种抗原性片段的疫苗。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及幽门螺杆菌新型抗原，或其抗原性片段，这些抗原或其片段在检测幽门螺杆菌中的应用及包含这些抗原或其片段的试剂盒，含有这些抗原或其片段的疫苗，以及分离这些抗原的方法。肠道感染在哺乳动物，尤其在人体内，通过活化共同粘膜免疫系统，激发了粘膜分泌物(如唾液)中的免疫应答。尽管该应答通常以IgA抗体的出现为特征，但常常伴随引起了血清中的抗体应答。但分泌物(包括唾液)中的免疫应答在抗原(如细菌或病毒)从体内排除后迅速减弱。因此，粘膜分泌物中抗体的存在反映了当前感染，即同期感染。例如，就微生物感染而言，粘膜分泌物中的抗体，即后文所指的分泌型抗体，反映了微生物的当前定居状态，如定居在肠道内，因而可用于监控同期感染。另一方面，当微生物从体内排除后，血清抗体还将持续一段时间。故血清抗体检验阳性既反映抗原的过往存在又反映抗原的当前存在，对临床意义不大。而分泌型抗体检验阳性则指示当前或同期有微生物感染。诊断幽门螺杆菌的感染可经显微镜检查，胃粘膜活检标本的微生物学培养或尿素酶检测，尿素呼吸检验(urea breath test)或用ELISA法检测血清中特异性抗体的存在。预计幽门螺杆菌在胃粘膜部位的感染会刺激胃分泌物中的IgA抗体应答。但结果发现粘膜分泌物中的幽门螺杆菌特异性抗体是IgG类而非预期的IgA类。如果有的话，也只是检测到极少量的IgA抗体。因而AU-A-9067676涉及粘膜分泌液中特异于幽门螺杆菌抗原的IgG的检测，并提供了监控哺乳动物体内由该微生物所致的当前(即同期)感染的方法。相关学术出版物为Witt等，粘膜免疫学前沿，卷1，693-696页(1991)。在美国胃肠道学协会年会的会议录中，幽门螺杆菌阳性病人唾液中IgG抗体的存在已引起了一些注意。Czinn等在1989年的会议录中公布了这种抗体的存在，此后，Larsen等人于1991年五月的会议录中总结道唾液中的IgG水平是抗生素治疗过程中评估治疗反应的一种实用性的非侵入性标志。在1992年4月的会议录中，Landes等证实了前人的观察结果，并发现，对于幽门螺杆菌阳性病人、尤其是其它检验方法不太实用的大范围群体或幼儿群体来说，测量针对幽门螺杆菌的唾液IgG是一种简单的非侵入性检验。WO-A-9322682公开了一种方便可信的体外幽门螺杆菌检验法。该检验利用了抗原制剂与受检哺乳动物粘膜分泌液中的IgG抗体进行反应。WO-A-9625430揭示了幽门螺杆菌的一种新型抗原，可用于诊断性检验以鉴定幽门螺杆菌的感染。对于鉴定、分离并因此提供能用于诊断性检验的幽门螺杆菌新型抗原的需求从未间断。这些抗原应该是特异性的，确信可纯化的，并以在这种检验中的良好专一性和无假阳性结果为其特征。此外，它们也许能作为可有效用于治疗或预防幽门螺杆菌感染之疫苗的基础。故，第一方面，本专利技术提供了一种蛋白质，它是幽门螺杆菌抗原，在变性和还原条件下测得其分子量在约43kDa至约53kDa之间。在一个较优选的实施方案中，该抗原性蛋白质的分子量为约43kDa，并在其氨基末端有以下氨基酸序列M D L ？ V L G I N T AMet-Asp-Leu- ？-Val-Leu-Gly-Ile-Asn-Thr-Ala.在第二个较优选的实施方案中，该抗原性蛋白质的分子量约为43kDa，并在其氨基末端有以下氨基酸序列M R V P K(S) K G F A I L S K在本专利技术此方面的第三个较优选实施方案中，该抗原性蛋白质的分子量约为53kDa，并在其氨基末端有以下氨基酸序列？ ？ G K A P D F K P A？- ？-Gly-Lys-Ala-Pro-Asp-Phe-Lys-Pro-Ala本专利技术的第二方面提供一种蛋白质，它是幽门螺杆菌的抗原，并具有以下特征i)在变性及还原条件下测得的分子量约为54kDa，并有以下N-末端氨基酸序列M L K (V) I (E) K (V或S) L E (S) I；ii)在天然(非变性)条件下测得的分子量约为370kDa，并有以下N-末端氨基酸序列M (K) L T I - L E V (E)；iii)在天然(非变性)条件下测得的分子量约为140kDa，并有以下N-末端氨基酸序列M Y I P Y V I E；iv)在天然(非变性)条件下测得的分子量约为90kDa，并有以下N-末端氨基酸序列M N L D C (S) L Q V；v)在变性及还原条件下测得的分子量约为15.9-16.9kDa，并有以下N-末端氨基酸序列G K I G I F F G T D S G N A E A I A E K；vi)在天然(非变性)条件下测得的分子量约为344kDa，并有以下N-末端氨基酸序列M L V T K L A P D F L A P ？V；或vii)有以下N-末端氨基酸序列的一种超氧化物歧化酶M F T L R E L P F A K D S N G D F L S P上述序列中，括号内的氨基酸可替代括号前氨基酸。本文所述的所有蛋白质中任一种的部分或片段本身也可能有抗原性，因此，第三方面，本专利技术提供了本专利技术中蛋白质的抗原性片段。具体地说，本专利技术提供了有以下序列的抗原性片段M D L ？ V L G I N T AMet-Asp-Leu- ？-Val-Leu-Gly-Ile-Asn-Thr-Ala；？ ？ G K A P D F K P A？- ？-Gly-Lys-Ala-Pro-Asp-Phe-Lys-Pro-Ala.M L K(V) I(E) K(V或S) L E(S) I；M R V P K(S) K G F A I L S K；M(K) L T I - L E V(E)；M Y I P Y V I E；M N L D C(S) L Q V；G K I G I F F G T D S G N A E A I A E K；M L V T K L A P D F L A P ？V；或M F T L R E L P F A K D S N G D F L S P其中，上述序列中，括号内的字母表示可替代括号前氨基酸的一些氨基酸。由于分子量测定操作的局限性，本文所述抗原的分子量必需表示为近似数。分子量专指在天然(非变性)条件或变性条件下所测得的值。本领域的技术人员均知不同的人或甚至同一人在不同情况下操作所得结果可能会有轻微差异，故本说明书所引用的近似分子量数值在读取时应考虑有±5％、甚至±10％的波动。技术人员应能理解片段的序列可能会有一些变动，但仍保持抗原性不变。可用本领域技术人员熟知的一些方法检验诸片段和/或其变体的抗原性。这些变体亦构成本专利技术的一部分。本专利技术的抗原性蛋白质或其片段可以纯化的或分离的制剂形式单独提供，或作为与其它幽门螺杆菌抗原性蛋白质的混合物的参与部分来提供。故第四方面，本专利技术提供一种抗原组合物，内含一种或多种本专利技术的蛋白质和/或一种或多种其抗原性片段。这样的组合物可用于检测和/或诊断幽门螺杆本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛋白质，它是幽门螺杆菌抗原，在变性及还原条件下测得其分子量在约４３ｋＤａ至约５３ｋＤａ之间。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：AW克里普斯，RL克兰西，L麦克沙尼，CJ史密斯，DR泰里曼，B霍，
申请(专利权)人：科特克斯英国有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]