一株重组大肠杆菌及用其制备溶血性磷脂酶C的方法技术

本发明专利技术提供一种重组大肠杆菌及用其制备溶血性磷脂酶C的方法。用目的基因来源于铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）的重组大肠杆菌BL21（DE3）/pET-plcH，CCTCC?No.M?2012425作为发酵菌株进行液体发酵来制备溶血性磷脂酶C，其制备方法包括种子培养、液体发酵培养以及粗酶液的提取。利用本发明专利技术菌株通过液体发酵来生产溶血性磷脂酶C，产酶量和酶活性高，安全性好，制酶工艺简单，成本低，易于工艺放大，在油脂精炼、磷脂改性、医疗等领域具有一定的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程和微生物发酵
，具体涉及一株重组大肠杆菌及用其制备溶血性磷脂酶C的方法。
技术介绍
磷脂酶C (PLC)，又可称为可定向分解磷脂生成甘油二酯和磷酸单酯，细菌来源的磷脂酶C根据底物特异性的不同主要分为磷脂酰特异性磷脂酶C (PC-PLC)和磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C (PI-PLC)0 PLC水解产物甘油二酯是一种生理活性物质，在细胞信号传导途径上起着第二信使的作用，能激活蛋白激酶C (PKC)而引起细胞增殖、分化、收缩、分泌和代谢等功能变化，此外还具有明显的抗血小板粘附、聚集等功能，因此又被称作溶血性磷脂 酶C。溶血性PLC对新型抗血小板药物、心脑血管疾病类药物的开发具有一定的潜在价值，对抗静脉血栓及高血压医疗方面的研究意义重大。随着对PLC研究的不断深入及工业发展的需求，PLC的应用价值已经逐渐从药品生产扩展至油脂精炼、磷脂改性、食品加工等领域。例如在油脂精炼中，利用PLA和PLC混合物进行酶法脱胶，可完全除去磷脂，比水、酸或苛性碱脱胶具有更高的油产率；食品工业中PLC可用来改善在面包在烤制时其表面产生的老化现象，缓和梨皮状表皮。近年来，随着PLC在食品本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株重组大肠杆菌（Escherichia?coli）BL21（DE3）/pET?plcH，保藏编号为CCTCC?No.M?2012425。

【技术特征摘要】
1.一株重组大肠杆菌(Escherichia coli)BL21 (DE3)/pET-plcH，保藏编号为 CCTCCNo. M 2012425。2.根据权利要求I所述重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-pIcH, CCTCC No. M2012425，其特征在于由下述方法制得 (1)以保藏编号为CGMCCNo. I. 205的铜绿假单胞菌(P. aeruginosa)的基因组为模板，克隆得到溶血性磷脂酶C基因，其碱基序列如SEQ ID NO :I所示； (2)将步骤(I)所得溶血性磷脂酶C基因克隆到表达载体pET-28a( + )上，得到重组载体； (3)将步骤(2)所得重组载体转化大肠杆菌感受态细胞，构建得到重组大肠杆菌。3.用权利要求I 2任一项所述重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-plcH，CCTCCNo. M2012425制备溶血性磷脂酶C的方法，其特征在于以该重组大肠杆菌为发酵菌株进行液体发酵，制备溶血性磷脂酶C。4.根据权利要求3所述制备溶血性磷脂酶C的方法，其特征在于具体步骤如下 (1)种子培养将所述重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-plcH，CCTCC No. M2012425接种于种子培养基中，于30 37°C振荡培养8 12h，摇床转速150 200r/min...

【专利技术属性】
技术研发人员：张梁，石贵阳，赵金星，丁重阳，顾正华，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：