msCT-CTx融合蛋白转基因工程菌株制造技术

msCT-CTx融合蛋白转基因工程菌株，它涉及一种融合蛋白转基因工程菌株。解决目前尚无同时有效治疗骨质疏松和止痛药品的缺陷。msCT-CTx融合蛋白转基因工程菌株大肠杆菌BL21（DE3-msCT/CTx）按以下步骤制备：1）获得融合蛋白DAN片段；2）双酶切质粒；3）酶连接；4）转化大肠杆菌BL21。本发明专利技术可用于医药制备领域。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种融合蛋白转基因工程菌株。
技术介绍
老年人骨质疏松发病率较高，全球有2亿骨质疏松患者，并且女性多于男性。根据世界卫生组织（WHO）的标准，美国国家健康和营养调查（NHANES Ⅲ，1988~1994年）结果表明，骨质疏松严重影响老年人生活质量，50岁以上人群中，1/2的女性、1/5的男性在他们的一生中都会出现骨质疏松性骨折，一旦患者经历了第一次骨质疏松性骨折，继发性骨折的危险明显加大。中国老年人居于世界首位，现有骨质疏松症患者9000万，占总人口的7.1%。随着社会老龄化的进程，骨质疏松症的发病率呈上升趋势，预计到2050 年将增加到2.21亿，那时全世界一半以上的骨质疏松性骨折将发生在亚洲，绝大部分在中国。有学者对1995~1996年美国骨质疏松、心肌梗死、卒中和乳腺癌的年发生数进行调查显示，每年发生骨质疏松性骨折150万次，其中椎体骨折70万次，腕部骨折20万次，髋部骨折30万次，其它骨折30万次。当骨折发生时，患者最初的感受便是疼痛。在骨折早期治疗过程中，疼痛从始至终都存在着。它不仅影响患者的治疗效果，同时也直接影响肢体的功能恢复。不同类型的骨折均存在不同程度的疼痛、功能障碍、肢体肿胀，而疼痛是首先应考虑解决的问题。因为疼痛可引起交感神经兴奋，继而反射性抑制胃肠功能，引起食欲减退；疼痛还可影响睡眠质量，引起体内多种激素的释放，产生相应的病理生理改变，使机体抵抗力下降,直接影响创伤愈合及功能恢复。因此解除骨折患者的疼痛感是治疗的重要组成部分。如果患者服用多种药物治疗骨质疏松并止痛，容易产生药物拮抗反应；若要错开服药时间一方面要靠考虑药物的半衰期，另一方面还要考虑药物有效浓度，而且给患者造成不便。目前缺乏一种可以同时有效治疗骨质疏松和止痛的药品。
技术实现思路
本专利技术要解决目前尚无同时有效治疗骨质疏松和止痛药品的缺陷，而提供的一种msCT-CTx融合蛋白转基因工程菌株。msCT-CTx融合蛋白转基因工程菌株名为大肠杆菌BL21（DE3-msCT/CTx），大肠杆菌BL21（DE3-msCT/CTx）按以下步骤制备：一、将含有msCT-CTx融合蛋白基因的质粒载体pUC（msCT/CTx）用BamH I和EcoRⅠ双酶切，获得msCT-CTx融合蛋白的DAN片段；二、用BamHI和EcoRⅠ双酶切质粒pGEX-6P-1；三、msCT-CTx融合蛋白的DAN片段与经过双酶切的载体pGEX-6P-1进行酶连接，然后16℃放置连接过夜，得到载体pGEX-msCT/CTx；四、用载体pGEX-msCT/CTx转化大肠杆菌BL21（DE3），选择阳性重组子，即获得msCT-CTx融合蛋白转基因工程菌大肠杆菌BL21（DE3-msCT/CTx）。本专利技术中msCT-CTx融合蛋白的基因序列如SEQ ID NO：1所示。本专利技术中msCT-CTx融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。由于骨折患者均为突然致伤，无思想准备，再加上相关知识缺乏，治疗过程长；患者因疼痛恐惧常呈被动体位，特别是老年骨折患者，往往会引起将来功能障碍，而且恢复期较长。本专利技术msCT-CTx融合蛋白转基因工程菌大肠杆菌BL21（DE3-msCT/CTx）发酵产生的msCT-CTx融合蛋白可治疗骨质疏松的同时止痛，对于骨质疏松所引发骨折的患者治疗效果显著，而且由于可以明显减轻或消除患处疼痛感，患者心理负担小、康复快，愈后功能恢复期短。本专利技术用于治疗骨质疏松和止痛的msCT-CTx融合蛋白微生物制剂，不产生拮抗反应，使用安全。本专利技术msCT-CTx融合蛋白转基因工程菌大肠杆菌BL21（DE3-msCT/CTx）发酵产生的msCT-CTx融合蛋白共60个氨基酸。本专利技术采用生物基因工程手段获得大肠杆菌BL21（DE3-msCT/CTx）。采用本专利技术基因工程菌大肠杆菌BL21（DE3-msCT/CTx）可大规模发酵生产msCT-CTx融合蛋白，具有广泛应用前景。本专利技术为治疗骨质疏松和止痛奠定了物质基础。具体实施方式本专利技术技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。具体实施方式一：本实施方式msCT-CTx融合蛋白转基因工程菌株名为大肠杆菌BL21（DE3-msCT/CTx），大肠杆菌BL21（DE3-msCT/CTx）按以下步骤制备：一、将含有msCT-CTx融合蛋白基因的质粒载体pUC（msCT/CTx）用BamH I和EcoRⅠ双酶切，获得msCT-CTx融合蛋白的DAN片段；二、用BamHI和EcoRⅠ双酶切质粒pGEX-6P-1；三、msCT-CTx融合蛋白的DAN片段与经过双酶切的载体pGEX-6P-1进行酶连接，然后16℃放置连接过夜，得到载体pGEX-msCT/CTx；四、用载体pGEX-msCT/CTx转化大肠杆菌BL21（DE3），选择阳性重组子，即获得msCT-CTx融合蛋白转基因工程菌大肠杆菌BL21（DE3-msCT/CTx）。本实施方式步骤四采用电击转化法转化大肠杆菌BL21（DE3）。具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点在于：步骤一中质粒载体pUC（msCT/CTx）酶切反应体系为其他步骤及参数与具体实施方式一相同。具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二的不同点在于：步骤三中质粒pGEX-6P-1酶切反应体系为其他步骤及参数与具体实施方式一或二相同。具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一、二或三的不同点在于：步骤二中酶连接反应体系为其他步骤及参数与具体实施方式一、二或三相同。具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一的不同点在于：步骤一中msCT-CTx融合蛋白的基因序列如SEQ ID NO：1所示。其他步骤及参数与具体实施方式一至四之一相同。本实施方式msCT-CTx融合蛋白的核酸序列由生物工程公司合成，并由生物工程公司制成含有融合蛋白的核酸的质粒载体pUC（msCT/CTx）。具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一的不同点在于：步骤一中msCT-CTx融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。其他步骤及参数与具体实施方式一至五之一相同。具体实施方式七：本实施方式msCT-CTx融合蛋白转基因工程菌株名为大肠杆菌BL21（DE3-msCT/CTx），大肠杆菌BL2本文档来自技高网...

【技术保护点】
msCT？CTx融合蛋白转基因工程菌株，其特征在于msCT？CTx融合蛋白转基因工程菌株名为大肠杆菌BL21（DE3？msCT/CTx），大肠杆菌BL21（DE3？msCT/CTx）按以下步骤制备：一、将含有msCT？CTx融合蛋白基因的质粒载体pUC（msCT/CTx）用BamH？I和EcoRⅠ双酶切，获得msCT？CTx融合蛋白的DAN片段；二、用BamHI和EcoRⅠ双酶切质粒pGEX？6P？1；三、msCT？CTx融合蛋白的DAN片段与经过双酶切的载体pGEX？6P？1进行酶连接，然后16℃放置连接过夜，得到载体pGEX？msCT/CTx；四、用载体pGEX？msCT/CTx转化大肠杆菌BL21（DE3），选择阳性重组子，即获得msCT？CTx融合蛋白转基因工程菌大肠杆菌BL21（DE3？msCT/CTx）。

【技术特征摘要】
1.msCT-CTx融合蛋白转基因工程菌株，其特征在于msCT-CTx融合蛋白转
基因工程菌株名为大肠杆菌BL21（DE3-msCT/CTx），大肠杆菌BL21（
DE3-msCT/CTx）按以下步骤制备：
一、将含有msCT-CTx融合蛋白基因的质粒载体pUC（msCT/CTx）用Bam
H I和EcoRⅠ双酶切，获得msCT-CTx融合蛋白的DAN片段；
二、用BamHI和EcoRⅠ双酶切质粒pGEX-6P-1；
三、msCT-CTx融合蛋白的DAN片段与经过双酶切的载体pGEX-6P-1进行
酶连接，然后16℃放置连接过夜，得到载体pGEX-msCT/CTx；
四、用载体pGEX-msCT/CTx转化大肠杆菌BL21（DE3），选择阳性重组
子，即获得msCT-CTx融合蛋白转基因工程菌大肠杆菌B...

【专利技术属性】
技术研发人员：余琼，
申请(专利权)人：黑龙江大学，
类型：发明
国别省市：