本发明专利技术涉及一种抗NKG2A的单克隆抗体。本发明专利技术提供的单克隆抗体或其片段的特征在于：与NKG2A特异性结合；不与人类Fcγ受体IIIa特异性结合；当结合到人类NK细胞上的NKG2A时，使所述NK细胞在靶人类细胞与所述NK细胞接触时溶解在靶细胞表面上带有HLA-E或Qa1b的所述靶人类细胞；进一步的特征在于不与NKG2C或NKG2E特异性结合。本发明专利技术还涉及包括单克隆抗体或其片段的药物组合物在制备用于治疗患者的自身免疫性或炎性障碍的药物中的应用。
【技术实现步骤摘要】
抗NKG2A的单克隆抗体本申请是申请日为2005年12月27日的题为“抗NKG2A的单克隆抗体”的中国专利申请No.200580045348.1的分案申请。
本专利技术涉及针对NK细胞表面受体NKG2A的单克隆抗体及其片段，以及生产和评价这样的抗体的方法。单克隆抗体及其片段在治疗免疫疾病，尤其是自身免疫性疾病以及其他要求调控NK细胞功能的疾病中是有用的。总体而言，本专利技术方法涉及使用抗体及其片段，以防止导致促成待治疗疾病病理的表达HLA-E或Qa1b的细胞如树突细胞或活化T细胞的溶解的NK细胞上NKG2A受体的刺激。
技术介绍
保持有效的免疫监视而不引起自身免疫反应需要效应T细胞反应的准确滴定。当免疫系统针对自身抗原发起免疫反应时便出现自身免疫性疾病(参见，例如，Ludewigetal.(1999)ImmunolRev.169：45-54)。尽管在引发和维持自身免疫性反应中涉及的机制还不清楚，但是可能涉及在次级淋巴器官中以前在免疫方面被忽视的抗原的出现。树突细胞是骨髓来源的抗原呈递细胞(APC)，其在免疫反应中发挥关键作用(参见，例如，O’Neilletal.(2004)Blood104：2235-2246)。DC通过吞噬、胞吞和胞饮作用将细菌、病毒、濒死细胞和各种复合分子加以内化。并入的蛋白被分解为肽，它们接着与MHCI和II类分子一起被呈递到DC细胞表面上。加载到MHCI类上的抗原通常来源于内源性蛋白并且由CD8+T细胞识别，而MHCII类加载的抗原通常来源于外源蛋白并且由CD4+T细胞识别。在抗原捕获之后，未成熟的DC细胞变成熟而形成了成熟的DC，它们表现出减少的吞噬作用，移动到淋巴组织并且具有增强的T细胞刺激能力。在淋巴组织中，DC起动原初T细胞，刺激它们的克隆扩增和分化，并且也可以与B细胞和本身免疫系统的细胞(包括NK细胞)相互作用。活化的NK细胞可以杀伤不成熟的DC细胞，而不是成熟的DC细胞。由于T淋巴细胞的抗原运送和初始敏化主要是通过抗原呈递树突细胞介导的，所以有可能通过树突细胞自身抗原的不合适的呈递至少部分地促进自身免疫性障碍。自然杀伤(NK)细胞是包括在非传统免疫中涉及的淋巴细胞的亚种群。NK细胞提供一种有效的免疫监督机制，由此可消除不希望的细胞如肿瘤细胞或病毒感染的细胞。NK细胞活性是通过包含两种活化和抑制信号的复杂机制进行调控的(参见，例如，Morettaetal.(2001)AnnuRevImmunol19：197-223；Morettaetal.(2003)EMBOJEPubDec18；Ravetchetal.(2000)Science290：84-89；Zambelloetal.(2003)Blood102：1797-805；Morettaetal.(1997)CurrOpinImmunol9：694-701；将其全部内容通过引用结合在此)。已证实多种不同的NK特异性受体在NK细胞介导的对HLAI类缺陷型靶细胞的识别和杀伤中起重要作用。这些受体(称为NKp30、NKp46和NKp44)是Ig超家族的成员。它们的交联(通过特异性mAb诱导)导致强烈的NK细胞激活，致使细胞内Ca++水平升高，触发细胞毒性和淋巴因子释放。重要的是，mAb介导的NKp30、NKp46和/或NKp44的活化导致对于多种靶细胞的NK细胞毒性的激活。这些发现为这些受体在天然细胞毒性中的一种中心性作用提供了证据。NK细胞由主要组织相容性复合物(MHC)I类-特异性抑制性受体进行负调控(etal.(1986)Nature319：675-8；Ohlenetal，(1989)Science246：666-8)。这些特异性受体与主要组织相容性复合体(MHC)I类分子或HLA的多态决定子相结合，并抑制自然杀伤(NK)细胞溶解。在人体内，称为杀伤Ig-样受体(KIR)的受体家族的某些成员识别HLAI类等位基因的组(参见，例如Yawataetal.(2002)CritRevImmunol22：463-82；Martinetal.(2000)Immunogenetics.51：268-80；Lanier(1998)AnnuRevImmunol.16：359-93；将其全部内容通过引用结合在此)。NK细胞上的另一重要的抑制性受体是CD94-NKG2A，其与非典型的MHCI类分子HLA-E相互作用(参见，例如Braudetal.(1998)Nature391：795-799；Leeetal.(1998)PNAS95：5199-5204；Vanceetal.(2002)PNAS99：868-873；Brooksetal.(1999)JImmunol162：305-313；Milleretal.JImmunol(2003)171：1369-75；Brooksetal.(1997)JExpMed185：795-800；VanBenedenetal.(2001)4302-4311；美国专利申请第20030095965号；将每一篇的内容都通过引证方式合并入本文中)。这些受体中的一些具有调节T细胞抗原受体-依赖性T细胞活化的阈值的能力。在罕见的抑制性受体缺乏的情况下，这些活化同工型(isoform)可能扩大T细胞效应器的功能并且促成自身免疫病理。NKG2A的氨基酸序列在哺乳动物(包括灵长类动物)中发生变化。例如，NKG2A蛋白的人类和猕猴形式共享少于90％的一致性，包括在配体结合结构域内的大约86％。对于用于调节NKG2A的疗法的努力(主要用于防止炎症)已集中在对非典型MHCI类分子、用于人类受体的HLA-E和用于小鼠受体的Qa-1b的研究上。对于细胞表面表达，这些MHC分子优选与来源于其他MHCI类分子的信号肽的肽结合。其他I类MHC分子的表达可以调控HLA-E的表达，因此，允许NK细胞在潜在的靶细胞中监控MHCI类依赖性抗原呈递途径的状态。细胞表面HLA-E的水平对于针对肿瘤和病毒感染细胞的NK细胞毒性是至关重要的。用于调节HLA-E表达或功能的治疗方案通常集中在利用HLA-I或HSP60肽来诱导用于防止发炎的保护状态，致使NK细胞不被活化。美国专利公开第20030095965号披露了一种抗体3S9，其与NKG2A、NKG2C和NKG2E结合。据称3S9引起这些受体的交联并且伴随着NK细胞介导的溶解的抑制。共同拥有的PCT专利公开WO2005/105849披露了一种抗体的应用，其中该抗体与NK受体(包括NKG2A)特异结合，以治疗患有粒状淋巴细胞(NK-LDGL)的NK型淋巴细胞增殖性疾病的患者。这样的抗体抑制NK细胞活性。已证明单克隆抗体对于各种疾病的诊断和治疗是非常有用的。治疗用单克隆抗体可以通过不同的机制起作用。一些抗体如利妥昔(Rituxan)识别在病态细胞(例如，肿瘤细胞)表面上存在的抗原(在利妥昔的情形下的CD20)，并且通过指导免疫细胞破坏所识别的细胞而起作用。其他抗体如将托西莫(Bexxar)、Oncolym或泽娃灵(Zevalin)连接于放射性同位素、化学治疗剂或毒素，导致与该抗体结合的细胞的直接杀伤。还有其他的抗体如巴利昔单抗(Basiliximab)和达利珠单抗(Daclizumab)(它们封闭IL本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种选自由Fab、Fab’、Fab’?SH、F(ab’)2、Fv片段、双抗体和单链抗体组成的组的单克隆抗体或其片段，其特征在于：a.与NKG2A特异性结合；b.不与人类Fcγ受体IIIa特异性结合；c.当结合到人类NK细胞上的NKG2A时，使所述NK细胞在靶人类细胞与所述NK细胞接触时溶解在靶细胞表面上带有HLA?E或Qa1b的所述靶人类细胞；并且d.进一步的特征在于不与NKG2C或NKG2E特异性结合。
【技术特征摘要】
2004.12.28 US 60/639,832;2004.12.28 US 60/639,4651.一种药物组合物在制备用于治疗患者的癌症的药物中的应用，所述癌症的特征为存在表达HLA-E的癌细胞，所述药物组合物包括单克隆抗体或其片段，所述单克隆抗体或其片段的特征在于以下各项：a.与NKG2A特异性结合；b.不与人类Fcγ受体IIIa特异性结合；以及c.当结合到人类NK细胞上的NKG2A时，使所述NK细胞在靶人类细胞与所述NK细胞接触时溶解在靶细胞表面上带有HLA-E或Qa1b的所述靶人类细胞，其中所述抗体包括可变重链区和可变轻链区，所述可变重链区包括SEQIDNO:2的氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)，所述可变轻链区包括SEQIDNO:6的氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)。2.根据权利要求1所述的应用，其中，所述单克隆抗体或其片段的进一步特征在于，不与NKG2C或NKG2E特异性结合。3.根据权利要求1或2所述的应用，其中，所述单克隆抗体或其片段的进一步特征在于，防止...
【专利技术属性】
技术研发人员：阿莱斯山德罗·莫雷塔，埃马努埃拉·马尔切纳罗，弗朗索瓦·罗马涅，帕斯卡莱·安德烈，
申请(专利权)人：依奈特制药公司，热那亚大学，
类型：发明
国别省市：
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