抗NKG2A的单克隆抗体制造技术

本发明专利技术涉及治疗免疫障碍的方法，尤其是自身免疫性障碍或炎性障碍，以及生产在用于治疗此类障碍的治疗方案中使用的抗体和其他化合物的方法。总体而言，本方法涉及使用抗体或其他的化合物来防止对ＮＫ细胞上的ＮＫＧ２Ａ受体的刺激所导致促成这些障碍病理的树突细胞的溶解。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及针对NK细胞表面受体NKG2A的单克隆抗体及其 片段，以及生产和评价这样的抗体的方法。单克隆抗体及其片段在 治疗免疫疾病，尤其是自身免疫性疾病以及其^f也要求调控NK细月包 功能的疾病中是有用的。总体而言，本专利技术方法涉及4吏用抗体及其 片段，以防止导致促成待治疗疾病病理的表达HLA-E或Qalb的细 胞如树突细胞或活化T细胞的溶解的NK细胞上NKG2A受体的刺 激。
技术介绍
保持有效的免疫监视而不引起自身免疫反应需要效应T细胞 反应的准确滴定。当免疫系统针对自身抗原发起免疫反应时便出现 自身免疫性疾病(参见，例如，Ludewig et al. (1999) Immunol Rev. 169:45-54 )。尽管在引发和维持自身免疫性反应中涉及的机制还不 清楚，但是可能涉及在次级淋巴器官中以前在免疫方面被忽视的抗 原的出现。树突细"包是骨ft来源的抗原呈递细力包(APC),其在免疫反应 中发4军关4建4乍用(参见，例3口， O'Neill et al. (2004) Blood 104:2235-2246)。 DC通过吞噬、胞吞和胞々大作用将细菌、病毒、濒 死细胞和各种复合分子加以内化。并入的蛋白被分解为肽，它们接 着与MHC I和II类分子一起被呈递到DC细胞表面上。力口载到 MHC I类上的抗原通常来源于内源性蛋白并且由CD8+T细胞识别，而MHC II类加载的抗原通常来源于外源蛋白并且由CD4+T细 胞识别。在抗原捕获之后，未成熟的DC细胞变成熟而形成了成熟 的DC，它们表现出减少的呑噬作用，移动到淋巴组织并且具有增 强的T细力包刺激能力。在-淋巴组织中，DC起动原初(na'i!ve) T细胞，刺激它们的克 隆扩增和分化，并且也可以与B细胞和本身免疫系统的细胞(包括 NK细胞)相互作用。活化的NK细胞可以杀伤不成熟的DC细胞， 而不是成熟的DC细胞。由于T淋巴细胞的抗原运送和初始敏化主 要是通过抗原呈递树突细胞介导的，所以有可能通过树突细胞自身自然杀伤(NK)细胞是包括在非传统免疫中涉及的淋巴细胞 的亚种群。NK细胞提供一种有效的免疫监督机制，由此可消除不 希望的细胞如肿瘤细胞或病毒感染的细胞。NK细胞活性是通过包 含两种活化和抑制信号的复杂才几制进行调控的(参见，例如， Moretta et al. (2001) Annu Rev Immunol 19:197-223; Moretta et al. (2003) EMBO J EPub Dec 18; Ravetch et al. (2000) Science 290:84-89; Zambello et al. (2003) Blood 102:1797-805; Moretta et al. (1997) Curr Opin Immunol 9:694-701;将其全部内容通过引用结合在此)。已证实多种不同的NK特异性受体在NK细胞介导的对HLA I 类缺陷型靶细胞的识别和杀伤中起重要作用。这些受体(称为 NKp30、 NKp46和NKp44 )是Ig超家族的成员。它们的交联(通 过特异性mAb诱导)导致强烈的NK细胞激活，致使细胞内Ca++ 水平升高，触发细胞毒性和淋巴因子释放。重要的是，mAb介导的 NKp30、 NKp46和/或NKp44的活化导致对于多种耙细胞的NK细 月包毒性的激活。这些发现为这些受体在天然细月包毒性中的一种中心 性作用提供了证据。NK细胞由主要组织相容性复合物(MHC ) I类-特异性抑制性 受体进行负调控(Karre et al. (1986) Nature 319:675-8; Ohlen et al， (1989) Science 246:666-8 )。这些特异性受体与主要组织相容性复合 体(MHC ) I类分子或HLA的多态决定子相结合，并抑制自然杀 伤(NK)细胞溶解。在人体内，称为杀伤Ig-样受体(KIR)的受 体家族的某些成员识别HLA I类等位基因的组(参见，例如Yawata et al. (2002) Crit Rev Immunol 22:463-82; Martin et al. (2000) Immunogenetics. 51:268-80; Lanier (1998) Annu Rev Immunol. 16:359-93;将其全部内容通过引用结合在此)。NK细胞上的另一重要的抑制性受体是CD94-NKG2A，其与非 典型的MHC I类分子HLA-E相互作用(参见，例如Bmud et al. (1998) Nature 391:795-799; Lee et al. (1998) PNAS 95:5199-5204; Vance et al. (2002) PNAS 99:868-873; Brooks et al. (1999) J Immunol 162:305-313; Miller et al. J Immunol (2003) 171:1369-75; Brooks et al. (1997) J Exp Med 185:795-800; Van Beneden et al. (2001) 4302-4311; 美国专利申请第20030095965号；将每一篇的内容都通过引证方式 合并入本文中)。这些受体中的一些具有调节T细胞抗原受体-依赖 性T细胞活化的阈值的能力。在罕见的抑制性受体缺乏的情况下， 这些活4匕同工型(isoform)可能扩大T细力包岁文应器的功能并且促成 自身免疫病理。NKG2A的氨基酸序列在哺乳动物(包括灵长类动 物)中发生变化。例如，NKG2A蛋白的人类和猕猴形式共享少于 90%的一致性，包括在配体结合结构域内的大约86°/。。对于用于调节NKG2A的疗法的努力(主要用于防止炎症)已 集中在对非典型MHC I类分子、用于人类受体的HLA-E和用于小 鼠受体的Qa-lb的研究上。对于细胞表面表达，这些MHC分子优 选与来源于其他MHC I类分子的信号肽的肽结合。其他I类MHC 分子的表达可以调控HLA-E的表达，因此，允许NK细月包在潜在 的革巴细胞中监控MHC I类依赖性抗原呈递途径的状态。细胞表面HLA-E的水平对于针对肺瘤和病毒感染细力包的NK细力包毒性是至关 重要的。用于调节HLA-E表达或功能的治疗方案通常集中在利用 HLA-I或HSP60肽来诱导用于防止发炎的保护状态，致4吏NK细胞 不被活化。美国专利乂^开第20030095965号4皮露了一种抗体3S9,其与 NKG2A、 NKG2C和NKG2E结合。据称3S9引起这些受体的交联 并且伴随着NK细胞介导的溶解的抑制。共同拥有的PCT专利7〉 开WO2005/105849披露了 一种抗体的应用，其中该抗体与NK受体 (包括NKG2A )特异结合，以治疗患有粒状淋巴细胞(NK-LDGL ) 的NK型淋巴细胞增殖性疾病的患者。这样的抗体抑制NK细胞活 性。已证明单克隆抗体对于各种疾病的诊断和治疗是非常有用的。 治疗用单克隆抗体可以通过不同的机制起作用。 一些抗体如利妥昔 (Rituxan )识别在病态细力包(例如，肿瘤细力包)表面上存在的抗原 (在利妥昔的情形下的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种单克隆抗体或其一个片段，其特征在于：　　　　ａ．与ＮＫＧ２Ａ特异性结合；　　　　ｂ．不与一个Ｆｃ受体特异性结合；以及　　　　ｃ．当结合到一个人类ＮＫ细胞上的ＮＫＧ２Ａ时，使所述ＮＫ细胞在一个靶人类细胞与所述ＮＫ细胞接触时溶解在其细胞表面上带有ＨＬＡ－Ｅ或Ｑａｌ↑［ｂ］的所述靶细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿莱斯山德罗莫雷塔，埃马努埃拉马尔切纳罗，弗朗索瓦罗马涅，帕斯卡莱安德烈，
申请(专利权)人：依奈特制药公司，热那亚大学，
类型：发明
国别省市：FR[法国]