一株能将奎宁酮转化为(R)-3-奎宁醇的诺卡氏菌及转化方法技术

本发明专利技术公开了一株诺卡氏菌WY1202及用该菌发酵奎宁酮生产(R)-3-奎宁醇的方法。本发明专利技术菌种以奎宁酮盐酸盐为唯一碳源，是从天津市西青区农家果园土壤中筛选而得。菌株Nocardia?sp.WY1202现保藏在中国普通生物菌种保藏管理中心，保藏号为CGMCCNo.5095。生产方法为：采用诺卡氏菌WY1202为菌种，经过一级种子培养和二级发酵扩大培养，取发酵培养液，离心收集菌体并洗涤菌体，将菌体重悬于缓冲液中，再加入底物奎宁酮盐酸盐，添加葡萄糖，反应24-48h后，离心分离，上清液调pH值至碱性，减压旋干，得到的残留物用有机溶剂固液萃取，滤液旋干得到(R)-(-)-3-奎宁醇，且产物的产率为95％、纯度为96％、e.e.值＞95％，反应过程中操作简单，能耗低，符合绿色化学要求，可应用于较大规模的(R)-(-)-3-奎宁醇生物转化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程领域，本专利技术涉及一种发酵合成手性奎宁醇的菌株及其生产方法。
技术介绍
权利要求1.诺卡氏菌Nocardiasp. WY1202,保藏单位为中国普通微生物菌种保藏中心,保藏编号为 CGMCC No. 5095。2.由权利要求I所述菌株能转化奎宁酮为(R)_3-奎宁醇。3.权利要求I所述菌株的发酵培养方法，其包括步骤 1)种子培养 将诺卡氏菌Nocardia sp. WY1202接入灭菌后的种子液体培养基中，于30 37°C，200 250r/min培养24 48h，得到种子液， 液体培养基的配制如下葡萄糖10 20g/L,蛋白胨5g/L,酵母提取物5g/L,氯化钠lg/L, pH 为 7. O ; 2)发酵培养 将步骤(I)得到的种子液体按接种量I 10%接种到发酵培养基中进行发酵培养，培养条件30 37°C，摇床转速200 250r/min，发酵时间48 60h，即得到诺卡氏菌的发酵液， 所述发酵培养基的成分为葡萄糖15 20g/L,酵母提取物3g/L,蛋白胨7g/L,磷酸二氢钾lg/L，磷酸氢二钾lg/L，硫酸镁O. 5g/L，氯化钠lg/L，pH为7. O。4.一种制备权利要求2所述的(R)-3-奎宁醇的方法，其包括如下步骤 1)收集菌体发酵培养权利要求I所述的菌株，得到发酵液，离心收集菌体，得到湿菌体； 2)转化反应用磷酸氢二钾-磷酸二氢钾缓冲液洗涤湿菌体后重新悬浮于同一缓冲液中，再加入底物奎宁酮盐酸盐，添加葡萄糖，在20-50°C摇床上反应，反应24-48h后，停止反应； 3)分离纯化(R)-3-奎宁醇产品 反应液离心分离，上清液用无机碱调节pH值到9-14，然后减压旋蒸，得到的残留物用二氯甲烷等有机溶剂固液萃取，滤液旋干得部分(R)_3-奎宁醇产品。滤饼溶于二氯甲烷等有机溶剂中搅拌半小时后过滤，滤液旋干得到粗产品，再用丙酮等有机溶剂重结晶得另一部分(R)-3-奎宁醇产品。5.本领域技术人员可以根据本专利技术作出各种改变或变形，只要不脱离本专利技术的技术思想，均属于本专利技术权利要求所定义的范围。全文摘要本专利技术公开了一株诺卡氏菌WY1202及用该菌发酵奎宁酮生产(R)-3-奎宁醇的方法。本专利技术菌种以奎宁酮盐酸盐为唯一碳源，是从天津市西青区农家果园土壤中筛选而得。菌株Nocardia sp.WY1202现保藏在中国普通生物菌种保藏管理中心，保藏号为CGMCCNo.5095。生产方法为采用诺卡氏菌WY1202为菌种，经过一级种子培养和二级发酵扩大培养，取发酵培养液，离心收集菌体并洗涤菌体，将菌体重悬于缓冲液中，再加入底物奎宁酮盐酸盐，添加葡萄糖，反应24-48h后，离心分离，上清液调pH值至碱性，减压旋干，得到的残留物用有机溶剂固液萃取，滤液旋干得到(R)-(-)-3-奎宁醇，且产物的产率为95％、纯度为96％、e.e.值＞95％，反应过程中操作简单，能耗低，符合绿色化学要求，可应用于较大规模的(R)-(-)-3-奎宁醇生物转化生产。文档编号C12N1/20GK102952761SQ20111024464公开日2013年3月6日 申请日期2011年8月25日 优先权日2011年8月25日专利技术者李键煚, 王玉, 吴洽庆, 朱敦明 申请人:天津工业生物技术研究所本文档来自技高网...

【技术保护点】
诺卡氏菌Nocardia?sp.WY1202，保藏单位为中国普通微生物菌种保藏中心，保藏编号为CGMCC?No.5095。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李键煚，王玉，吴洽庆，朱敦明，
申请(专利权)人：天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：