一株能将奎宁酮转化为(S)-3-奎宁醇的红串红球菌及转化方法技术

本发明专利技术公开了一株红串红球菌WY1406及用该菌发酵奎宁酮生产(S)-3-奎宁醇的方法。本发明专利技术菌种以奎宁酮盐酸盐为唯一碳源，是从天津市西青区农家果园土壤中筛选而得。菌株Rhodococcus?erythropolis?WY1406现保藏在中国普通生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC?No.5096。生产方法为：采用红串红球菌WY1406为菌种，经过一级种子培养和二级发酵扩大培养，取发酵培养液，离心收集菌体并洗涤菌体，将菌体重悬于缓冲液中，再加入底物奎宁酮盐酸盐，添加葡萄糖，反应10-48h后，离心分离，上清液调pH值至碱性，减压旋干，得到的残留物用有机溶剂固液萃取，滤液旋干得到(S)-(+)-3-奎宁醇，且产物的产率为95％、纯度为95％、e.e.值＞99％，反应过程中操作简单，能耗低，符合绿色化学要求，可应用于较大规模的(S)-(+)-3-奎宁醇生物转化制备。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程领域，涉及一种发酵合成(S)-(+)-3-奎宁醇的菌株及其生产方法。
技术介绍
权利要求1.红串红球菌Rhodococcuserythropolis WY1406,保藏单位为中国普通微生物菌种保藏中心，保藏编号为CGMCC No. 5096。2.由权利要求I所述菌株能转化奎宁酮为(S)-3-奎宁醇。3.权利要求I所述菌株的发酵培养方法，其包括步骤 1)种子培养 将红串红球菌Rhodococcus erythropolis WY1406接入灭菌后的种子液体培养基中，于30°C，200 250r/min培养20 36h,得到种子液， 液体培养基的配制如下葡萄糖10 20g/L,蛋白胨5g/L,酵母提取物5g/L,氯化钠lg/L, pH 为 7. O ; 2)发酵培养 将步骤(I)得到的种子液体按接种量I 5%接种到发酵培养基中进行发酵培养。培养条件30°C，摇床转速200 250r/min，发酵时间24 36h，即得到红串红球菌的发酵液， 所述发酵培养基的成分为蔗糖15 20g/L，酵母提取物7g/L，蛋白胨3g/L，磷酸二氢钾lg/L，磷酸氢二钾lg/L，硫酸镁O. 5g/L，氯化钠lg/L，pH为7. O。4.一种制备权利要求2所述的(S)-3-奎宁醇的方法，其包括如下步骤 1)收集菌体发酵培养权利要求I所述的菌株，得到发酵液，离心收集菌体，得到湿菌体； 2)转化反应用磷酸氢二钾-磷酸二氢钾缓冲液洗涤湿菌体后重新悬浮于同一缓冲液中，再加入底物奎宁酮盐酸盐，添加葡萄糖，在20-60°C摇床上反应，反应10-48h后，停止反应； 3)分离纯化(S)-(+)-3-奎宁醇产品 反应液离心分离，上清液用无机碱调节pH值到9-14，然后减压旋蒸，得到的残留物用二氯甲烷等有机溶剂固液萃取，滤液旋干得部分(S)-3-奎宁醇产品，滤饼溶于二氯甲烷等有机溶剂中搅拌半小时后过滤，滤液旋干得到粗产品，再用丙酮等有机溶剂重结晶得另一部分(S)-3-奎宁醇产品。5.本领域技术人员可以根据本专利技术作出各种改变或变形，只要不脱离本专利技术的技术思想，均属于本专利技术权利要求所定义的范围。全文摘要本专利技术公开了一株红串红球菌WY1406及用该菌发酵奎宁酮生产(S)-3-奎宁醇的方法。本专利技术菌种以奎宁酮盐酸盐为唯一碳源，是从天津市西青区农家果园土壤中筛选而得。菌株Rhodococcus erythropolis WY1406现保藏在中国普通生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.5096。生产方法为采用红串红球菌WY1406为菌种，经过一级种子培养和二级发酵扩大培养，取发酵培养液，离心收集菌体并洗涤菌体，将菌体重悬于缓冲液中，再加入底物奎宁酮盐酸盐，添加葡萄糖，反应10-48h后，离心分离，上清液调pH值至碱性，减压旋干，得到的残留物用有机溶剂固液萃取，滤液旋干得到(S)-(+)-3-奎宁醇，且产物的产率为95％、纯度为95％、e.e.值＞99％，反应过程中操作简单，能耗低，符合绿色化学要求，可应用于较大规模的(S)-(+)-3-奎宁醇生物转化制备。文档编号C12N1/20GK102952760SQ20111024464公开日2013年3月6日 申请日期2011年8月25日 优先权日2011年8月25日专利技术者王玉, 李建煚, 吴洽庆, 朱敦明 申请人:天津工业生物技术研究所本文档来自技高网...

【技术保护点】
红串红球菌Rhodococcus?erythropolis?WY1406，保藏单位为中国普通微生物菌种保藏中心，保藏编号为CGMCC?No.5096。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王玉，李建煚，吴洽庆，朱敦明，
申请(专利权)人：天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：