本发明专利技术涉及一种评价灵芝提取物质量的新方法，该方法包括如下步骤：(1)体外抗氧化活性AOA的检测；(2)建立样品溶液的浓度与AOA的清除率的回归方程或关系曲线；(3)AOA的半数有效浓度EC50的计算；(4)EC50与参考标准值KRV的比较；(5)灵芝提取物的质量评价。本发明专利技术通过建立系统的灵芝提取物的质量评价方法，直观地评价了不同灵芝提取物或灵芝产品在天然产物活性物质的活性差异和变化情况，克服了现有技术中只能针对灵芝中某一些成分对灵芝质量作出评价的局限性，将体外抗氧化活性作为评价灵芝提取物质量的一项通用的理化指标，并建立相对简单而直观的检测方法，能有效的、全面的评价灵芝提取物的质量。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种评价药用真菌子实体提取物(固态)质量的方法，特别是灵芝提取物的质量评价指标及其检测方法，适用于对不同提取方法或制备工艺获得的灵芝提取物(干膏或干粉状)进行质量方面的(检测)评价。
技术介绍
近十多年来，国内基于灵芝提取物及其制剂的药理学和保健功能学的研究，研发出许多利用灵芝子实体提取物作为中间原料(intermediate，或称中间体)的中药或保健食品类产品；同时，灵芝提取物这类产品还作为药用植物提取物出口至一些国家。按国家有关规定，中药或保健食品类产品均需要建立相应的质量标准和检测方法。而对产品质量的检 测与控制的关键之一，就是对原材料或中间原料的质量“安全、有效、稳定、可控”四大方面进行评价和追溯。2004年4月起实施的《药用植物及制剂外经贸绿色行业标准》(WM/T2-2004)规定了药用植物及制剂的外经贸绿色行业标准品质，将重金属元素和农药残留等的限量要求及其检测方法，作为药用植物提取物的质量“安全”评价方法。2010版《中华人民共和国药典(一部)》中收载了连翘、黄芩、银杏叶和颠茄等48种植物油脂和提取物，建立鉴别、检查和含量测定等项，进行质量“有效、稳定、可控”方面的评价，并规定相应指标成分的含量下限要求及其测定方法；但不包括灵芝提取物。指纹图谱(Fingerprint)作为中药或药用植物提取这样复杂样品体系的质量评价与控制的有效技术手段，已经得到近二十年的应用和发展。指纹图谱是建立在中药化学成分系统研究的基础上，借助于单用和联用的色谱或波谱分析技术，获得能够标示其化学特征的色谱图或波谱图。构建一种中药指纹图谱，涉及图谱信息的提取方法研究、图谱间相似度计算与比较、以及最终应用时评价标准的制定等。在实际应用中，必须事先建立一个能表征中药产品化学组成特征的主观的特征指纹图谱作为标准指纹图谱，然后通过计算和比较待测样品指纹图谱与标准指纹图谱之间的相似度，对待测样品质量(有效、稳定、可控)进行评价(如判别真伪、品质好坏或质量稳定等情况)。而实际上，不同中药或药用植物提取物中的指标成分或有效成分的种类和结构各不相同，其指纹图谱千差万别，可以说每一种中药各有各自的指纹图谱法。因此，指纹图谱评价方法基于繁杂而系统的研究过程，具有较强的专业性、较高的技术难度，同时存在一定的偏向性或针对性(特定对象，缺乏通用性)，在实际应用中存在局限性问题。专利技术专利CN101676717A (申请号200810151484)公开了一种评价中药制品质量的新方法，提出采用等同度(Equivalence degree)这一可量化的指标参数及其计算公式。实际上，该方法是对现有中药指纹图谱各种相似度计算方法的一种改进；在计算获得目标中药制品指纹图谱的等同度E值之后，与设定的标准阈值进行相似性或者趋同性的比较并做出质量评价；还是属于指纹图谱法技术范畴。陈体强等报道灵芝浸膏粉中微量元素与氨基酸两类化学成分的检测分析(中国中药杂志.1994，19(2) :97-98)。朱培根等报道生产原料对灵芝浸膏粉质量的影响，检测比较了不同灵芝提取物多糖和三萜酸成分含量(福建农业学报.1997，12(3) :39-43)。专利技术专利CN1785023A(申请号200510019176. 2)分开了一种多糖肽标准品及其制备方法与应用，可用于测定灵芝或灵芝孢子的产品多糖肽含量，从而控制灵芝产品的质量。杨敏和果德安(通讯作者)等在美国质谱学会杂志上发表SCI论文，提出采用液相色谱质谱联用方法分析灵芝中的三職酸类成分(Journal of the American Society for Mass Spectrometry, 2007，18(5) :927-939). 丁平等也报道建立灵芝药材三萜类化学成分高效薄层色谱(HPTLC)和高效液相(HPLC)的指纹图谱，并以此评价灵芝药材的质量(中国药学杂志，2009，34(17)55-58)以上方法探讨利用灵芝提取物中的某类化学成分进行质量检测与评价，不能直观地评价不同灵芝提取物或灵芝产品在天然产物活性物质活性差异和变化情况。弓晓峰等报道采用DPPH自由基清除法、邻苯三酚自氧化法检测(评价)了赤灵芝和黑灵芝(Ganoderma atrum)不同溶剂提取物(液)的抗氧化作用(食品科学· 2006，27(4) :44-47)。专利技术专利 CN 1939351A (申请号 200510030272. 7)公开了一种检测灵芝产品质量的方法，以牛血清蛋白为对照品通过对“双灵堂固” 口服制剂中灵芝多糖肽成分的含量测定，来严格控制“双灵堂固本” 口服制剂生产过程和监控产品贮藏期质量。发·明专利CN 11895296A (申请号200510027796. 0)公开了一种检测灵芝产口服制剂质量的方法，以灵芝多糖和灵芝总三萜含量测定，来严格控制“双灵堂固本” 口服制剂生产过程和监控产品贮藏期质量。上述方法适用于液态的灵芝产品或制剂质量评价与控制，但不适用于固态的灵芝提取物(中药制药或保健食品生产的中间体)。针对灵芝提取物，由于在提取方法、提取物的最终干燥方法上存在的差异，灵芝子实体中多糖等天然活性物质在提取及干燥过程受到热力学作用的影响而产生的活性损失或降低。同时，在生产后期保存过程(贮藏期)中，多糖等天然活性物质的活性会发生变化情况。而常规的理化指标检测如选择代表天然活性物质的某种或某类化学成分进行含量测定，是不能直观地对天然活性物质本身活性上的变化做出量化评价。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供操作简单，适用性广的。研究证实灵芝的中的天然活性物质如灵芝多糖、灵芝三萜酸等都具有体外抗氧化活性(Antioxidant activity in vitro,简称A0A),本专利技术方法克服了现有技术中只能针对灵芝中某一些成分对灵芝质量作出评价的局限性，将体外抗氧化活性作为评价灵芝提取物质量的一项通用的理化指标，并建立相对简单而直观的检测方法，能有效的、全面的评价灵芝提取物的质量。为了实现上述目的，本专利技术的技术方案为该评价灵芝提取物质量的新方法包括如下步骤(I)体外抗氧化活性AOA的检测A、样品溶液的配制称取灵芝提取物样品，溶解于80%甲醇溶液或重蒸水中配成灵芝提取物样品浓度为100-5000 μ g/mL的样品溶液；B、样品溶液AOA的值的测定所述的AOA的值包括DPPH ·阳离子自由基清除能力-AOApABTS’+阳离子自由基清除能力-AOA2、超氧阴离子自由基清除能力或羟基阴离子自由基清除能力-A0A3、总抗氧化能力-AOA4和铁离子还原能力或亚铁离子螯合能力-AOA5 ；(2)建立样品溶液的浓度与AOA的清除率的回归方程或关系曲线根据步骤(I)中B得到的AOA的值，分别建立样品溶液的浓度与清除率、总抗氧化能力和还原能力五项AOA相应的回归方程或关系曲线；(3) AOA的半数有效浓度EC5tl的计算根据回归方程或关系曲线分别计算五项AOA的EC50的值；⑷EC5tl与参考标准值Kkv的比较分别将EC5tl值与相应的参考标准值Kkv比较，做出灵芝提取物的质量定性的初步评价；所述的参考标准值Kkv包括好-趋向性指标为I、合格-趋向性指标为O和不合格_趋向性指标-I， 所述的好-趋向性指标为I的Kev值分别为4(^〈330本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种评价灵芝提取物质量的新方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：(1)体外抗氧化活性AOA的检测：A、样品溶液的配制：称取灵芝提取物样品，溶解于80%甲醇溶液或重蒸水中配成灵芝提取物样品浓度为100？5000μg/mL的样品溶液；B、样品溶液AOA的值的测定：所述的AOA的值包括：DPPH·阳离子自由基清除能力？AOA1、ABTS·+阳离子自由基清除能力？AOA2、超氧阴离子自由基清除能力或羟基阴离子自由基清除能力？AOA3、总抗氧化能力？AOA4和铁离子还原能力或亚铁离子螯合能力？AOA5；(2)建立样品溶液的浓度与AOA的清除率的回归方程或关系曲线：根据步骤(1)中B得到的AOA的值，分别建立样品溶液的浓度与清除率、总抗氧化能力和还原能力五项AOA相应的回归方程或关系曲线；(3)AOA的半数有效浓度EC50的计算：根据回归方程或关系曲线分别计算五项AOA的EC50的值；(4)EC50与参考标准值KRV的比较：分别将EC50值与相应的参考标准值KRV比较，做出灵芝提取物的质量定性的初步评价；所述的参考标准值KRV包括好？趋向性指标为1、合格？趋向性指标为0和不合格？趋向性指标？1，所述的好？趋向性指标为1的KRV值分别为：AOA1390，AOA2>2600，AOA3>1185，AOA4>1900，AOA5>615；单位：μg/mL；(5)灵芝提取物的质量评价：根据公式对灵芝提取物质量作出评价，所述的公式为：分项评价公式：Mi=(KRVi？Kx)／KRVi，其中，Kx是某项抗氧化活性AOAx，x=1～5的EC50值，KRV1为300μg/mL，KRV2为2000μg/mL，KRV3为870μg/mL，KRV4为1400μg/mL，KRV5为450μg/mL；质量评价公式：M=∑Mi，其中Mi中到的i的值为1～5，根据质量评价公式计算出M值，按M值大小，可将质量评价结果分为：好:M＞0.2、合格:0.2≥M≥？0.2、基本合格:？0.2＞M＞？1.5、不合格:M≤？1.5，根据Mi的正负可以进行定性判定。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈体强，吴锦忠，黄启东，吴岩斌，吴建国，
申请(专利权)人：福建省农业科学院食用菌研究所，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。