一种从茯苓皮中高效提取三萜类活性成分的方法技术

本发明专利技术公开了一种从茯苓皮中高效提取三萜类活性成分的方法。本发明专利技术以茯苓皮为原料，粉碎后按照一定比例加入醇液浸泡，回流提取并对提取液进行减压浓缩，获取茯苓皮提取物；茯苓皮提取物经过加热超声溶解，通过大孔树脂进行纯化，最后制备得到茯苓皮总三萜。本发明专利技术所得到的茯苓皮总三萜提取物的收率可达5.6%，远远高于以茯苓块为原料提取出来的茯苓总三萜收率2.32%。本发明专利技术提取效果好，没有或很少化学溶剂残留，茯苓皮总三萜的含量大于60%。本发明专利技术方法提取成本相对低廉，可大规模生产，变废为宝，具有良好的经济效益和社会效益。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药及保健食品
，具体涉及一种从茯苓皮中高效提取三萜类 活性成分的方法。
技术介绍
茯苓为多孔菌科真菌茯苓（Poria cocos (Schw. ) Wolf)的干燥菌核，是常用的药 食两用中药。茯苓性平，味甘、淡，归心、肺、脾、肾经，具有利水渗湿、健脾和胃、宁心安神之 功效，其主要活性成分为多糖、三萜类化合物，具有抗肿瘤、抗炎、免疫调节、保肝等多种药 理活性。 我国茯苓资源丰富，目前对茯苓有效成分包括三萜类提取工艺已有一定研究。茯 苓菌核经过发汗处理后削下的外皮为"茯苓皮"，内部白色部分切成茯苓块或茯苓片。目前 临床药用茯苓以茯苓块或茯苓片为主。中医认为，茯苓块或茯苓片归心、肺、脾、肾经，具有 利水渗湿，健脾，宁心的功效；而茯苓皮归肺、脾、肾经，仅具有利水消肿的功效。由于茯苓皮 外表面棕褐色至黑褐色，有疣状突起，内面淡棕色并常带有白色或淡红色的皮下部分；质地 较松软，略具弹性；气微、味淡，嚼之粘牙；相对于茯苓块或茯苓片，茯苓皮卖相差，且较难 提取出其中的活性成分，因此，在实际生产加工过程中茯苓皮多被废弃。 已有的茯苓皮有效物质提取中都采用溶剂萃取法，此法提取总三萜类化合物含量 较低，目前未能应用于大批量生产，同时这些方法所选用的化学溶剂相对较多，其应用受到 一定的限制。因此，开发出一种高效环保的从茯苓皮提取三萜类活性成份的方法具有非常 实际的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供。 本专利技术所采取的技术方案是： 一种茯苓皮总三萜的提取方法，包括下列步骤： 1) 以茯苓皮为原料，粉碎后按照一定比例加入无水或含水醇液浸泡2~10小时，浸泡 后回流提取1~3次，每次提取2~3小时，过滤收集提取液； 2) 对提取液进行减压浓缩，获取茯苓皮提取物； 3) 用醇液对茯苓皮提取物进行加热超声溶解，并将所得溶解液滴加到装有大孔树脂的 柱床中进行静止吸附至少2小时，用水和不同浓度的醇液对静止吸附样品后的大孔树脂柱 进行梯度洗脱分离； 4) 收集洗脱液，浓缩获得茯苓皮总三萜。 进一步的，步骤1)中所用醇液为70%v/v~100%v/v的甲醇或70%v/v~95%v/v 的乙醇。 进一步的，步骤1)中提取时，茯苓皮和醇液的重量比为1: (3~10)。 进一步的，步骤2)中减压浓缩时，醇提取液浓缩温度为60~80°C。 进一步的，步骤3)用浓度70%~100%v/v甲醇或70%~95%v/v乙醇溶液对茯苓 皮提取物进行加热超声溶解。 进一步的，步骤3)中大孔树脂可以是极性、中等极性、弱极性或非极性大孔树脂。 进一步的，步骤3)用水和浓度分别为50%v/v、70%v/v、100%v/v的甲醇或50%v/v、 70% v/v、95%v/v的乙醇溶液对静止吸附样品后的大孔树脂柱进行梯度洗脱分离，且每一浓 度洗脱4个保留体积。 进一步的，步骤4)收集100%v/v的甲醇或95%v/v的乙醇洗脱液。 一种茯苓皮总三萜的提取方法，包括下列步骤： 1) 以茯苓皮为原料，粉碎后按照茯苓皮和醇液的重量比为1:(5~6)的比例加入100% 甲醇或95%v/v的乙醇浸泡2~5小时，浸泡后回流提取1~3次，每次提取2~3小时，过 滤收集提取液； 2) 对提取液进行减压浓缩，获取茯苓皮提取物； 3) 在60~80°C的温度范围内，用100%v/v的甲醇或95%v/v的乙醇对茯苓皮提取物进 行加热超声溶解，并将所得溶解液以5 mL/min的速度滴加到装有D-101或AB-8大孔树脂的 柱床中进行静止吸附至少2小时，用水和50%v/v、70%v/v、100%v/v的甲醇或50%v/v、70%v/ v、95%v/v的乙醇溶液对静止吸附样品后的大孔树脂柱进行梯度洗脱分离，且每一浓度洗脱 4个保留体积； 4) 收集100%v/v的甲醇或95%v/v的乙醇洗脱液，浓缩获得茯苓皮总三萜。 本专利技术的有益效果是： 本专利技术以茯苓皮为原料，采用无水或含水醇为提取溶剂，提取的浸膏经大孔树脂纯化， 得到的茯苓皮总三萜提取物的收率可达5. 6%，远远高于以茯苓块为原料提取出来的 茯苓总三萜收率2. 32%。 从成本方面考虑，目前临床用药以茯苓块或茯苓片为主，无人收购茯苓皮，即使有 少量收购，其价格也远远低于白茯苓，其成本基本可以忽略不计；而茯苓皮来源广泛，价格 低廉，不仅可以降低成本，还能变废为宝，具有良好的经济效益及社会效益。以茯苓块或茯 苓片为原料则成本较高，以获得IKg所述茯苓总三萜提取物为例，所需茯苓块原料成本为 1077. 5元。由此可见，本专利技术方法技术从茯苓皮中高效提取三萜类活性成分，提取成本相对 低廉，可大规模生产，变废为宝。 本专利技术提取效果好，没有或很少化学溶剂残留，提取物经过香草醛-冰醋酸-高氯 酸显色法测得茯苓皮总三萜的含量大于60%。本专利技术方法提取成本相对低廉，可大规模生 产，变废为宝。 利用从本专利技术的产品中分离纯化得到的三萜类单体化合物为标准品，经高效液相 色谱分析，对本专利技术方法制备的茯苓皮总三萜中14种三萜类成分进行了指认和归属，其中 茯苓新酸A、3_氢化去氢松苓酸和去氢伊布里酸三个三萜类成分为主要成分，产品总三萜 含量高，主要活性成分明确。 经清除DPPH烷自由基，清除超氧阴离子自由基能力测试表明：本专利技术的产品具有 很强的清除DPPH自由基、超氧阴离子的能力，具有抗氧化作用；经酒精诱导小鼠急性肝损 伤实验表明：本专利技术的产品具有很强的保肝活性，具有预防酒精性肝损伤作用；不仅如此， 还具有较强的抗炎、抗过敏、降糖、降脂作用。可广泛应用于医药、保健食品及化妆品等领 域。【附图说明】 图1为本专利技术茯苓皮总三萜中分离得到的三萜类化合物的结构； 图2为本专利技术茯苓皮总三萜的HPLC图谱； 其中1是去氢土莫酸、2是去氢伊布里酸乙酸酯、3是去氢伊布里酮酸、4是3-氢化去氢 松苓酮酸、5是3 β -乙酰氧基-羊毛留-7, 9 (11)，24-三烯-21-酸、6是去氢茯苓酸、7是茯 苓酸、8是3-氢化去氢松苓酸、9是去氢伊布里酸、10是茯苓新酸D、11是茯苓新酸Α、12是 茯苓新酸AM、13是3-去氢松苓酸、14是伊布里酸； 图3为3-氢化去氢松苓酸的HPLC图谱； 图4为去氢伊布里酸的HPLC图谱； 图5为茯苓新酸A的HPLC图谱。【具体实施方式】 以下结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明，但并不局限于此。 其中茯苓皮总三萜或茯苓三萜含量测定均采用香草醛-冰醋酸-高氯酸显色法。 1)溶液配制 5%香草酸-冰醋酸溶液：称取香草醛0. 5 g，用适量冰醋酸溶解并转入容量瓶中，冰醋 酸定容至10 mL，摇匀，当日使用； 乌苏酸对照品溶液：精密称取乌苏酸11. I mg，甲醇定容于100 mL容量瓶中，即得 0· 111 mg/mL的乌苏酸对照品溶液； 样品溶液：准确称取实施例中所得总三萜提取物10.0 mg，用甲醇定容于25 mL容量瓶 中，即得0· 40 mg/mL的样品溶液。 2)测定含量 使用分光光度法测定样品中总三萜含量：精密吸取乌苏酸对照品溶液〇，〇. 2，0. 4， 0. 6,0. 8,1. 0 mL，60°C恒温水浴加热，除去溶剂。分别加入新鲜配制的5%香草醛-冰醋酸 溶液0. 3 mL和I mL高氯酸，摇匀，在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种茯苓皮总三萜的提取方法，其特征在于：包括下列步骤：1）以茯苓皮为原料，粉碎后按照一定比例加入无水或含水醇液浸泡2～10小时，浸泡后回流提取1～3次，每次提取2～3小时，过滤收集提取液； 2）对提取液进行减压浓缩，获取茯苓皮提取物；3）用醇液对茯苓皮提取物进行加热超声溶解，并将所得溶解液滴加到装有大孔树脂的柱床中进行静止吸附至少2小时，用水和不同浓度的醇液对静止吸附样品后的大孔树脂柱进行梯度洗脱分离；4）收集洗脱液，浓缩获得茯苓皮总三萜。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：何祥久，王宜海，王国琼，张金媚，
申请(专利权)人：广东药学院，
类型：发明
国别省市：广东;44