一种以芸薹属植物基因表达的变化来检测镉污染的方法技术

本发明专利技术公开了一种以芸薹属植物基因表达的变化来检测镉污染的方法，从镉处理和对照的芥菜（Brassicajuncea）根中提取总RNA后与29K拟南芥芯片杂交，发现了镉诱导的特异表达的上调和下调基因，在这些基因的保守区设计引物，采用半定量PCR法，以表达量的增加或减弱2.00倍为标准，筛选并确定了当镉浓度大于1.00mg/kg时芥菜特异表达的6个上调基因和6个下调基因，利用这12个基因的引物检测环境中芸薹属植物的根中基因表达的变化，如6个上调基因引物扩增的待测环境中芸薹属植物的产物亮度比对照都增加2.00倍以上，且6个下调基因引物扩增的待测环境中芸薹属植物的产物亮度比对照都减弱2.00倍以上，则可以判定检测环境中镉的浓度大于1.00mg/kg，从而得知待检测环境中的芸薹属植物是否遭到镉污染。这种检测方法灵敏度高且特异性强，可以快速检测芸薹属植物所处的环境中镉的含量是否适用于农业生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学方法检测环境污染的
，特别是涉及一种以芥菜镉特异诱导基因的表达变化来检测镉污染的方法。
技术介绍
传统的环境中镉检测通常采用原子吸收光谱仪检测，该法需要昂贵的仪器、良好的实验平台和较高的费用，不利于在基层环境检测单位和用户中推广，因此专利技术一种快速、简便、低廉的检测镉污染的检测方法很有必要。多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,即PCR),是目前最流行的体外扩增DNA片段的技术，具有快速、敏感和特异性强等特点，如能将该技术用于镉相关基因表达的检测，将具有重要的意义和广阔的应用前景。·芥菜和白菜等在分类上都属于芸薹属，基因测序表明芸薹属各物种之间基因序列的保守性比较高。有研究表明芸薹属植物对镉有某种耐受或富集机制，镉处理可以特异诱导相关基因表达的变化。模式植物拟南芥与芸薹属的植物亲缘关系近，我们用拟南芥29K表达芯片与不同浓度镉处理的芸薹属植物芥菜的核酸杂交，发现了镉特异诱导的上调和下调表达的拟南芥同源基因，因此，在芥菜中克隆这些基因片段，并根据这些基因的保守区域设计引物，可以通过半定量PCR来检测这些镉诱导下特异表达基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种以芸薹属植物基因表达的变化来检测镉污染的方法，其特征在于，步骤包括:步骤一：确定镉诱导下特异表达的上调基因和下调基因，方法如下:选取饱满、干净的芥菜种子，用75%乙醇浸泡1？min，然后在0.1%升汞中灭菌10？15？min，无菌水冲洗2？3次，在无菌水中浸泡5？6小时后，用滤纸吸干多余的水分，接种于1/2？MS固体培养基上，MS固体培养基的pH值为？6.0，其中含5g/L？蔗糖，0.7？%？琼脂，镉（Cd2+）浓度水平分别为0mg/kg、0.5mg/kg、1.0mg/kg和1.5mg/kg，日夜长比为14/10h,？日夜温为22/16℃,光照强度为200？μmol？m–2？s–1；在无菌...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：严明理，冯涛，向言词，刘丽莉，柴立元，李夕兵，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：