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一种抑制移植器官慢性排斥反应的抗体的制备及纯化方法技术

技术编号:8296776 阅读:249 留言:0更新日期:2013-02-06 21:11
本发明专利技术公开了一种抑制移植器官慢性排斥反应的抗体的制备及纯化方法,包括以下步骤:步骤一,用淋巴细胞分离液收集外周血单核细胞,20ng/mlrMICA诱导培养;步骤二,用细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒提取单个核细胞蛋白质;步骤三,串联高效液相层析(HPLC)纯化抗MICA抗体;步骤四,抗MICA抗体的鉴定:利用rMICA,用WesternBlot进行反向验证。利用本发明专利技术的方法所得到的抗MICA抗体,能够通过封闭内源性MICA蛋白、MICA siRNA抑制内源性MICA基因表达,从而达到阻断移植器官MICA表达的效果,即在器官移植术后有效降低供体器官中MICA基因及其蛋白的表达。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。
技术介绍
自上世纪50年代美国成功实施世界上首例肾移植以来,器官移植作为一项划时代的新技术在过去的50多年中得到了蓬勃发展,特别是随着八十年代末免疫抑制剂的出现,更是极大地提高了器官移植的成功率和受者的存活率,至今全球大约已经有60多万患者接受了包括肾、肝、心在内的器官移植手术。我国从上世纪60年代开展器官移植以来,至2006年全国年器官移植数已位居全球第二位,取得了长足的进步和发展。移植物发生免疫排斥反应是自器官移植出现后就一直困扰着国内外学者的最大瓶颈,虽然移植免疫机制的研究在不断深入,大量新免疫抑制药物在不断涌现,但是不可否认目前国内外依然面临着如移植后移植物发生免疫排斥机率仍然较高,免疫抑制剂费用昂贵及长期应用后发生肿瘤、感染的机会大大增加等诸多问题。 多年来的移植免疫研究表明,移植成功与否的关键取决于供、受者间组织相容性抗原是否一致或相近。一直以来,学界都将研究重点放在了经典的主要组织相容性复合体(major histocompability complex, MHC),即 MHC-I 和 MHC-II 上,并建立了经典的免疫排斥理论即同种异基因个体间移本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抑制移植器官慢性排斥反应的抗体的制备及纯化方法,其特征在于包括以下步骤:步骤一:用淋巴细胞分离液收集外周血单核细胞,体外培养扩增,20ng/ml?rMICA诱导培养,收集培养细胞;步骤二:用细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒提取单个核细胞蛋白质;步骤三:串联高效液相层析(HPLC)纯化抗MICA抗体:它利用不同分离模式的结合,使混合物中的肽得到更大程度的分离,并且降低低丰度肽的丢失;步骤四:抗MICA抗体的鉴定:利用rMICA,用Western?Blot进行反向验证。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:曹利平丁国平
申请(专利权)人:浙江大学
类型:发明
国别省市:

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