肝素酶Ⅱ的固定化方法技术

本发明专利技术涉及一种肝素酶Ⅱ的固定化方法，尤其涉及一种以壳聚糖微球为固定化材料，对肝素酶Ⅱ进行固定化的方法。肝素酶Ⅱ固定化以后具有可回收、可重复利用、酶与底物和产物易分离等优越性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种肝素酶II的固定化方法，尤其涉及一种以壳聚糖为固定化材料对肝素酶II进行固定化的方法，实现肝素酶II的固定化和可重复利用性。
技术介绍
肝素酶是指一类能够特异性裂解肝素和类肝素主链糖苷键的酶，最初是从肝素黄杆菌中发现并分离出来的，其后又发现在一些微生物和动物组织中也有肝素酶存在。目前有学术论文报道的肝素酶大约有10多种，得到较为细致研究的只有来自肝素黄杆菌的3种酶，分别是肝素酶I (EC编号4. 2. 2. 7)、肝素酶II (无EC编号)、肝素酶IIKEC编号4. 2. 2. 8)。肝素酶I、II、111分别是分子量大约43、78、66kd的单体蛋白质，其等电点均在9. O左右，应用和研究非常广泛。 肝素酶II是一种可以肝素和硫酸乙酰肝素为催化降解底物的酶，具有清除血液中残存肝素、防止凝血等功能，同时对生产低分子肝素、研究肝素的结构有重要的作用。然而游离的肝素酶II在发生反应时需要将其加入底物中，反应以后酶溶液、底物和产物混合在一起不容易分离，导致酶无法重复使用，利用效率低下，这为应用带来很多不便，因此，需要寻找一种既能提高肝素酶的利用效率的方法。与游离酶相比，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肝素酶Ⅱ的固定化方法，包括下述步骤：（1）肝素酶Ⅱ溶液的制备：选择Tris？HCl缓冲液（pH7.0，含CaCl2）作为肝素酶Ⅱ的溶剂，将肝素酶Ⅱ溶解在该缓冲液中，制得酶溶液；（2）肝素酶Ⅱ与壳聚糖微球的交联：将壳聚糖微球用Tris？HCl缓冲液（pH？7.0，？含10mM？CaCl2）充分溶胀，再取步骤（1）获得的肝素酶Ⅱ溶液？，将其加入该壳聚糖微球中，进行交联；（3）用乙酸？乙酸钠（pH？6.5？8.0，含NaCl）和Tris？HCl（pH？6.5？8.0，含CaCl2和NaCl）两种缓冲液分别洗涤上述交联后的壳聚糖微球，至洗脱液无酶活性；（4）利用还原剂处理步骤（3）中获得的固定了肝...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李锂，白佳珂，马小来，史绍鹏，
申请(专利权)人：深圳市海普瑞药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：