一种使用硫酸软骨素酶生产硫酸乙酰肝素的工艺制造技术

本发明专利技术提供一种使用硫酸软骨素酶生产硫酸乙酰肝素的工艺。首先将肝素钠粗品经过酶解、树脂吸附、氯化钠溶液洗脱得到洗脱物。将洗脱物用硫酸软骨素ABC酶或硫酸软骨素B酶进行酶解。利用这两种酶专一切断硫酸皮肤素结构中二糖单元之间1-4糖苷键的特异性，得到降解反应产物不饱和二糖。之后进行超滤、除重金属、氧化等精制步骤得到硫酸乙酰肝素精品。该法既克服了硫酸乙酰肝素与硫酸皮肤素表面所带负电荷密度相近难分离的特点，又避免了传统路线得到硫酸乙酰肝素所带进的重金属离子杂质，提高了产品收率，有显著的经济效益。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种生产硫酸乙酰肝素的工艺，特别涉及一种使用硫酸软骨素酶生产硫酸乙酰肝素的工艺。
技术介绍
    硫酸乙酰肝素是一广泛存在于动物细胞表面的糖胺聚糖, 是药物舒洛地特的主要组成部分。它在细胞的信号传导、增生与分化、免疫调节、细胞黏附以及神经细胞的信息传递等方面具有重要的生物学功能 。硫酸乙酰肝素在组成糖基和糖苷键连接方式上类似肝素，但比肝素具有抗栓活性强 ,抗凝活性弱的优点 。由于其负电荷密度和分子量与硫酸皮肤素相近，故分离纯化硫酸乙酰肝素成为制约药物开发的难点。曾有文献表明，利用硫酸皮肤素与硫酸乙酰肝素结构上的不同，用班氏试剂可以与硫酸皮肤素生产沉淀从而将两者分离开来。但此方法收率低、周期长、成本高且引入较难除去的杂质铜离子而不被选择。
技术实现思路
本专利技术的目的就是针对现有技术存在的上述缺陷，提供一种使用硫酸软骨素酶生产硫酸乙酰肝素的工艺，利用这两种酶能够专一选择切断硫酸皮肤素氨基己糖和艾杜糖醛酸二糖之间的1-4糖苷键，将硫酸皮肤素降解成二糖小分子，从而与硫酸乙酰肝素分离开来，能够得到大批量的精品硫酸乙酰肝素。一种使本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种使用硫酸软骨素酶生产硫酸乙酰肝素的工艺，其特征是包括如下制作步骤，浓度按质量百分比：将肝素钠粗品溶于浓度为2％的氯化钠溶液中，采用酶解法酶解，对酶解液用阴离子交换树脂充分吸附；步骤A中的阴离子交换树脂用浓度为3.0%‑6.0%的氯化钠溶液进行洗脱，得到洗脱液经乙醇沉淀烘干得到洗脱物；步骤B中得到的洗脱物溶为10.0%浓度，调节pH值为8.0‑8.5，添加洗脱物重量2.0%‑3.5%的CaCl2，后添加洗脱物重量3.0%‑4.5%的Na2CO3充分搅拌反应，将沉淀过滤除去得到上清液；将步骤C中的上清料液调节pH值为6.0‑7.0，温度20‑40℃，加入硫酸软骨素ABC酶量为：酶/洗脱物=10...

【技术特征摘要】
1.一种使用硫酸软骨素酶生产硫酸乙酰肝素的工艺，其特征是包括如下制作步骤，浓度按质量百分比：
将肝素钠粗品溶于浓度为2％的氯化钠溶液中，采用酶解法酶解，对酶解液用阴离子交换树脂充分吸附；
步骤A中的阴离子交换树脂用浓度为3.0%-6.0%的氯化钠溶液进行洗脱，得到洗脱液经乙醇沉淀烘干得到洗脱物；
步骤B中得到的洗脱物溶为10.0%浓度，调节pH值为8.0-8.5，添加洗脱物重量2.0%-3.5%的CaCl2，后添加洗脱物重量3.0%-4.5%的Na2CO3充分搅拌反应，将沉淀过滤除去得到上清液；
将步骤C中的上清料液调节pH值为6.0-7.0，温度20-40℃，加入硫酸软骨素ABC酶量为：酶/洗脱物=1000-2000 IU/Kg，搅拌酶解8-12h；或调节上清料液pH值7.0-8.5，温度20-40℃，加入硫酸软骨素B酶量为：酶/洗脱物=1500-2500 ...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨晓宏，郭林，李荣，崔慧斐，李福川，陈少鹏，张中志，
申请(专利权)人：东营天东制药有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37