二次酶解制备几丁聚糖的方法技术

本发明专利技术公开了一种二次酶解制备几丁聚糖的方法，包括如下步骤：将蟹壳或虾壳干燥、粉碎；二次脱钙和脱蛋白；酶解脱乙酰、水洗干燥粉碎即得。本发明专利技术的酶解工艺与现有技术制相比，二次脱钙与脱蛋白，并且第二次脱钙与脱蛋白在在同一步骤中实现，大大提高生产效率；采用酶解脱乙酰，减少强碱用量，耗能低，无污染，更加环保。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及几丁聚糖制备方法，属于制造领域。
技术介绍
甲壳素是一种天然含氮多糖物质，广泛存在与无脊椎动物的外壳或角质层中，尤其是虾蟹类的外壳中。甲壳素很容易获得，可再生，是仅次于纤维素的天然均聚物，但是因分子内部有很强的氢键作用，溶解性低，应用范围受到限制。 甲壳素脱乙酰后生成壳聚糖。目前壳聚糖的制备多采用化学法和酶解法脱乙酰。化学法脱乙酰反应中，影响脱乙酰的因素很多，但是主要影响因素包括:碱液浓度、反应温度和时间。一般来说，提高反应温度和延长反应时间均可提高脱乙酰度，但是会导致甲壳素主链降解增加，从而影响产品的粘度和分子量。通入氮气可以在一定程度上减缓主链的降解。由于化学法使用的碱液浓度高，反应时间长，产品质量不稳定，环境污染严重。 酶解法不会降解主链，并且无污染，具有重要的研究开发价值。影响酶解的因素很多，主要包括PH值和温度。文献记载最适宜PH值4-8，最适宜温度30-70°C (《甲壳酶特性与应用研究》万云洋等《天然产物研究与开发》2003 vol 15 N0.6)。迄今为止发现的真菌甲壳质脱乙酰酶(CDA)都是糖蛋白，且有良好的热稳定性。但是不同来源CDA的存在位置、最适宜PH值(PH4.5-12)、碳水化合物含量、相对分子质量及离子影响等有较大的差异。 迄今报道的CDA基本都来源于真菌。真菌来源的CDA主要作用是自身细胞壁的合成，最适底物一般为甲壳寡糖，对甲壳质的活性较低，不适合用酶法脱乙酰生产壳聚糖。真菌来源的CDA来源广泛，获取容易，成本相对较低。因此如何能够将真菌来源的CDA用于制备壳聚糖成为本领域技术人员急需解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新的几丁聚糖制备方法，所述的方法能够较现有技术更节能环保。 本专利技术的另一目的是提供一种用真菌来源的CDA制备几丁聚糖的方法，所述的方法能够解决现有技术CDA不适于生产几丁聚糖的技术难题。 本专利技术的另一目的是提供一种安全的几丁聚糖制备方法，所述的方法制得的几丁聚糖无强酸或强碱残留，产品更安全。 本专利技术的另一目的是提供一种具有市场竞争力的几丁聚糖，所述的产品不因工艺的改进而增加生产成本。 为达到上述目的，本专利技术采用下列技术方案实现:干燥粉碎、柠檬酸酸脱钙；氢氧化钠脱蛋白；酶解脱蛋白；甲壳质脱乙酰酶脱乙酰、水洗干燥粉碎即得。 本专利技术采用制备方法对脱钙前的蟹壳或虾壳进行预处理，然后再进行脱钙和脱蛋白。 为增强脱钙和脱蛋白效果，本专利技术优选的将蟹壳或虾壳粉碎至25~40 μ m颗粒，颗粒过小则增加生产成本，颗粒过大效果较差。专利技术人经过多次试验及经验，最终确定25~40 μ m颗粒范围达到脱钙和成本的最佳性价比。 本专利技术粉碎后的原料加入4-8倍重量体积比的水制成料液，再加入10~15%柠檬酸酸，充分反应后，过滤，水洗至中性，留取残渣。残渣中加入8~15%氢氧化钠溶液，SO-1OO0C，l-3h，水洗至中性，过滤，留取残渣。 本专利技术的酶解采用菠萝蛋白酶较其他蛋白酶具有更好的酶解效果。当然，选用其他蛋白酶进行酶解也能够实现本专利技术的目的。本专利技术工艺中最佳酶解方案是将第一次脱蛋白后的残渣中加入4-8倍重量体积比的水，再加入菠萝蛋白酶，加柠檬酸调PH值至5.5~ 6.5,40~60°C搅拌I~2h ;分离液体，残渣再次重复提取。 酶解壳料所用的蛋白酶占壳料重量比为0.05~0.2%为佳。 酶解脱钙和脱蛋白后，过滤，弃滤液，留取残渣，残渣即为甲壳质。将甲壳质加入含有甲壳质脱乙酰酶的发酵液脱乙酰，甲壳质与发酵液的重量体积比(g/1) I~3:1~6，0.2MPa, 30 ~32°C，48 ~72h, 120°C，20min，干燥即得几丁聚糖。 所述的可以从公开市场上购得，也可以通过构巢曲霉菌发酵后制得。 所述的甲壳质脱乙酰酶制备方法如下:(1)制备发酵培养基:酵母粉Sg，壳聚糖15g，葡萄糖30g，磷酸二氢钾2g，无水硫酸镁Ig, 二氯化钴(0.01mol/l) 10ml，水 1000ml ； (2)发酵条件:发酵培养基灭菌，接入构巢曲霉菌，30~35°C，PH6.0~7.0，72~96h。 经过二次脱钙和脱蛋白后，去除了原料中的钙离子、蛋白质其它有机物质。 本专利技术所述的几丁聚糖脱乙酰度高达95%以上。 本专利技术的产物与任何一种或一种以上药剂学上辅料如淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、硬脂酸镁、微粉硅胶、木糖醇、乳糖醇、葡萄糖、甘氨酸、甘露醇、甘氨酸等混合制成的各种剂型，例如，可制成片齐?、缓释片、滴丸、颗粒齐?、胶囊齐?、微粒剂。优选剂型为胶囊剂或颗粒剂。 本专利技术的酶解工艺与现有技术制相比，二次脱钙与脱蛋白，并且第二次脱钙与脱蛋白在在同一步骤中实现，大大提高生产效率；采用酶解脱乙酰，减少强碱用量，耗能低，无污染，更加环保。 【具体实施方式】 实施例1制备甲壳质脱乙酰酶:(1)制备发酵培养基:酵母粉Sg，壳聚糖15g，葡萄糖30g，磷酸二氢钾2g，无水硫酸镁Ig, 二氯化钴(0.01mol/l) 10ml，水 1000ml ；(2)发酵:发酵培养基灭菌，接种构巢曲霉菌，35°C，PH6.0,发酵72h。 将蟹壳或虾壳干燥粉碎至25 μ m颗粒，加入4倍重量体积比的水制成料液，料液中加入10%柠檬酸酸，充分反应后，过滤，水洗至中性，留取残渣。残渣中加入8%氢氧化钠溶液，80°C，Ih，过滤水洗至中性。 将第一次脱蛋白后的残渣中加入4倍重量体积比的水，再加入占壳料重量比为0.05%菠萝蛋白酶，加柠檬酸调PH值至5.5，40°C搅拌Ih ;分离液体，残渣再次重复提取。 酶解脱钙和脱蛋白后，过滤，弃滤液，留取残渣，残渣即为甲壳质。将甲壳质加入含有甲壳质脱乙酰酶的发酵液脱乙酰，甲壳质与发酵液的重量体积比(g/1) 1:1,0.2MPa，30°C，48h，120°C，20min，干燥即得几丁聚糖。 实施例2 制备甲壳质脱乙酰酶:(1)制备发酵培养基:酵母粉Sg，壳聚糖15g，葡萄糖30g，磷酸二氢钾2g，无水硫酸镁Ig, 二氯化钴(0.01mol/l) 10ml，水 1000ml ；(2)发酵条件:发酵培养基灭菌，接种构巢曲霉菌，30°C，PH7.0，72h。 将蟹壳或虾壳干燥粉碎至40 μ m颗粒，加入8倍重量体积比的水制成料液，料液中加入15%柠檬酸酸，充分反应后，过滤，水洗至中性，留取残渣。残渣中加入15%氢氧化钠溶液，100°C，3h，过滤水洗至中性。 将第一次脱蛋白后的残渣中加入8倍重量体积比的水，再加入占壳料重量比为0.2%菠萝蛋白酶，加柠檬酸调PH值至6.5，60°C搅拌2h ;分离液体，残渣再次重复提取。 酶解脱钙和脱蛋白后，过滤，弃滤液，留取残渣，残渣即为甲壳质。将甲壳质加入含有甲壳质脱乙酰酶的发酵液脱乙酰，甲壳质与发酵液的重量体积比(g/1) 1: 6,0.2MPa,32°C , 72h, 120°C，20min，干燥即得几丁聚糖。 实施例3 制备甲壳质脱乙酰酶:(1)制备发酵培养基:酵母粉Sg，壳聚糖15g，葡萄糖30g，磷酸二氢钾2g，无水硫酸镁Ig, 二氯化钴(0.01mol/l) 10ml，水 10本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种二次酶解制备几丁聚糖的方法，包括如下步骤：（1）将蟹壳或虾壳干燥粉碎；（2）第一次脱钙和脱蛋白；（3）第二次脱钙和脱蛋白；（4）酶解脱乙酰、水洗干燥粉碎即得。

【技术特征摘要】
1.一种二次酶解制备几丁聚糖的方法，包括如下步骤: (1)将蟹壳或虾壳干燥粉碎； (2)第一次脱钙和脱蛋白； (3)第二次脱钙和脱蛋白； (4)酶解脱乙酰、水洗干燥粉碎即得。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，将蟹壳或虾壳粉碎至0.5~1.0 μ m颗粒大小。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述的第一次脱钙是将蟹壳或虾壳粉碎后的原料中加入4-8倍重量体积比的水制成料液，再加入10~15%柠檬酸酸，充分反应后，过滤，留取残渣。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的第一次脱蛋白是将第一次脱钙后的残渣加入4-8倍重量体积比的水，加入8~15%氢氧化钠溶液，80-100°C，l_3h，水洗至中性，过滤，留取残渣。5.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于，所述的第二次脱钙和脱蛋白是将第一次脱蛋白后的残渣中加入4-8倍重量体积比的水，再...

【专利技术属性】
技术研发人员：郁正刚，黄永亮，田志同，苗胜昆，李莹，杨国元，
申请(专利权)人：天津天狮生物发展有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12