一种抗衰老共固定化酶及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种抗衰老共固定化酶，包括过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶，所述过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶的活力比为8:1～15:1。抗衰老共固定化酶的制备方法，包括以下制备步骤：将过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶按活力比溶解于的磷酸盐缓冲液中制成过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶混合酶液，向混合酶液中加入壳聚糖微球制成混合液；混合液搅拌吸附；加入质量浓度百分数为戊二醛溶液进行交联反应；放置平衡至室温；最后，加入β‑D‑葡萄糖，电磁搅拌后静置，备用。本发明专利技术通过过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶协同作用可清除体表在紫外线等外界条件作用下由氧经过二价电子还原产生的过氧化氢，达到延缓衰老的目的。

Anti aging co immobilized enzyme and preparation method thereof

The invention discloses an anti aging co immobilized enzyme, which comprises catalase and glucose oxidase. The activity ratio of the catalase and the glucose oxidase is 8:1 to 15:1. Preparation method of anti-aging co immobilized enzyme, which comprises the following steps: the preparation of glucose oxidase and catalase activity in phosphate buffer than in dissolved in made of catalase and glucose oxidase enzyme mixture solution is added to the mixed enzyme solution of chitosan microspheres made of mixed liquid; stirring adsorption of mixed liquid; adding concentration the percentage of crosslinking reaction of glutaraldehyde solution; putting the balance to room temperature; finally, adding beta D glucose, electromagnetic stirring, spare. The present invention can be used to remove the hydrogen peroxide produced by the reduction of oxygen by two valence electrons under the action of ultraviolet and other external conditions.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种共固化酶及其制备方法，具体涉及一种抗衰老共固定化酶及其制备方法。
技术介绍
人体内自由基主要分为内源性和外源性自由基。内源性自由基主要来自于机体自身的代谢活动，其中以有氧代谢为主。当体内自由基的产生和清除失衡以后，体内过多的自由基会引发一系列的自由基反应，从而引发脂质过氧化等反应。人有氧生命活动中产生了人体内第一个自由基：超氧阴离子自由基(O2-·)。超氧化物歧化酶能清除超氧阴离子自由基(O2-·)产生过氧化氢，而过氧化氢能穿透细胞膜，这是超氧阴离子自由基(O2-·)所不及的。当过氧化氢进入细胞以后会通过芬顿反应生成氧化性更强的羟基自由基(·OH)。羟基自由基(·OH)是体内活性最强的自由基，能通过抽氢反应、分子重排、双键共轭化、与氧结合，抽氢反应形成脂质过氧化物和脂质自由基(L·)，并通过这种循环形成脂质过氧化的链增长反应，导致脂质分子的不断消耗和脂质过氧化物的大量产生。脂质过氧化作用于细胞膜、核酸、蛋白质和酶类，导致不可逆的损伤，并将这些物质变成氧化物或过氧化物而失去固有的作用，这些作用的不断积累，促使机体衰老。因此，超氧阴离子自由基(O2-·)对细胞的损伤是由歧化反应形成的过氧化氢所介导的。同时，随着年龄的增长，大量过氧化氢在头发中的积累会阻碍头发中黑色素的形成，导致头发由内向外逐渐变白。外源性自由基主要是来自炒菜的油烟、辐射、吸烟、酗酒、日光暴晒等，人的皮肤每天处于空气、污染、辐射、紫外线等环境中，会在空气中形成大量的自由基，正常情况下这些自由基产生后很快就会消失，但当其与空气中的颗粒集合后，会形成稳定的自由基，对人体皮肤甚至机体造成侵蚀。表现为皮肤暗黄，无光泽，松弛无弹性，甚至发生色素沉积，出现斑点。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是经常被电脑辐射或紫外线照射、以及酗酒或熬夜的人群，会出现皮肤粗糙、色素沉积的现象，目的在于提供一种抗衰老共固定酶及其制备方法，通过过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶协同作用可清除体表在紫外线等外界条件作用下由氧经过二价电子还原产生的过氧化氢，达到延缓衰老的目的。本专利技术通过下述技术方案实现：一种抗衰老共固定化酶，包括过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶，所述过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶的活力比为8:1～15:1。优选地，所述过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶的活力配比为9:1～12:1。一种抗衰老共固定化酶的制备方法，包括以下制备步骤：a、将过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶按活力比溶解于的磷酸盐缓冲液中制成过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶混合酶液；b、向步骤a中制备的混合酶液中加入壳聚糖微球制成混合液；c、将b步骤制备的混合液进行搅拌吸附；d、在完成c步骤后加入戊二醛溶液进行交联反应；e、静置，平衡至室温；f、在完成e步骤之后加入β-D-葡萄糖，电磁搅拌后，静置，备用；其中，a步骤中，所述氧化氢酶和葡萄糖氧化酶的活力比为8:1～15:1或9:1～12:1。优选地，所述a步骤中，磷酸盐缓冲液的pH为3～8，浓度为0.1～0.5mol/L；所述c步骤中，混合液在20～50℃，pH为5～7的条件下，搅拌吸附40～55min；所述d步骤中，加入戊二醛溶液的质量浓度百分数为1.5～3.5％。优选地，所述过氧化氢酶的比活力为50000U/mL，pH为6.0；所述葡萄糖氧化酶的比活力为10000U/g。优选地，所述a步骤配制的过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶混合酶液的体积：b步骤中壳聚糖微球的质量为5(mL):2(g)～5(mL):4(g)。将本专利技术的抗衰老共固化酶作用于体表，可形成致密的抗氧化保护层，有利于清除体表在紫外线等外界条件作用下由氧经过二价电子还原产生的过氧化氢，避免自由基产生和清除失衡，引发自由基链式反应加速人体皮肤的衰老；同时，可通过葡萄糖氧化酶分解共固化酶中的β-D-葡萄糖来清除体表过量的氧及过氧化氢酶分解过氧化氢产生的过量氧，并使体表含氧量达到动态平衡，保持肌肤弹性和白皙；葡萄糖氧化酶分解β-D-葡萄糖时产生葡萄糖酸，葡萄糖酸具有螫合铜离子特性，能帮助抑制了酪胺酸酶的活性，预防黑色素生成，预防老年斑的出现。本专利技术与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：本专利技术是一种抗衰老共固定化酶及其制备方法，通过过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶协同作用可清除体表在紫外线等外界条件作用下由氧经过价二价电子还原产生的过氧化氢，葡萄糖氧化酶分解共固化酶中的β-D-葡萄糖来清除体表过量的氧及过氧化氢酶分解过氧化氢产生的过量氧，并使体表含氧量达到动态平衡，保持肌肤弹性和白皙，达到抗衰老的目的。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例，对本专利技术作进一步的详细说明，本专利技术的示意性实施方式及其说明仅用于解释本专利技术，并不作为对本专利技术的限定。实施例1一种抗衰老共固定化酶的制备方法，抗衰老共固定化酶，包括过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶，过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶的活力比为8:1。包括以下制备步骤：a、将过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶按活力比为8:1溶解于的磷酸盐缓冲液中制成过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶混合酶液，其中，磷酸盐缓冲液的pH为3，浓度为0.1mol/L；b、向步骤a中制备的混合酶液中加入3g壳聚糖微球制成混合液；c、将b步骤制备的混合液在20℃，pH为5的条件下，搅拌吸附40min；d、在完成c步骤后加入质量浓度百分数为1.5％的戊二醛溶液，在5℃的温度条件下交联反应2.5h；e、放置平衡至室温；f、在完成e步骤之后加入0.8gβ-D-葡萄糖，电磁搅拌30min后静置，备用。其中，过氧化氢酶的比活力为50000U/mL，pH为6.0；所述固体葡萄糖氧化酶的比活力为10000U/g；a步骤配制的过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶混合酶液的体积：b步骤中壳聚糖微球的质量为5(mL):2(g)。实施例2一种抗衰老共固定化酶的制备方法，抗衰老共固定化酶，包括过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶，过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶的活力比为9:1。包括以下制备步骤：a、将过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶按活力比为9:1溶解于的磷酸盐缓冲液中制成过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶混合酶液，其中，磷酸盐缓冲液的pH为5，浓度为0.3mol/L；b、向步骤a中制备的混合酶液中加入3g壳聚糖微球制成混合液；c、将b步骤制备的混合液在30℃，pH为6.5的条件下，搅拌吸附45min；d、在完成c步骤后加入质量浓度百分数为2.5％的戊二醛溶液，在5℃的温度条件下交联反应2.5h；e、放置平衡至室温；f、在完成e步骤之后加入0.8gβ-D-葡萄糖，电磁搅拌30min后静置，备用。其中，过氧化氢酶的比活力为50000U/mL，pH为6.0；所述固体葡萄糖氧化酶的比活力为10000U/g；a步骤配制的过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶混合酶液的体积：b步骤中壳聚糖微球的质量为5(mL):3(g)。实施例3一种抗衰老共固定化酶的制备方法，抗衰老共固定化酶，包括过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶，过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶的活力比为10:1。包括以下制备步骤：a、将过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶按活力比为10:1溶解于的磷酸盐缓冲液中制成过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶混合酶液，其中，磷酸盐缓冲液的pH为5，浓度为0.3mol/L；b、向步骤a中制备的混合酶液中加入3g壳聚糖微球制成混合液；c、将b本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗衰老共固定化酶，其特征在于，包括过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶，所述过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶的活力比为8:1～15:1。

【技术特征摘要】
1.一种抗衰老共固定化酶，其特征在于，包括过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶，所述过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶的活力比为8:1～15:1。2.根据权利要求1所述的一种抗衰老共固定化酶，其特征在于，所述过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶的活力配比为9:1～12:1。3.一种抗衰老共固定化酶的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：a、将过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶按活力比溶解于的磷酸盐缓冲液中制成过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶混合酶液；b、向步骤a中制备的混合酶液中加入壳聚糖微球制成混合液；c、将b步骤制备的混合液进行搅拌吸附；d、在完成c步骤后加入戊二醛溶液进行交联反应；e、静置，平衡至室温；f、在完成e步骤之后加入β-D-葡萄糖，电磁搅拌后，静置，备用；其中，a步骤中，所述氧化氢酶和葡萄糖氧化酶的活力比为8:1...

【专利技术属性】
技术研发人员：桂涛，张洪浩，邓辉，王宝林，
申请(专利权)人：绵阳抱朴生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51