本发明专利技术公开了一种转人内皮抑素基因双歧杆菌双层微囊包埋技术，解决了长久以来一直无法突破的转基因双歧杆菌工程菌株不易保存与不耐胃酸的问题。利用奶蛋白等做第一层包覆，再利用阿拉伯胶及纤维寡糖等做第二层包埋，采用流化喷雾法转人内皮抑素基因双歧杆菌制成微囊菌粉。该项目的开发成功对转基因双歧杆菌工程菌株的保存、制剂、抗胃酸、定植都具有非常理想的效果，为微生态制剂剂型开发做了铺垫。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种转人内皮抑素基因双歧杆菌双层微囊包埋技术。包括用奶蛋白及特殊胶体对转人内皮抑素基因双歧杆菌菌体进行双层包埋。属于生物
技术介绍
有关益生菌的有益功能的研究已经有近百年历史了，而近几年来，市场上的益生菌产品(微生态制剂)也层出不穷，但这些产品要真正实现其功能，前提是益生菌必须具有足够的活性，而且能够进入人体内定植，才能对人体产生作用。益生菌有“三怕”(怕水、怕氧、怕胃酸)，在2003年通过对欧洲市场上55种益生菌产品的调查产品仅有13%活性合格，而我国目前微生态制剂行业更是存在明显质量问题菌种差，品种少，活菌含量少，活菌 存活率低，活菌存活期短，制剂水平低下。双歧杆菌易受外界环境因素如氧气、温度的影响.常常要求在低温下保存销售，从而严重影响了该类制剂的销售和应用。而且，未进行保护处理的双歧杆菌极易被胃酸灭活，难以保障进入肠道存活。因此，针对双歧杆菌的保护技术的研究(制剂工艺)成为双歧杆菌的功能应用及产业化推广的技术屏障。双歧杆囷制品王要有液态和固态广品。液态广品活囷保存很不理想。如在不米取任何技术措施的条件下，活菌保藏期只有7天左右；加了保护剂的菌液7°C冷藏8天残存率仅仅为37. 5%。所以目前活菌保护研究主要集中在固态制剂上，如微胶囊技术、冷冻干燥和涂膜技术的应用。冷冻干燥是先将被干燥物料中的水冻成冰，然后使冰升华而除去水的一种干燥方法。由于其对细胞损伤小，而且保护剂的使用会进一步减小损失，目前双歧杆菌主要采用此法制备活菌粉。甘油聚乙烯吡咯烷酮、海藻糖和脱脂奶粉被证明是良好的保护剂，对双歧杆菌存活力有较高的保护作用。经冻干的双歧杆菌活菌的存活率为40% 70%。保存期存活率还与制品的含水量、保存方式有关。微胶囊技术是近年来新兴的一门技术，是指采用特殊手段将固、液、气物质包埋成微小致密胶囊，在特殊条件下，其内含物可被控制释放，对保护生物活性分子、组织或细胞以对抗不利环境有较好的效果。制备微胶囊化双歧杆菌，一般采用对人或菌体无毒副作用的食用凝胶(如海藻酸钠、卡拉胶、阿拉伯胶、果胶、明胶等)作为包埋载体，并与一定比例的增塑剂和交联剂配成胶液，然后与分离收集的菌泥混和均匀，喷入到一定浓度的盐溶液中，经搅拌固化形成一定直径大小的固定化细胞微胶囊。
技术实现思路
本专利技术开发了一种转人内皮抑素基因双歧杆菌双层微囊包埋技术，具体内容包括以下几个方面 其一，将转人内皮抑素双歧杆菌发酵完成后以微过滤方式浓缩菌体。其二，利用奶蛋白等做第一层包覆，再利用阿拉伯胶及纤维寡糖等做第二层包埋，采用工艺条件为进液速度4-6mL/min，进口温度25. 5-34. 5°C，出口温度20. 5-29. 5°C，喷嘴雾化压力0. 3-0. 5MPa，干燥空气流量350-450m3/h的特殊包埋技术将转人内皮抑素基因双歧杆菌进行双层包埋，制成微囊菌粉。其三，该技术拟利用奶蛋白及最外层的胶体对双气杆菌的保护作用，开发耐久存、耐胃酸、耐胆盐、到达小肠立即溶解释放、吸附肠道黏膜定殖的转基因双歧杆菌抗肿瘤制剂。具体实施例方式具体工艺原理如下 (1)预制备肠溶胶包膜液变性淀粉40%、阿拉伯胶15%，聚乙二醇20%，海藻酸钠15%，壳聚糖10% ； (2)将转基因双歧杆菌浓缩液75%、奶蛋白15%、囊芯辅料(聚乙烯吡咯烷酮PVPK30、 纤维寡糖)10%在温度28 V以下、湿度57%以下、洁净度10万级的环境中进行搅拌混合25_35min,均质 15_25min ； 实施例一 将均质后的菌液与肠溶胶包膜液按I: I比例进入流化喷雾，工艺条件进液速度4mL/min，进口温度20. 5°C，出口温度20. 5°C，喷嘴雾化压力0. 3MPa，干燥空气流量350m3/h。包被率为95%。在低倍镜下观察，可见微胶囊呈小球形，直径10 30 ym，活菌聚集在微胶囊核心部位，每个微胶囊含90 180个活菌菌体。 实施例二 将均质后的菌液与肠溶胶包膜液按I: I比例进入流化喷雾，工艺条件进液速度5mL/min,进口温度30. 5°C，出口温度25. 5°C，喷嘴雾化压力0. 4MPa，干燥空气流量400m3/h。包被率为94%。在低倍镜下观察，可见微胶囊呈小球形，直径10 30 ym，活菌聚集在微胶囊核心部位，每个微胶囊含110 190个活菌菌体。 实施例三 将均质后的菌液与肠溶胶包膜液按I: I比例进入流化喷雾，工艺条件进液速度6mL/min，进口温度34. 5°C，出口温度29. 5°C，喷嘴雾化压力0. 5MPa，干燥空气流量450m3/h。包被率为98%。在低倍镜下观察，可见微胶囊呈小球形，直径10 30 ym，活菌聚集在微胶囊核心部位，每个微胶囊含100 200个活菌菌体。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种转人内皮抑素基因双歧杆菌双层微囊包埋技术，其特征在于：利用特殊的包埋技术将转人内皮抑素基因双歧杆菌进行双层包埋，制成微囊菌粉。
【技术特征摘要】
1.一种转人内皮抑素基因双歧杆菌双层微囊包埋技术，其特征在于利用特殊的包埋技术将转人内皮抑素基因双歧杆菌进行双层包埋，制成微囊菌...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖宏，苏小平，
申请(专利权)人：湖南科尔生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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