重组人血管内皮抑素的诱导表达方法技术

本发明专利技术的重组人血管内皮抑素的诱导表达方法，将工程菌发酵至发酵液OD600值为10-15，向其中加入诱导剂IPTG、碳源物质以及氮源物质，使发酵液中IPTG的浓度为0.2-0.4mmol/L，在30-37℃下，培养2.5-3.5h，再向其中加入诱导剂IPTG，使发酵液中IPTG的浓度为0.1-0.3mmol/L，继续培养3-5h，即可。本发明专利技术的重组人血管内皮抑素的诱导表达方法，可满足重组人血管内皮抑素的大规模生产的需要，在较高菌体浓度下实现高效诱导表达。

【技术实现步骤摘要】
重组人血管内皮抑素的诱导表达方法
本专利技术属于重组人血管内皮抑素的提取纯化领域，具体涉及一种重组人血管内皮抑素的诱导表达方法。
技术介绍
人血管内皮抑素，是目前作用最强、实验效果最好的肿瘤血管生成抑制剂。实验表明，内皮抑素对血管内皮细胞、生长的血管可产生抑制作用，可对肿瘤的生长和转移起到较好的抑制作用。从其作用机理来讲，人血管内皮抑素是通过抑制人体内肿瘤组织的血液供应使肿瘤缺乏营养物质和氧气而停止生长、进而逐步萎缩直至死亡的，相较于目前临床普遍使用的化疗药物，具有无明显毒副作用的优点，因而受到了医学界的广泛关注。目前，人血管内皮抑素主要是先通过基因重组技术获得携带人血管内皮抑素基因的工程菌，再将工程菌表达目标蛋白经提取纯化而制备得到的。在重组人血管内皮抑素的提取纯化过程中，工程菌的发酵及诱导工程菌表达人血管内皮抑素，对能否获得较高的产品收率及较好的产品纯度的起到关键作用。中国专利文献CN154667A公开了一种重组人内皮抑素在大肠杆菌中的高效表达技术，将重组质粒pBendo转化表达型宿主菌E.coliBL21(DE3)中，筛选出阳性重组菌E.coliBL21-Endo，接种于2ml本文档来自技高网...

【技术保护点】
重组人血管内皮抑素的诱导表达方法，其特征在于，包括以下步骤：将工程菌发酵至发酵液OD600值为10‑15，向其中加入诱导剂IPTG、碳源物质以及氮源物质，使发酵液中IPTG的浓度为0.2‑0.4mmol/L，在30‑37℃下，对工程菌培养2.5‑3.5h，再向其中加入诱导剂IPTG，使发酵液中IPTG的浓度为0.1‑0.3mmol/L，继续培养3‑5h，即可。

【技术特征摘要】
1.重组人血管内皮抑素的诱导表达方法，其特征在于，包括以下步骤：将工程菌发酵至发酵液OD600值为10-15，向其中加入诱导剂IPTG、碳源物质以及氮源物质，使发酵液中IPTG的浓度为0.2-0.4mmol/L，在30-37℃下，对工程菌培养2.5-3.5h，再向其中加入终浓度为0.1-0.3mmol/L的诱导剂IPTG，继续培养3-5h，即可。2.根据权利要求1所述的重组人血管内皮抑素的诱导表达方法，其特征在于，所述碳源物质为葡萄糖；所述氮源物质为酵母提取物、胰蛋白胨和水解酪蛋白中的一种或多种。3.根据权利要求2所述的重组人血管内皮抑素的诱导表达方法，其特征在于，所述葡萄糖的浓度为12-15g/L；所述酵母提取物的浓度为4-6g/L；所述胰蛋白胨的浓度为10-20g/L；所述水解酪蛋白的浓度为10-20g/L。4.根据权利要求1-3任一所述的重组人血管内皮...

【专利技术属性】
技术研发人员：荣志刚，姚建林，赵唯一，黄佩华，朱浩文，陈卫，崔志远，徐霞，
申请(专利权)人：江苏吴中医药集团有限公司苏州中凯生物制药厂，
类型：发明
国别省市：江苏;32