胞内劳森氏菌环介导等温扩增检测方法及其试剂盒技术

本发明专利技术涉及一种胞内劳森氏菌环介导等温扩增检测方法及其试剂盒。本发明专利技术试剂盒含有环介导等温扩增（LAMP）反应液、BstDNA聚合酶和SYBRGreenI荧光染料显色剂。利用试剂盒通过对样品中DNA的提取、胞内劳森氏菌环介导等温扩增和显色检测三个环节，从而检测出胞内劳森氏菌。通过灵敏性试验证明，本方法可对95.6pg?μL-1的DNA模板进行高效扩增，显示出本方法高度的灵敏性。解决了现有技术中检测步骤繁琐、成本较高、不适于临场检测的问题，提供了一种使用仪器简单、成本低、检测快速、敏感，适于基层现场检测胞内劳森氏菌的方法及其试剂盒。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，涉及一种利用环介导等温扩增(LAMP)技术进行胞内劳森氏菌快速检测的方法，并涉及一种用于检测胞内劳森氏菌的试剂盒。
技术介绍
胞内劳森氏菌iLawsonia intracellularis, LI)是引起猪增生性肠炎(porcine proliferative enteritis, PPE)的病原菌,该病是近年来新流行的，以回肠和结肠隐窝内未成熟的肠细胞发生腺瘤样增生为特征的接触性传染病。PPE对机体吸收营养和转化饲料能力造成根本性和持久性的破坏，是危害生长肥育猪最严重的细菌性疾病之一。据报道，在美国该病导致发病猪日增重平均下降37% 42%，每增重I公斤体重饲料摄入量增加27% 37%，发病猪每头损失5 8美元。PPE已在全球猪场流行，发病率有升高 的趋势，是目前猪场主要肠道性疾病之一。PPE的病原菌胞内劳森氏菌(LI)，具有革兰氏阴性菌的胞壁结构和原核生物的胞浆结构，外层细胞壁由3层波纹状膜所组成，革兰氏染色阴性，抗酸染色阳性，能被Levaditi Silver或Warthin—Starry镀银染色法着色,用改良的Ziehl—Neelsen染色法细菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胞内劳森氏菌环介导等温扩增快速检测试剂盒，其特征在于包括以下成分：（1）环介导等温扩增（LAMP）反应液：包括0.2？μM？的上游外引物、0.2？μM的下游外引物、1.6？μM的上游内引物、1.6？μM的下游内引物、1？M甜菜碱、6？mM硫酸镁、1.6mM？dNTP、10×Thermopol反应缓冲液，其中引物序列为：上游外引物F3：5“？AGCTAACGCGTTAAGCACC？3“下游外引物B3：5“？CTTAACCCAACACCTCACGG？3“上游内引物FIP：5“？CCACGTACTCCACCGCTTGTGTACGGTCGCAAGGCTGAA？3“下游内引BIP：？5“？ACCCA...

【技术特征摘要】
1.一种胞内劳森氏菌环介导等温扩增快速检测试剂盒，其特征在于包括以下成分 (1)环介导等温扩增(LAMP)反应液 包括0.2 μΜ的上游外引物、0.2 μΜ的下游外引物、I.6 μΜ的上游内引物、I.6 μ M的下游内引物、I M甜菜碱、6 mM硫酸镁、1.6mM dNTP、10XThermopol反应缓冲液，其中引物序列为 上游外引物 F3 :5’ -AGCTAACGCGTTAAGCACC-3’ 下游外引物 B3 :5’ -CTTAACCCAACACCTCACGG-3’上游内引物 FIP :5’ -CCACGTACTCCACCGCTTGTGTACGGTCGCAAGGCTGAA-3’ 下游内引 BIP 5’-ACCCAGGCTTACATCTGAGGGAATGCAGCACCTGTCTTGAG-3’ (2)聚合酶每微升为8个活性单位的BstDNA聚合酶； (3)显色剂SYBRGreen I荧光染料。2.根据权利要求I所述的一种胞内劳森氏菌环介导等温扩增快速检测试剂盒，其特征在于所述LAMP反应液体系为18 μ L，成分组成如下 O.2μΜ的上游外引物O. 4yL、0. 2 μ M的下游外引物O. 4 μ L、I. 6 μΜ的上游内引物O...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄翠琴，杨小燕，郑新添，尹会方，
申请(专利权)人：龙岩学院，
类型：发明
国别省市：