【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种检测旋毛虫和猪囊尾蝴的方法。
技术介绍
旋毛虫病(Trichinosis)是由旋毛形线虫(Trichinella spiralis)寄生于猪等家畜而引起的，除猪外，犬、猫、鼠、兔、牛、羊、人等近150种动物均可感染，由于此病感染来源于摄食了生的或未熟的含旋毛虫包囊的猪肉或其他动物肉，且人感染旋毛虫病可引起死亡，是ー种非常严重的人兽共患寄生虫病，所以在肉品卫生检验中为必检项目。目前除澳大利亚及某些岛屿外，其分布几乎遍及全球各地，已成为一种全球性自然疫源性疾病。肠旋毛虫和肌旋毛虫(即成虫和幼虫)寄生于同一宿主体内，主要致病阶段是肌幼虫且对人体危害很大，严重感染时常能致人死亡。临床症状以发热、全身肌肉酸痛为主，病情严重者可因毒血症、心肌炎及呼吸道并发症而死亡。 猪囊尾蝴病(Cysticercosis cellulosae),是由猪带绦虫的幼虫猪囊尾蝴(Cysticercus cellulosae)寄生于人及猪等动物体内而引起的ー种绦虫蝴病,是ー种非常重要的人兽共患寄生虫病。是肉品卫生检验的重要项目之一，由于含猪囊尾蝴的猪肉不能食用，给畜牧业造成巨大的...
【技术保护点】
一种检测食品中旋毛虫和猪囊尾蚴的方法，其特征在于检测食品中旋毛虫和猪囊尾蚴的方法，按以下步骤进行：一、设计旋毛虫Ts基因特异性引物和猪囊尾蚴Cc特异性引物，并对每对引物上游5′端均采用生物素标记，引物序列如下：旋毛虫Ts基因特异性引物：TsP1：5’？Biotin？AGGTTCGAAGGCGATCAGATAC？3’，TsP2：5’？CTGCTCGCCGAGTCTTAAATG？3’，猪囊尾蚴Cc特异性引物：CcP3：5’？Biotin？AGCGACGAGACGGGCATAC？3’，CcP4：5’？CGCTGCTGTTGACTGATGATG？3’二、样品处理：用DNA提取试剂盒...
【技术特征摘要】
1.一种检测食品中旋毛虫和猪囊尾蝴的方法，其特征在于检测食品中旋毛虫和猪囊尾蝴的方法，按以下步骤进行 一、设计旋毛虫Ts基因特异性引物和猪囊尾蝴Ce特异性引物，并对每对引物上游5'端均采用生物素标记，引物序列如下 旋毛虫Ts基因特异性引物TsPl :5’ -Biotin-AGGTTCGAAGGCGATCAGATAC-3’，TsP2 :5’ -CTGCTCGCCGAGTCTTAAATG-3’， 猪囊尾蝴Ce特异性引物CcP3 :5’ -Biotin-AGCGACGAGACGGGCATAC-3’，CcP4 :5’ -CGCTGCTGTTGACTGATGATG-3’ ニ、样品处理用DNA提取试剂盒提取待检样品的基因组DNA，作为PCR扩增模板； 三、双重PCR扩增以步骤ニ获得的基因组DNA为模板，用步骤ー的引物TsPl、TsP2、CcP3和CcP4进行PCR扩增，获得PCR扩增产物； 四、探针的修饰设计旋毛虫Ts基因探针和猪囊尾蝴Ce基因探针，在旋毛虫Ts基因探针和猪囊尾蝴Ce基因探针的5'端分别加11个T的连接臂，并进行氨基化修饰； 五、将光谱编号为38的微球与修饰后的旋毛虫Ts基因探针耦联，并稀释得到浓度为45000 50000个/ μ L的微球液Α，将光谱编号为44的微球与修饰后的猪囊尾蝴Ce基因探针耦联，并稀释得到浓度为45000 50000个/ μ L的微球液B ； 六、配制微球工作液向300μ L I. 5 X TMAC杂交液中依次加入I μ L微球液A和I μ L微球液B，混合均匀，即为微球工作液； 七、配制显色液用IXTMAC杂交液与SA-PE混合均匀，配制成10 μ g/mL的显色液； ノV、设置反应管和阴性对照管，向反应管中依次加入20 μ L的微球工作液、3 μ L步骤ニ获得的PCR扩增产物和7 μ L I X TE Buffer,向阴性对照管中加入20 μ L的微球工作液和10 μ L IXTE Buffer，用移液枪混合均匀；然后将反应管和阴性对照管置于PCR仪中，经95°C变性5min，再经50°C杂交20min，然后向每管内加入80 μ L显色液，混合均匀，将反应管和阴性对照管再次置于PCR仪中，50V杂交20min，杂交结束后将管放入LuminexlOO液体悬浮点阵检测仪的铜板中进行读数，即完成食品中旋毛虫和猪囊尾蝴的检测；其中步骤四中旋毛虫Ts基因探针Tsp为5’-CCAACCAGCGATTCGCCGAAGT-3’，猪囊尾蝴Ce基因探针Ccp为...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋铭忻，张子群，李巍，付丽君，韩彩霞，李晓云，唐颖，俞昭旸，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：
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