一种霍乱弧菌流行株分子鉴定方法及其ISSR-PCR引物及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种霍乱弧菌流行株分子鉴定方法及其ISSR-PCR引物及试剂盒，该ISSR-PCR引物的碱基序列表示如下：5’-ACGAGAGAGAGA-3’。本发明专利技术通过提供对霍乱弧菌流行株具有特异性分子鉴定作用的1条ISSR-PCR引物，及包含上述引物的试剂盒及检测方法，来检测某一分离获得的霍乱弧菌菌株基因组DNA，进而确定该霍乱弧菌菌株是否为流行株。本发明专利技术所述分子鉴定方法具有以下优点：①操作简便；②成本低廉；③特异性强，能准确的区分霍乱弧菌流行株和非流行株；④重复性好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种基于简单序列重复区间聚合酶链反应(inter simple sequencerepeat-polymerase chain reaction, ISSR-PCR)技术的食源致病菌分子鉴定方法。具体涉及区分霍乱弧菌流行株与非流行株的ISSR - PCR快速分子鉴定方法；还涉及所述方法中使用的对于霍乱弧菌流行株基因组具有特征性分子分型作用的引物。
技术介绍
霍乱(Cholera)是一个古老的烈性肠道传染病，被称为“摧毁地球最可怕的瘟疫之一”。其临床表现为急性腹泻、呕吐，泻吐频繁、量大，为米泔水样，从而导致脱水、电解质紊乱及周围循环衰竭，严重者可致休克、酸中毒，如不及时抢救，病死率甚高。轻症患者有时类似肠炎，易于漏诊或误诊，其危害性同样不可忽视。由于该病有来势迅猛，传播迅速等特点， 易引起世界大流行，被确定为国际检疫传染病。我国在传染病防治法中规定霍乱属于甲类传染病，必须重点监测和检疫。革兰氏阴性菌-霍乱弧菌(Vibrio Cholerae，VC)是引起霍乱的病原菌。目前已有200多种霍乱弧菌O抗原血清群被鉴定，但只有01群和0139群霍乱弧菌能导致霍乱，并引发世界性大本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种霍乱弧菌流行株分子鉴定用ISSR？PCR引物，其特征在于：所述引物的碱基序列表示如下：引物pGA5：5’？ACGAGAGAGAGA？3’。

【技术特征摘要】
1.ー种霍乱弧菌流行株分子鉴定用ISSR-PCR引物，其特征在于所述引物的碱基序列表示如下引物 pGA5 :5’ -ACGAGAGAGAGA-3’。2.ー种霍乱弧菌流行株分子鉴定用试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括如权利要求I所述的引物PGA5。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包括2X ISSR-PCR反应液和Taq DNA聚合酶，所述2 X ISSR-PCR反应液包括如下组分20mM 的 ρΗ8· 3 的 Tris-HCl，IOOmM 的 KCl, 4mM 的 MgCl2,0. 6mM 的 dNTP, 2. 4 μ M 的引物pGA5。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于试剂盒反应体系总体积为25μ L，含有2 X ISSR-PCR反应液12. 5 μ L，待检测基因组DNA IOOng ...

【专利技术属性】
技术研发人员：莫秋华，林继洪，梁玉英，杨泽，杜田，赵俊华，史咏梅，王琪，
申请(专利权)人：珠海国际旅行卫生保健中心，
类型：发明
国别省市：