用于哈氏弧菌的环介导恒温扩增快速检测试剂盒及方法技术

一种用于哈氏弧菌的环介导恒温扩增快速检测试剂盒，其组成为：反应液A，1支，其组成为：10×Lampbuffer，dNTP，硫酸镁水溶液，甜菜碱水溶液，引物vh-F3、vh-B3、vh-FIP、vh-BIP，BstDNA酶，10×荧光染料SYBRGreenⅠ，阳性对照试样，阴性对照试样和超纯水。本发明专利技术还涉及应用该试剂盒进行检测的方法。本发明专利技术试剂盒具有特异性强、灵敏度高、快速且成本低、操作方法更简单，适于水产养殖场现场快速检测。本发明专利技术方法解决了现有技术时间长、工作量大、交叉污染、操作复杂、需要复杂仪器等缺陷，为水产动物疾病检测提供了新的技术平台，能较好满足目前对哈氏弧菌引起的疾病的现场检测的迫切需要。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种鱼类哈氏弧菌的检测试剂盒，特别是一种用于哈氏弧菌的环介导恒温扩增快速检测试剂盒；本专利技术还涉及一种应用前述试剂盒进行检测的方法。
技术介绍
哈氏弧菌是一种具有发光特性的弧菌，在1936年由Johnson等将其命名为哈氏贝内克氏菌iBeneckea harveyi ), 1981年Baumann等将其正式归于弧菌属并命名为哈氏弧菌{Vibrio harveyi).该菌是海水中微生物区系的正常成员，也是海水中一种常见的致病菌。可引起海水养殖高体蛳、花鲈、斜带石斑鱼、长鳍真鲨、虹鳟和大西洋鲑、齿鲷、金头鲷、狼鲈、塞内加尔鳎、矛尾复鰕虎鱼等多种鱼类感染发病；该菌尤其是对对虾危害严重，曾引 起世界范围养殖对虾的大量死亡，有记述该菌引起印度尼西亚、菲律宾及台湾对虾育苗场斑节对虾和墨吉对虾幼体的大量死亡。可见哈氏弧菌能够引起多种海水养殖动物感染发病，严重制约了水产养殖业的发展。该菌传统的检验方法包括形态学检测、生理生化特征检测等，这些检测手段不仅工作量大，而且耗时长，已远远不能满足水产养殖生产上的诊断要求。编码DNA解旋酶B亚单位的基因(gyrB基因)序列具有保守性和变异性，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于哈氏弧菌的环介导恒温扩增快速检测试剂盒,？其特征在于，其组成为：？（1）反应液A，1支，其体积百分比组成为：①10×Lampbuffer，17%；其中Lampbuffer的组成为：200mM？Tris？HCl，100mM？KCl，100mM？(NH4)2SO4，20mM？MgSO4，质量浓度1%的？Trition？X？100，Lampbuffer的pH为？8.8；②dNTP，16.5%，浓度为10mM；③硫酸镁水溶液，14%，浓度为25mM；④甜菜碱水溶液，26.5%，浓度为8mol/L；⑤vh？F3，2.5%，浓度为10μM，上游外部引物vh？F3为：CAA？GAG？CGACCA？C...

【技术特征摘要】
1.一种用于哈氏弧菌的环介导恒温扩增快速检测试剂盒，其特征在于，其组成为 (O反应液A，I支，其体积百分比组成为 ①IOXLampbuffer, 17% ；其中 Lampbuffer 的组成为200mM Tris-HCl，IOOmM KCl，IOOmM (NH4) 2S04,20mM MgSO4，质量浓度 1% 的 Trition X-100，Lampbuffer 的 pH 为 8. 8 ；②dNTP, 16. 5%，浓度为 IOmM ； ③硫酸镁水溶液，14%，浓度为25mM； ④甜菜碱水溶液，26.5%，浓度为8mol/L ；⑤vh-F3, 2. 5%,浓度为 10 μ Μ, 上游外部引物 vh-F3 为-.Ckk GAG CGACCA CTT CAT GT ；⑥vh-B3, 2. 5%,浓度为 10 μ Μ, 下游外部引物 vh-B3 为TTA GCG CTG CAC GGA AAC ；⑦vh-FIP, 10. 5%,浓度为 10 μ Μ, 上游内部引物 vh-FIP 为TCG CGC TCA AAG TCG AAG TGG-CAA GCG TTT GTT GAG CACC； ⑧vh-BIP，10. 5%,浓度为 10 μ Μ, 下游内部引物 vh-BI...

【专利技术属性】
技术研发人员：张晓君，陈丽，毕可然，闫斌伦，秦国民，
申请(专利权)人：淮海工学院，
类型：发明
国别省市：