旋毛虫病快速诊断试纸条制造技术

本实用新型专利技术涉及一种旋毛虫病诊断试剂显示器具，特别是涉及一种旋毛虫病快速诊断试纸条（Ⅰ）（Ⅱ），含有支撑层、反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水薄片条，反应试剂载体吸附层粘贴于支撑层上，从样品端依次为纤维层，旋毛虫金标抗体Ｗ↓［１］或Ｗ↓［２］或旋毛虫金标抗原Ｍ纤维层，纤维素膜层，手柄端为吸水材料层，在纤维素膜层上有含旋毛虫的单克隆抗体Ｗ１或Ｗ２或多克隆抗体诊断印迹“│”或“－”和有含抗小鼠ＩｇＧ抗体对照印迹“－”或“│”。在纤维素膜层上有含抗人或抗某动物ＩｇＧ抗体Ｘｉ检测印迹“│”或“－”和有含抗旋毛虫ＥＳ抗原单克隆抗体对照印迹“－”或“│”。该诊断试纸条，特异性强，敏感性高，诊断结果显示形象、直观、准确，无需仪器设备。（*该技术在2012年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及一种旋毛虫病诊断试剂显示器具，特别是涉及一种旋毛虫病快速诊断试纸条。
技术介绍
众所周知，旋毛虫病是人畜共患的一种寄生虫病。其感染宿主众多，流行范围非常广泛，传染途径复杂，约有150多种动物能感染旋虫病，对人类身体健康造成很大威胁。旋毛虫病对畜牧业(特别是养猪业)，肉食品加工业，外贸出口业造成巨大的经济损失。旋毛虫的含虫包囊对外界环境具有很强的抵抗能力，如在--12℃的环境中可存活57天，对含有旋毛虫的肉类进行熏烤、腌制、爆炒及曝晒等很难杀死包囊内的旋毛虫的幼虫，人类感染旋毛虫的途径，往往是吃了保持活力的肉类食品中的旋毛虫肌幼虫，如水饺、爆炒肉片或被污染的凉菜等。人被感染后，其临床表现为微热，身体虚弱、易疲劳，有时有腹泻，呕吐，腹痛现象；严重者会出现咀嚼、吞咽和说话困难，声音嘶哑，呼吸及眼球疼痛，最为严重的可能会波及心脏和中枢神经，造成心力衰竭、昏迷甚至死亡。所以旋毛虫病对人类健康为害是人之共知的。但是很多动物如猪等对旋毛虫具有很大的耐受力，感染旋毛虫的病猪几乎不表现临床症状。这给人类预防旋毛虫病又带来一定困难。1979年某省猪的旋毛虫病感染率为0.4％，而到1982年，感染率上升到0.85％，其中1980年～1982年，某地区猪的旋毛虫病感染率为13.8％，而1986年猪的旋毛虫血清学阳性率上升到187％，据1996年不完全统计，仅某省旋毛虫病患者已达1万多人，可看出旋毛虫病对人们身体健康危害日益严重。长期以来，为确保肉食品安全，兽医卫生检验部门主要依靠传统屠宰后取隔肌压片镜检法，或用胃蛋白酶消化肌肉收集虫体的方法诊断旋毛虫病。但上述方法，检出率底，部分旋毛虫病猪漏检流向市场，危害人们健康，影响食品安全。同时上述两种检验方法不能在家畜宰杀前进行，不适应现代化肉类加工厂屠宰作业生产线的现场检疫，也不适应市场检疫，也无法提供活猪出口检疫，给生猪的检疫带来较大困难。为此国内外科技工作者又创造其它几种诊断旋毛虫病的方法。(1)皮内试验，该方法是应用变态反应来诊断旋毛虫病。该诊断方法所需时间较短，对人体的诊断约15分钟，对猪体诊断约需30～45分钟。但该方法的突出缺陷是存在严重的假阳性反应和交叉反应，只有60％的检率，目前很少采用。(2)补体结合反应(CF)，由于并非所有的抗体均能固定补体、所以该法只能检出一部分旋毛虫抗体，其敏感性和特异性较差，并且，补体结合反应操作复杂，费时费工，不同操作者之间存在差异较大，影响结果判断，造成难以推广应用。(3)凝集试验，将旋毛虫可溶性抗原吸附于某些载体表面，然后用吸附抗原的载体颗粒与血清中的抗体进行间接凝集试验，以检测旋毛虫病，近几年来发展起来的旋毛虫病凝集试验检测方法，主要有皂土絮状凝集试验(BFT)，乳胶凝集试验(LA)，间接血凝试验(IHA)等。这些方法的优点是较大提高了旋毛虫病的检出率，但操作复杂，要求操作人员的素质较高，并且只能在实验室内进行，无法到现场检测。(4)沉淀试验，主要有微量沉淀试验，对流免疫电泳，琼脂扩散试验(AGP)等。这些方法的敏感性评价不一，所用试剂和方法欠标准化。(5)免疫荧光抗体技术(IF)，IF不仅可用于旋毛虫病的检测，也可用于旋毛虫抗原的定位。应用抗原抗体反应的敏感性和特异性同显微镜形态学观察相结合，具有敏感、特异、稳定及结果判定准确直观等优点，是目前检测旋毛虫病的一种较好方法。但存在制片工作繁琐，工作量大，显微镜观察带有主观性，同时非特异性荧光的干扰也常常影响结果的判定，需要较好显微设备。(6)酶联免疫吸附试验(ELISA)，将ELISA技术应用于旋毛虫病的检测，大大提高了检出率，而且非常敏感；假阳性率大大下降，大幅度提高准确度，使旋毛虫病的免疫学检测取得突破性进展。当前我们研制成功的猪旋毛虫病快诊断试剂盒已得到广泛应用，但操作复杂，且需要附带4种试剂才能完成实验操作，对操作人员的技术水平要求较高，无法实现现场检测。(7)DNA检测技术，是从分子水平上检测旋毛虫感染的一种高新技术，具有高度的敏感性和特异性。对旋毛虫的分类和鉴定开辟了新的途径，使旋毛虫病的研究更加深入。但由于旋毛虫本身及其在宿主体内寄生部位的特殊性。使得难以从感染动物血液及其组织或排泄物中扩增到旋毛虫DNA，因而用PCR等基因检测技术对旋毛虫的检测受至限制。综合上述，从二十世纪四十年代开始至今，许多学者探索了旋毛虫病的很多检测方法，不断取得进步，不断提高检测的准确率，但始终未能克服特异性不强和出现假阳性现象，上述方法均存在操作复杂、繁琐，有的还需要专用仪器设备，需要专业人员操作。不适应现代化肉类联合加工厂的流水作业生产线操作，造成旋毛虫病猪的漏检，危害人们的食用安全，成胁人类健康。(三)
技术实现思路
本技术的目的是，利用旋毛虫抗原、抗体技术，建立旋毛虫特异、敏感、快速、简便的旋毛虫病诊断方法，研制出两种对人和动物旋毛虫病的快速诊断试纸条(I)和(II)。本技术的技术方案是一种旋毛虫病快速诊断试纸条(I)含有支撑层，反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水的薄片层，反应试剂载体吸附层固定在支撑层上，吸附层从样品端依次为纤维层，旋毛虫金标抗体W1或W2纤维层，纤维素膜层，手柄端为吸水材料层，在纤维素膜层上有含旋毛虫的单克隆抗体W1或W2或多克隆抗体诊断印迹“|”或“—”和有含抗小鼠IgG抗体对照印迹“—”或“|”。支撑层可为硬质塑胶片条，或为不吸水硬纸条，纤维层可为玻璃棉，纤维素膜层可用硝酸纤维素膜，吸水材料层可用吸水纸，旋毛虫金标抗体W1或W2纤维层，为胶金标记抗旋毛虫分泌抗原(ES)的单克隆抗体吸附在玻璃棉上，诊断印迹和对照印迹组合可为“+”，“‖”，“＝”，中的一种，选用“+”或“‖”或“＝”组合印迹较好，在纤维层，金标W1或W2玻璃棉，吸水材料层上覆盖有塑胶保护膜，在纤维层和金标W1或W2纤维层交界处对应保护膜偏向纤维层一侧约0.5cm处印制样品标记线。一种旋毛虫病快速诊断试纸条(II)，含有支撑层，反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水的薄片层，反应试剂载体吸附层固定在支撑层上，吸附层从样品端依次为纤维层，旋毛虫金标抗原M纤维层，纤维素膜层，手柄端为吸水材料层，″在纤维素膜层有含抗人或抗某动物IgG抗体Xi检测印迹“|”或“—”和有含抗旋毛虫ES抗原单克隆抗体对照印迹“—”或“|”。不吸水的支撑层可用硬塑料胶片条，或不吸水的硬纸条，纤维层可用玻璃棉，金标抗原M纤维层为吸附金标ES抗原的玻璃棉，金标抗原M为胶金标记旋毛虫的ES抗原，检测印迹和对照印迹的组合可为“+”，或“‖”，或“＝”，或 或 或 ，或 中的一种，选用“+”或“‖”或“＝”组合印迹较好，在纤维层，金标M纤维层及吸水材料层上覆盖固定有塑胶保护膜，在纤维层和金标M纤维层交界处对应保护膜偏纤维层一侧约0.5cm处印制样品标记线。抗人或抗某动物IgG的抗体Xi印制检测印迹“|”或“—”可为下列抗体中的一种；抗人IgG抗体X1，抗猪IgG抗体X2，抗猫IgG抗体X3，抗狗IgG抗体X4，……抗某动物IgG抗体Xn，旋毛虫ES抗原包括虫体分泌ES抗原及表达ES抗原。本技术具有积极有益效果(1)旋毛虫病快速诊断试纸条(I)和(II)，特异性强，敏感性高。两种诊断试纸条都使用以胶金本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种旋毛虫病快速诊断试纸条（Ⅰ）：含有支撑层，反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水的薄片层，反应试剂载体吸附层固定在支撑层上，其特征是：吸附层从样品端依次为纤维层，旋毛虫金标抗体Ｗ↓［１］或Ｗ↓［２］纤维层，纤维素膜层，手柄端为吸水材料层，在纤维素膜层上有含旋毛虫的单克隆抗体Ｗ１或Ｗ２或多克隆抗体诊断印迹“┃”或“─”和有含抗小鼠ＩｇＧ抗体对照印迹“─”或“┃”。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张改平，李学伍，杨艳艳，邓瑞广，肖治军，康晓笛，郭军庆，李青梅，李灵霞，王爱萍，杨继飞，
申请(专利权)人：河南省农业科学院生物技术研究所，
类型：实用新型
国别省市：41[中国|河南]