苯巴比妥快速检测试纸条制造技术

本发明专利技术公开一种苯巴比妥快速检测试纸条。它含有底层为支撑层，中间层为吸附层，保护层固定在吸附层上，吸附层从测试端依次为测试端吸附纤维层、吸附金标抗体纤维层、纤维素膜层及手柄端的吸水材料层，其中在纤维素膜层上有用偶联苯巴比妥的载体蛋白溶液印制的直线式检测印迹，用羊抗或兔抗小鼠ＩｇＧ或羊抗兔ＩｇＧ抗体溶液印制的直线式对照印迹。苯巴比妥金标抗体为胶体会标记的苯巴比妥单克隆抗体或多克隆抗体，偶联苯巴比妥的载体蛋白溶液为苯巴比妥与载体蛋白偶联的复合物溶液。偶联苯巴比妥的载体蛋白为牛血清白蛋白，或鸡卵清白蛋白，或为匙孔血蓝蛋白。本发明专利技术的试纸条具有特异性强，灵敏度高，简便，直观，准确，适用范围广，成本低，易于推广应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种快速检测微量镇静类药物的器具，特别是涉及一种苯巴比妥快速检测试纸条。二、技术背景现代养殖业为人类提供了丰富的肉、禽、奶、蛋等营养价值高的各种食品，改善了人类的饮食结构，提高了人类的物质生活和健康水平，为延长人类的寿命作出了贡献。与此同时，现代科学研究证明，养殖业中大量使用饲料添加剂，以及防病治病需要，大量使用抗生素、激素及其它合成药物，在促进动物生长、降低动物发病率与死亡率、提高饲料利用率的同时，也造成了动物性食品中药物残留和激素残留。另外由于科学知识的缺乏和经济利益的驱使，在养殖业中非法使用违禁药物、滥用抗菌药和饲料添加剂、不遵守休药期、配伍禁忌等有关规定的现象普遍存在，在我国情况亦为严重。滥用药物的直接后果是导致药物在动物性食品中的残留增加，并通过食物链的传递进入人体，对人类的生命健康构成威胁和危害。如癌症发病率增加，人类生育畸形比例增加，人体抗药性增强，青少年性早熟和某些食物中毒等现象，往往与动物性食品中药物、激素残留增加密切相关。苯巴比妥(Phenobarbital，简称PB)又名鲁米那，也叫迦地那，具有镇静、催眠、抗惊厥、抗癫痫等药效作用，临床上主要用于治疗焦虑、失眠、癫痫发作、运动障碍、高胆红素血症等疾病。PB具有很强的毒副作用，过量服用可抑制中枢神经系统，造成急性死亡；长期服用可导致眩晕困倦、运动失调、剥落性皮炎、肺功能不全、肝肾损害等副作用。另外还具有致畸作用，可引起胎儿腭裂和兔唇，影响智力发育。由于PB具有镇静、催眠等特殊的生物学功能，常被非法用于饲料添加剂，在肉猪饲料添加剂生产中应用更为严重，其药物残留严重危害着人们的身体健康和生命安全。因此各国政府都严禁PB用作饲料添加剂。2002年我国农业部、卫生部、国家药品监督管理局根据《饲料和饲料添加剂管理条例》、《兽药管理条例》、《药品管理法》的规定，联合发布公告，公布了《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》(农业部公告第176号)，苯巴比妥名列其中，要求对饲料生产、经营、使用和动物饮用水中非法使用违禁药物的违法行为严厉打击。但目前尚未建立国家检测标准，PB用作饲料添加剂的现象仍然存在，PB残留中毒事件时有发生，动物性食品中PB残留对人体的危害愈来愈引起人们的重视。目前用于精神类药品的监测方法主要是理化检测法，包括高效液相色普法(HPLC)，气-质联用法(GC/MS)，液-质联用法(LC/MS)等，这些方法检测苯巴比妥灵敏度高，特异性强，但是样品需经一系列复杂的处理净化，繁琐费时，从样品预处理到得出检测结果至少需要2天时间；同时这种检测方法需要大型专门仪器设备和专业技术人员操作，无法进行现场检测，时效性差，难以推广。另外免疫学检测方法主要是酶联免疫吸附法(ELISA)，以竞争性酶联反应为检测原理，反应显色后用酶标仪测OD值，OD值越低表示被检样品中苯巴比妥含量越高。检测过程约2～4小时，大大缩短了检测时间，降低了检测费用，既可定性又可定量检测，但是出现假阳性或假阴性的概率较大。由于ELISA是一种敏感性很强的检测方法，不同的操作者往往会出现不同的结果，所以该方法常常造成人为的误检和漏检。目前苯巴比妥免疫学检测方法在国内尚属空白，急待研究解决。
技术实现思路
本专利技术的目的研制出特异、灵敏、快速、简便的苯巴比妥快速检测试纸条。本专利技术的技术方案是一种苯巴比妥快速检测试纸条，底层为支撑层，中间层为吸附层，保护层固定在吸附层上，吸附层从测试端依次为测试端吸附纤维层、吸附金标抗体纤维层、纤维素膜层及手柄端的吸水材料层，其中在纤维素膜层上有用偶联苯巴比妥的载体蛋白溶液印制的直线式检测印迹，用羊抗或兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG抗体溶液印制的直线式对照印迹。测试端吸附纤维层用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯(PVDF)膜或聚酯膜；金标抗体纤维层用吸附苯巴比妥的金标抗体玻璃纤维棉，苯巴比妥金标抗体为胶体金标记的苯巴比妥单克隆抗体或多克隆抗体，偶联苯巴比妥的载体蛋白溶液为苯巴比妥与载体蛋白偶联的复合物溶液；纤维素膜层用硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜。偶联苯巴比妥的载体蛋白为牛血清白蛋白(BSA)，或鸡卵清白蛋白(OVA)，或为匙孔血蓝蛋白(KLH)，在纤维素膜层上设有直线式检测印迹和直线式对照印迹，两印迹平行排列组合为“‖”。在测试端吸附纤维层、金标抗体纤维层及吸水材料层上覆盖有保护膜，在测试端纤维层与金标抗体纤维层交界处对应的保护膜上印制有样品标记线，该标记线偏向测试端纤维层一侧约0.5cm处。吸水材料层用吸水滤纸，支撑层即不吸水薄片层，用不吸水的韧性材料；不吸水的韧性材料用硬质塑胶条，或不吸水的硬纸条。苯巴比妥快速检测试纸条具有以下优点①特异性强，灵敏度高。本专利技术试纸条以胶体金标记高亲和力的单克隆抗体为基础制备而成，金标抗体中金颗粒与抗体分子之间无共价键形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金标记对单克隆抗体的特异性及亲和力影响很小，且具有较高的标记率。因此，苯巴比妥快速检测试纸条具有较强的特异性和较高的灵敏度，可检测到1～10ppb的微量苯巴比妥。本专利技术在保障食品安全，保护消费者健康方面具有极其重要的意义。②简便、快速。使用本专利技术试纸条，无需其它任何试剂和仪器，可现场操作。只要将试纸条插入被检样品10～20秒钟，5分钟内即可判定检测结果。③结果显示形象、直观、准确。本专利技术试纸条以显示棕红色“|”和“‖”印迹作为检测结果阳性和阴性标记，即在纤维素膜上显示一条棕红色“|”印迹为阳性，表示被检样品中含有苯巴比妥；显示两条棕红色“‖”印迹为阴性，表示被检样品中不含苯巴比妥。结果判定形象、直观、准确，简单明了，不易出现假阳性和假阴性等人为误判。④节省费用。使用苯巴比妥快速检测试纸条，无需另配仪器设备和其它试剂，随时随地进行检测，费用低廉，节省大量贵重仪器及设备费用。⑤适用范围广，便于推广应用。苯巴比妥快速检测试纸条操作简便，能满足不同层次人员需要，包括专业化验、海关检疫、卫生检疫、质量监测、畜产品加工、养殖户以及消费者个人等，具有广阔的市场前景和明显的经济、社会效益。四附图说明图1为苯巴比妥快速检测试纸条结构示意图。图2为苯巴比妥快速检测试纸条俯视结构示意图。五具体实施例方式要制成苯巴比妥快速检测试纸条，首先要制备偶联苯巴比妥载体蛋白和苯巴比妥金标抗体，从而制备检测印迹和金标抗体纤维。其次需制备羊抗或兔抗小鼠IgG(或羊抗兔IgG)抗体，用于制备对照印迹。(1)苯巴比妥与载体蛋白偶联采用重氮化法或戊二醛法，将苯巴比妥与载体蛋白进行偶联制备人工结合抗原。第一步 硝化反应引入硝基，取1mmole PB，加入5mmole HNO3和5mmoleH2SO4混酸溶液，55℃密闭条件下反应1h，加入4倍ddw，5000rpm离心5min，取沉淀物干燥备用，产物为对硝基苯巴比妥(pNPB)；第二步 还原反应引入氨基，取1mmole pNPB溶解于10ml 1mol/L HCl中，加入Zn粉3mmole，65℃密闭条件下反应40min，用ddw洗涤三次，5000rpm离心5min，沉淀物溶解于10ml二甲基甲酰胺(DMF)，再加入100ml ddw，5000rpm离心10min，取沉淀物干燥备用，产物为对氨基苯巴比妥(pAPB本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种苯巴比妥快速检测试纸条，含有底层为支撑层，中间层为吸附层，保护层固定在吸附层上，其特征是：吸附层从测试端依次为测试端吸附纤维层、吸附金标抗体纤维层、纤维素膜层及手柄端的吸水材料层，其中在纤维素膜层上有用偶联苯巴比妥的载体蛋白溶液印制的直线式检测印迹，用羊抗或兔抗小鼠ＩｇＧ或羊抗兔ＩｇＧ抗体溶液印制的直线式对照印迹。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张改平，王自良，邓瑞广，杨艳艳，李学伍，王选年，肖治军，李青梅，杨继飞，柴书军，刑广旭，赵东，李灵霞，王建中，
申请(专利权)人：河南省农业科学院生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：41[中国|河南]