盐酸克伦特罗快速检测试纸条制造技术

本发明专利技术涉及一种检测受体兴奋剂的器具，特别是涉及一种盐酸克伦特罗快速检测的试纸条。含有支撑层，反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水薄片条，吸附层固定在支撑层上，吸附层从样品端依次为纤维层，吸附ＣＬ金标抗体Ｗ＃－［１］纤维层，纤维素膜层，手柄端为吸水材料层，以偶联ＣＬ的载体蛋白Ｘｉ溶液为纤维素膜层上印制检测印迹“｜”，用羊或兔抗小鼠ＩｇＧ抗体Ｙ溶液在纤维素膜层上印制对照印迹“｜”，组合印迹为“‖”。该快速检测试纸条，特异性强，敏感性高，操作简便快速，检测结果显示形象，直观，准确，成本低，投资少，不需专用仪器设备及专业人员，容易推广实施。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种检测受体兴奋剂的器具，特别是涉及一种盐酸克伦特罗(clenbuterol CL)快速检测试纸条。
技术介绍
现代畜牧业为人类提供了极其丰富的肉、禽、奶、蛋等营养价值高、品质优良的各种食品，为人类的物质生活，提高人们健康水平，延长人类寿命做出了很大贡献。与此同时，现代科学研究证明，由于畜牧业现代化，大量使用饲料添加剂以及防病、治病需要，大量使用抗生素、激素以及其它合成药物，造成畜禽食品中药物残留，激素残留等。通过食物链的传递，药物残留和激素残留物质对人体健康和生命构成威胁和危害，如癌症人发病率增加，人类生育畸形比例增大，人体抗药性增强，青少年性早熟，中老年心血管疾病漫延以及某些食物中毒等问题。往往与畜禽食品种的药物残留、激素残留密切相关。如盐酸克伦特罗(Clenbuterol)缩写为CL，俗称瘦肉精，是一种人工合成的肾上腺素神经兴奋剂，属β-兴奋剂类激素。低剂量时主要用于防治人、畜的支气管哮喘和支气管痉挛，肺气肿等疾病，但应有严格的剂量限制。用量超标人体会产生心悸、呕吐、肌肉不自主震颤等症状，甚至有生命危险，长期过量摄入会积蓄中毒，还有导致染色体畸变的可能。因其具有提高肌肉力量作用，很早就有一些运动员非法使用该药，国际上早就禁止在饲料和畜牧生产中使用。若剂量增加到治疗量的5～10倍，则有使胴体的脂肪重新分布，促进蛋白质合成和促进生长作用。所以增被用作畜禽饲料添加剂，添加到猪、牛、羊、兔、鸭、鹅等畜禽饲料中，以降低胴体脂肪含量，提高瘦肉率，促进生长，人在食用含有CL残留的畜禽肉、蛋、奶食品时，容易发生食物中毒事件。因此，欧美各国均禁止CL作为生长促进剂和饲料添加剂使用。我国农业部也正式下文严禁CL作为饲料添加剂使用。但是某些畜禽饲养户及养殖场在经济利益的驱动下，暗地里非法使用CL做为饲料添加剂，如用含有CL饲料饲养的猪，由于瘦肉率高，对顾客具有强大的吸引力，使其欺骗性和危害性更大，严重威胁人类健康。同时CL等β-兴奋剂类药物也被国际奥委会公布为违禁药物。当前对CL常用的检测方法主要有色谱技术和酶联免疫吸附试验等。色谱技术是国际上用于CL检测的常用经典技术，包括高效液相色谱(HPLC)，液相色谱/质谱连用(LC/MS)，气相色谱/质谱连用(GC/MS)，气相色谱/傅立叶红外联用(GC/FTIR)等。目前香港及内地研究单位多采用GC/MS和HPLC技术进行动物组织和毛发中CL的残留检测，应该说色谱技术对CL检测是非常有效、准确、敏感的。但待检样品需经一系列的予处理，繁琐费时，从样品予处理到得出检测结果至少需要2天时间；另外这种检测方法还需要价格昂贵的仪器设备，且需专业人员操作，每次只能检测一个样品，严重阻碍了这种检测方法的普及推广，更无法实现现场检测。ELISA，也是一种常用检测技术，已有商品化的试剂盒出售。是以竞争性酶联反应为检测原理，以β-兴奋剂抗体包被酶标板，检测时将被检样品和酶标结合物同时加入酶标板，反应后显色测OD值，OD值愈低表示被检样品中含CL含量愈高。检测全过程约需2-4小时。ELISA一次可检测多个样品，即可定性检测，也可定量检测。但存在着假阳性或假阴性问题。由于ELISA是一种敏感性很强的技术，不同人操作往往会出现不同结果，对结果的判定需要有一定操作经验的专业人员，所以该检测方法也常常造成人为的误检和漏检。同时，β-兴奋剂的种类较多，各药物之间也存在一定的抗原性差异，这也是造成漏检原因之一，加之检测时间较长，很难实施现场检测。当人们食用了残留较高浓度的CL动物组织后，会出现心动过速，肌肉震颤，心悸和神经过敏等症状。例如1997年上半年，在我国香港17人食用含有CL的猪肺汤，出现手指震颤、头晕、心悸、口干、失眠、瘫痪等症状，引起香港特别行政区和我国政府高度重视。浙江、北京、广东、河南等地也发现多人由于吃残留克伦特罗(CL瘦肉精)的猪肉造成食物中毒，引起农业部和当地政府的高度重视。各级食品检验部门和外贸出口单位，都加强对GL检测力度，以确保人民吃上放心肉。因此科技人员研制灵敏、快速，准确的CL检测方法，检测家畜组织及饲料中是否含CL的残留有着十分重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是研制出特异、敏感、快速、简便的盐酸克伦特罗快速检测试纸条。本专利技术的技术方案是一种盐酸克伦特罗(CL，瘦肉精)快速检测试纸条，含有支撑层，反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水薄片条，吸附层固定在支撑层上，从样品端依次为纤维层，吸附CL金标抗体W1纤维层，纤维素膜层，手柄端为吸水材料层，以藕联CL的载体蛋白Xi溶液在纤维素膜层上印制检测印迹“|”，用羊抗或兔抗小鼠IgG抗体Y溶液在纤维膜层上印制对照印迹“|”。吸水的支撑层薄片条可用硬质塑胶片条，或不吸水的硬纸条，纤维层可用玻璃棉，吸水材料层可用吸水纸，纤维素膜层可用硝酸纤维素膜，金标抗体W1纤维层可用吸附CL金标抗体玻璃棉，CL金标抗体W1为胶金标记CL的单克隆抗体M1或多克隆抗体，藕联CL的载体蛋白Xi的溶液为CL与载体蛋白Xi藕联结合的复合溶液，在玻璃与CL金标抗体W1玻璃棉及吸水纸层上覆盖有保护膜，在玻璃棉与金标抗体W1玻璃棉交界处对应的保护膜偏向玻璃棉一侧约0.5cm处印制样品标记线。藕联CL的载体蛋白Xi可为牛血清白蛋白(BSA)，或为鸡卵清白蛋白(OVA)，或为铁蛋白，或为血蓝蛋白等，在纤维素膜层上的检测印迹和对照印迹组合排列可为“‖”。本专利技术具有有益的积极效果，CL快速检测试纸条具有下列各项优点(1)特异性强，敏感性高。CL快速检测试纸条以胶体金标记高亲和力的单克隆抗体(M1)为基础制备而成，金标抗体中金颗粒与抗体分子之间无共价键形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金标对单克隆抗体(M1)特异性和亲和力影响很小，且具有较高的标记率。因此，快速检测试纸条具有较高的特异性和敏感性。可检测到0.1纳克。(2)操作简便快速。使用快速检测试纸条时无需任何其它试剂，只要将其插入待检样品10秒左右，在2分钟内即可判定检测结果。(3)显示检测结果形象、直观准确。快速检测试纸条以显示红棕色“|”及“‖”印迹作为检测的阳性和阴性标记，即在纤维素膜上显示一条棕红色“|”印迹表示在被检测样品液中含有CL，两条棕红色“‖”印迹表示在被检样品中不含CL，结果判定形象、直观、准确，简单明了，不易出现假阴性和假阳性误判。(4)成本低，投资少。使用快速检测试纸条，不需另配仪器设备及其它试剂，使现场检测一步到位，成本低廉，投资少，见效快。(5)易于大范围推广应用。快速检测试纸操作简单，人人都可操作，能较好满足不同层次人员的需要，如专业化验、海关检疫、卫生防疫、质量监测、畜产品加工、集约化养殖到个体养殖等，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。附图说明图1为盐酸克伦特罗快速检测试纸条结构示意图。图2为盐酸克伦特罗快速检测试纸条俯视结构示意图。(五)具体实施例要制成盐酸克伦特罗快速检测试纸条首先需制备藕联CL的载体蛋白，用于印制检测印迹，进而制备CL的金标抗体，用于金标抗体纤维，其次需制备羊或兔抗小鼠IgG抗体，用于印制对照印迹。(1)CL与载体蛋白(Xi)的藕联采用碳化二亚胺法、重氮化法或戊二醛法，将CL与载体蛋白进行藕联制备免疫抗原。将5mg盐酸克本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种盐酸克伦特罗（ＣＬ，瘦肉精）快速检测试纸条，含有支撑层，反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水薄片层，吸附层固定在支撑层上，其特征是：吸附层从样品端依次为纤维层，吸附ＣＬ金标抗体Ｗ↓［１］纤维层，纤维素膜层，手柄端为吸水材料层，以藕联ＣＬ的载体蛋白Ｘｉ溶液在纤维素膜层上印制检测印迹“丨”，用羊抗或兔抗小鼠ＩｇＧ抗体Ｙ溶液在纤维膜层上印制对照印迹“丨”。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：张改平，李学伍，王选年，杨艳艳，邓瑞广，肖治军，康晓笛，郭军庆，李青梅，王爱萍，杨继飞，李灵霞，
申请(专利权)人：河南省农业科学院生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：41[中国|河南]