当前位置: 首页 > 专利查询>江南大学专利>正文

基于二硫键强化折叠的热稳定性脂肪酶突变体及其构建方法技术

技术编号:8128351 阅读:530 留言:0更新日期:2012-12-26 23:37
本发明专利技术公开了一种基于二硫键强化折叠的热稳定性脂肪酶突变体及其构建方法和应用,属于酶工程技术领域,以华根霉(Rhizopus?chinensis)CCTCC?M?201021脂肪酶作为模板,在脂肪酶的盖子铰链区域引入二硫键而获得的热稳定性提高的脂肪酶突变体,相对于亲本脂肪酶,其Tm提高了7℃,具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及热稳定性提高的脂肪酶突变体,具体地说涉及利用分子生物学技术获得热稳定性提高的脂肪酶突变体,属于酶工程

技术介绍
脂肪酶(EC 3. I. I. 3)不仅能催化油脂水解,也能在非水相中催化酯合成、转酯化、酸解等反应,被广泛地应用于化学,食品,制药和洗涤剂或生物能源工业中。微生物是脂肪酶的一个重要来源,而根霉又是微生物脂肪酶的重要生产菌。如今,已有超过30种根霉脂肪酶实现了商品化生产。根霉脂肪酶大都具有高度1,3-位置选择性,因此常用于油脂加工中。但是油脂加工通常需要在较高温度下进行,而根霉脂肪酶属于中温脂肪酶,热稳定性差·不仅限制了其应用范围,而且易于失活,增加了生产成本。脂肪酶具有特征性的界面活性,即在油水界面,脂肪酶的盖子区域发生构象变化,由“闭盖”构象转变为“开盖”构象,盖子打开后,暴露出脂肪酶催化的活性位点以及底物结合区域,从而行使催化功能。酶的热稳定性与酶结构的“刚性”与“柔性”有关,“刚性”越强则酶的结构更加趋于稳定,反之,“柔性”越强则酶的稳定性越差。针对脂肪酶,其盖子区域的“柔性”最强,但同时也是脂肪酶发挥活性的重要功能区域,如何通过增强脂肪酶本文档来自技高网...

【技术保护点】
基于二硫键强化折叠的热稳定性脂肪酶突变体,其特征在于,在华根霉CCTCC?M?NO:201021脂肪酶结构的盖子铰链区域进行突变引入二硫键。

【技术特征摘要】
1.基于二硫键强化折叠的热稳定性脂肪酶突变体,其特征在于,在华根霉CCTCCM NO:201021脂肪酶结构的盖子铰链区域进行突变引入二硫键。2.根据权利要求I所述突变体,其特征在于所述突变位于华根霉CCTCCM NO =201021脂肪酶第95位及第214位氨基酸,第95位氨基酸由苯丙氨酸突变成半胱氨酸,第214位氨基酸由苯丙氨酸突变成半胱氨酸,所述突变体氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示。3.根据权利要求I或2所述突变体,其特 征在于所述突变体的核苷酸序列如...

【专利技术属性】
技术研发人员:喻晓蔚徐岩
申请(专利权)人:江南大学
类型:发明
国别省市:

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1