【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及通过定向进化构建的热稳定性提高的脂肪酶突变体,具体地说涉及利用分子生物学技术获得热稳定性提高的脂肪酶突变体,属于酶的基因工程
技术介绍
脂肪酶(EC 3. I. I. 3)不仅能催化油脂水解,也能在非水相中催化酯合成、转酯化、酸解等反应,被广泛地应用于化学,食品,制药和洗涤剂或生物能源工业中。微生物是脂肪酶的一个重要来源,而根霉又是微生物脂肪酶的重要生产菌。如今,已有超过30种根霉脂肪酶实现了商品化生产。根霉脂肪酶大都具有高度1,3-位置选择性,因此常用于油脂加工中。但是油脂加工通常需要在较高温度下进行,而根霉脂肪酶属于中温脂肪酶,在65°C下的半衰期仅有15 min左右,热稳定性差不仅限制了其应用范围,而且易于失活,增加了生产成本。定向进化属于非理性设计,是指通过在实验室中模拟达尔文自然进化过程,针对某一蛋白质酶的基因,通过改进的诱变技术改造的酶的基因,然后根据特定的改造目的,筛选有价值的天然酶。近10年来,定向进化技术已经在酯酶和脂肪酶性质改造领域取得巨大的成功,主要集中于提高酶的催化反应活性,改进底物特异性,提高热稳定性,对映立体选择性等方面(Johannes Tff et al. Curr. Opin. Microbiol, 2006, 9: 261-267)。专利技术人在前期研究中成功从酿造浓香型大曲酒的酒曲中筛选到一株高产脂肪酶的华根霉(TSizojOT1S chinensis ) CCTCC M 201021菌株,并从该菌株中首次克隆得到脂肪酶基因序列,并实现该脂肪酶在巴斯德毕赤酵母G0ZcAia pastoris) ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.通过定向进化构建的热稳定性提高的脂肪酶突变体,其特征在于由亲本华根霉(.Rhizopus chinensis ) CCTCC NO M 201021 脂肪酶进行定向进化,通过易错 PCR、DNAShuffling和定点突变,获得脂肪酶突变体,亲本华根霉氨基酸序列SEQ ID NO: I中在氨基酸取代位置发生突变,采用“原始氨基酸-位置-替换的氨基酸”来表示脂肪酶突变体中突变的氨基酸,所述脂肪酶突变体为 脂肪酶突变体氨基酸取代位置 突变体 10 Ser234Phe/Leul80His/Thr218Ser 华根霉脂肪酶氨基酸突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO: 2 ; 用于表达所...
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