【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种基因突变型重组蛋白酶K及其工业化生产方法。更具体而言，本专利技术涉及一种经过基因改造和蛋白质工程化得到的酶活性为同种天然蛋白酶活性2倍以上的基因突变型重组蛋白酶K;以及利用酵母细胞大规模培养表达外源蛋白，制备所述基因突变型重组蛋白酶K的工业化生产方法和工艺过程。
技术介绍
蛋白酶K是一种丝氨酸蛋白酶，于1974年首次在林伯氏白色念球菌(Tritirachium album limber)的提取物中发现(Ebeling W 等，Eur J Biochem. 1974 Aug15;47(1) :91-7)。由于该酶能够消化富含二硫键的天然角蛋白，林伯氏白色念球菌能够以角蛋白作为唯一的碳源/氮源生长，蛋白酶K也由此得名。 蛋白酶K最大的特点在于对天然蛋白质具有广谱高效的切割能力，是现有蛋白酶中活性最高的一种。该酶偏好于切割脂肪族氨基酸和芳香族氨基酸，特别是丙氨酸的羧基端妝键。此外，蛋白酶K还是一种稳定性非常出色的酶，在pH 4、H 12、20°C 60°C的条件下均有活性，在多种能够使蛋白质变性的化学试剂(如SDS、尿素、螯合剂(如EDTA)及巯基试...
【技术保护点】
基因突变型重组蛋白酶K，其特征在于：将如SEQ？ID？NO.2所示的氨基酸序列第151位的Y突变为A、第208位的K突变为H、第273位的S突变为T、第293位的G突变为A、第332位的K突变为R、第337位的S突变为N。
【技术特征摘要】
1.基因突变型重组蛋白酶K，其特征在于将如SEQID NO. 2所示的氨基酸序列第151位的Y突变为A、第208位的K突变为H、第273位的S突变为T、第293位的G突变为A、第332位的K突变为R、第337位的S突变为N。2.如权利要求I所述的基因突变型重组蛋白酶K，其中，所述基因突变型重组蛋白酶K还具有下述任意一种以上的突变 (1)第123位的S突变为A; (2)第180位的L突变为I。3.如权利要求I或2所述的基因突变型重组蛋白酶K，其中，所述基因突变型重组蛋白酶K的C端还具有六聚组氨酸标签。4.编码如权利要求1-3中任一项所述的基因突变型重组蛋白酶K的DNA。5.如权利要求4所述的DNA，其中，所述DNA为SEQID NO. 6-9所表示的核苷酸序列的全部或部分，所述部分至少具有SEQ ID NO. 6-9第7-1113位的核苷酸序列。6.包含如权利要求4或5所述的DNA的表达载体，其中，所述表达载体优选为pPICZ、pPICZ a、pGAPZ、pGAPZ α、pGAPZ a A 和 pPIC9K。7.导入权利要求6...
【专利技术属性】
技术研发人员：安海谦，鲁刚伟，冉波，任玉珍，
申请(专利权)人：金普诺安生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：
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