一种温度适性广的中性脂肪酶LIPG及其基因和应用制造技术

本发明专利技术涉及基因工程领域，具体地，本发明专利技术涉及一种温度适性广的中性脂肪酶LIPG及其基因和应用。本发明专利技术提供了一种温度适应性广的中性脂肪酶LIPG，及其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。本发明专利技术获得中性脂肪酶，其在pH6.5～8.5的范围内均具有高的酶活性，其在25℃～80℃的范围内均具有高的酶活性，最适温度为65℃，并且在30℃时仍然具有约60％的脂肪酶活性；同时该脂肪酶还具有极好的热稳定性，90℃处理半小时仍然具有90％的酶活性剩余，因此其可以有效地抵御饲料制粒的高温。这些性质使其适用于淡水鱼类饲料中。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程领域，具体地，本专利技术涉及一种温度适性广的中性脂肪酶LIPG及其基因和应用。
技术介绍
脂肪在畜禽体内的作用主要是氧化供能，它含有的能量是碳水化合物的2. 25倍，可满足动物体对较高能量浓度的要求。脂肪是脂溶性维生素和某些激素的溶剂，促进对这些物质的吸收和利用，同时为畜禽提供必需的不饱和脂肪酸，保证畜禽的健康生长；添加脂肪还可减少饲料加工过程中的粉尘，改善饲料外观，在高温条件下，还有利于提高能量摄入量，降低畜禽的体热增耗，减缓热应激；此外，添加脂肪可有效地提高饲料的适口性。因此，在猪、鸡和奶牛饲料中添加脂肪是比较普遍的作法。脂肪酶(lipase),也称为三脂酰甘油水解酶(triacylglycerolhydrolase, EC 3.11. 3)，能够分解生物产生的各种天然的油和脂肪，自然界中广泛存在。脂肪酶是脂肪代谢最基本的酶，若缺乏将会危及机体健康。单胃动物自身能够分泌内源性消化酶，包括淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等。但幼禽、幼畜消化机能尚未发育健全，内源性消化酶分泌量不足。在现代养猪生产中，早期断奶甚至超早期断奶在养猪生产中普遍实施，但早期断奶后，幼畜消化酶分泌产生不良影响，消化酶分泌急剧减少，断奶2周后才逐渐恢复并增加。断奶后2周内消化酶分泌不足是断奶仔猪生长阻滞的主要因素之一；雏鸡大多数消化酶在2周龄左右才发育到高峰，因此，消化酶分泌不足也是雏鸡对饲料利用的主要限制因素之一。在幼禽、幼畜日粮中添加外源性淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等，能补充体内内源酶的不足，并能减轻断奶仔猪的断奶应激，提高动物的生产性能。有研究表明，外源性脂肪酶可提高饲料中的脂肪消化率，可提饲料的表观代谢能值和饲料转化率。脂肪酶应用在不同领域中的选择性是基于它的底物特异性、位置特异性、定向性、温度和PH特性等。和大部分饲养酶制剂一样，应用在饲料行业的脂肪酶需要具备一些特殊的性质。真正适合在饲料中使用的脂肪酶，必须具有好的热稳定性而同时在常温下具有高活性；最适PH在酸性同时在整个酸性和中性的pH范围内又能维持较高的活性；对动物胃、胰蛋白酶和别的蛋白酶都具有较好的抗性等综合性质。对于淡水养殖的主要鱼类-鲤科鱼类来说，因为它们没有胃，只有pH值呈中性(pH6. 5 8.0)的肠道，因而与其他畜禽饲料添加的脂肪酶相比，在鱼类饲料中添加的脂肪酶必需使用在中性PH值条件下。另外由于水产养殖环境得水体温度一般在0-30°C之间，投放到养殖池塘的脂肪酶需要在低温具有较高的活性。而到目前为至，几乎没有在低温及中性的环境下具有高酶活性脂肪酶的报道。因此，开发温度适应性广的中性脂肪酶具有较好的科学理论价值，也具有较大的应用潜力和产业价值。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种能高效应用于淡水鱼类的温度适性广的高温中性脂肪酶。本专利技术的再一目的是提供编码上述温度适性广的中性脂肪酶的基因。本专利技术的另一目的是提供包含上述基因的重组载体。本专利技术的另一目的是提供包含上述基因的重组菌株。本专利技术的另一目的是提供一种制备上述温度适性广的中性脂肪酶的基因工程方法。本专利技术的另一目的提供上述温度适性广的高温中性脂肪酶的应用。本专利技术提供了一种温度适性广的高温中性脂肪酶LIPG，其氨基酸序列如SEQ IDN0. I 所示。MRRGIVSTIT IVSVLAGILff LGGFAMGIQD QFFSAAMPPA GTTKYTKEKKADNREIYIVA 60LGDSLTRGTG DESGKGYIGY MVDSLRKKTT KPIRVTNLAI KGQRSDGLLKQLGQAEIKRQ 120LKMADIIVMT IGGNDLFQGG EALKLAPKQI EQAKNAYLHN LDRIFQTIRSVNKDA WFYI 180GLYNPFSDLG DAKKTSAIVR QffNFASAETA ARYPNIIAVP IFDLFELHVNDYLYSDHFHP 240NKEGYKRIGE RVASLITffTE EDKQ264本专利技术提供了编码上述温度适性广的高温中性脂肪酶的基因LipG。具体地，该基因的基因组序列如SEQ ID NO. 2所不。atgagacgcg gtattgtaag caccatcacg attgtatccg tgctggcggg aatattatgg 60cttggcggtt ttgccatggg cattcaagat caattttttt ccgccgcgat gccgccagca 120ggcacgacga aatatacaaa agagaaaaaa gcggacaacc gtgaaattta cattgtcgct 180cttggcgact cgctgacaag gggaacggga gacgaaagcg gaaaagggta tattggctat 240atggtcgatt ctctccgtaa aaaaacaacg aaaccgattc gtgtaacaaa cttggctatt 300aaaggacagc gatctgacgg actccttaag caattaggac aagctgagat aaagaggcag 360ctaaaaatgg ctgacatcat cgtgatgacg atcggcggga atgatttgtt tcaaggcgga 420gaagcgctaa agcttgcgcc aaagcaaatc gagcaggcaa aaaacgcgta tttacacaac 480ttagaccgta tttttcaaac gattcgcagc gtcaataaag atgcagttgt tttttacatc 540gggctttaca atccgtttag cgacctcggt gacgcaaaga agacatccgc gatcgtaagg 600cagtggaatt ttgcttcggc agaaacggca gctcgctatc caaatatcat tgctgtgccg 660atattcgatt tgtttgagct tcatgtgaat gattatttgt acagcgacca tttccatccg 720aataaggaag gctataaacg cattggcgaa cgtgtcgctt ctttaattac gtggacggag 780gaggacaaac aatga795本专利技术还提供了包含上述温度适性广的高温中性脂肪酶的基因LipG的重组载体，优选为 pET-28a-LipG。本专利技术还提供了包含上述温度适性广的高温中性脂肪酶的基因LipG重组菌株，优选所述菌株为大肠杆菌、酵母菌、芽孢杆菌或乳酸杆菌。本专利技术还提供了一种制备温度适性广的高温中性脂肪酶LIPG的方法，包括以下步骤I)用上述的重组载体转化宿主细胞，得到重组菌株；2)培养重组菌株，诱导重组脂肪酶表达；以及3)纯化所表达的脂肪酶LIPG。本专利技术还提供了上述脂肪酶LIPG的应用。本专利技术获得一种温度适性广的高温中性脂肪酶，pH6. 5 8. 5的范围内均具有高的酶活性，其在25V 80°C的范围内均具有高的酶活性，最适温度为70°C，并且在30°C时仍然具有约60%的脂肪酶活性；同时该脂肪酶还具有极好的热稳定性，90°C处理半小时仍然具有70%的酶活性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种温度适性广的高温中性脂肪酶LIPG，其特征在于，其氨基酸序列如SEQID？NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种温度适性广的高温中性脂肪酶LIPG，其特征在于，其氨基酸序列如SEQID NO. I所示。2.一种温度适性广的高温中性脂肪酶的基因LipG，其特征在于，编码权利要求I所述的脂肪酶。3.如权利要求2所述的脂肪酶的基因LipG，其特征在于，其碱基序列如SEQIDN0.2所 示。4.包含权利要求2所述脂肪酶的基因LipG的重组载体pET-28a-LipG。5.包含权利要求2所述脂肪酶的...

【专利技术属性】
技术研发人员：詹志春，张菁，
申请(专利权)人：武汉新华扬生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：