一种促进黄鳝生长的口服重组蛋白TAT-GH及制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种促进黄鳝生长的口服重组蛋白TAT-GH及制备方法和应用。一种促进黄鳝生长的口服重组蛋白的制备方法，其步骤是：A、根据已知序列人工合成黄鳝GH基因；B、通过PCR的方法扩增蛋白转导结构域多肽TAT，并将其与GH基因融合；C、双酶切TAT-GH融合基因和质粒，胶回收含TAT-GH基因的片段和开环片段，得到TAT-GH质粒；D、将质粒转化到感受态BL21（DE3）中，所得阳性克隆即为目的菌株。E、分离纯化目的菌株表达的蛋白。纯化后的TAT-GH重组蛋白经口服方式能有效促进黄鳝生长，为制备TAT介导的口服重组蛋白制剂提供了依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因生物工程
，具体涉及一种促进黄鳝生长的口服重组蛋白，还涉及一种促进黄鳝生长的口服重组蛋白的制备方法，还涉及一种表达口服重组蛋白的大肠杆菌基因工程菌株，同时还涉及一种口服重组蛋白在促进黄鳝生长中的应用。
技术介绍
黄鳝(Monopterus albus),俗称鳝鱼、田鳗和长鱼等,它是一种淡水硬骨鱼类，广泛分布于中国、印度、马来西亚和印度尼西亚，已在中国中南部开展大面积的养殖。中国目前的养殖总产量已经达到18万吨，由于其生长快，成活率高以及对网箱养殖条件的适应性好，它被当作中国水产养殖的首选品种之一。鳝肉质细嫩，鲜美可口，营养价值高，具有滋补 强身和药用功能，是人们喜爱的滋补水产品，深受中国消费者的青睐。为了繁荣市场，丰富人民生活，发展池塘养殖已变得日益迫切，对黄鳝的生物学特性、生长变化规律等方面的研究已成为重要的课题。近年来其水产养殖发展很快。在水产养殖中高效饵料的研制是增产增收的基本途径。如何提高饵料转化率，缩短养殖周期，降低生产成本，提高水产养殖品的产量和质量被越来越多的科研工作者和养殖户所关注。鱼类生长激素是由鱼的脑垂体前叶细胞合成分泌的一种单链多肽，具本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离重组的基因，其核苷酸序列为SEQ？ID？NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种分离重组的基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO. I所示。2.一种分离重组的融合蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO. 2所示。3.—种表达权利要求2所述融合蛋白的基因工程菌株，其特征在干大肠杆菌(Escherichia coli ) BL21 (DE3) pET-32a-TAT-maGH, ompT hsdSB (rBmB)gal dcm (DE3)；CCTCC NO M2012147o4.一种权利要求2所述融合蛋白的制备方法，其步骤为 黄鳝GH基因的制备根据GeneBank中已经发表的GH的序列GeneBank AY265351. I人工合成黄鳝GH基因，并设计PCR引物，以人工合成的黄鳝GH基因为模板，PCR扩增目的基因GH;GH 的上游引物 Pl :5’ -GGCGGATCCATGGACAAAGTCGTCCTCCTG-3’ ；GH 的下游引物 P2 :5’ - GCCGAATTCCTACAGAGTGCAGTTAGCTTCTGG -3’ ； TAT-GH融合基因的制备通过PCR的方法扩增蛋白转导结构域多肽TAT，并将其与GH基因融合，其具体步骤是 以人工合成的黄鳝GH基因为模板，上游引物 P3: 5 ’ -CAGCGTCGTCGTGGATCCATGGACAAAGTCGTCC-3，； 下游引物 P4: 5’ -GCCGAATTCCTACAGAGTGCAGTTAGCTTCTGG-3’ .划线处为 EcoR I 位点，退火温度为55°C，PCR扩增目的片段，电泳并作回收； 以上一歩回收产物为模板，上游引物 P5: 5 ’ -CGTAAAAAACGTCGTCAG...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟小林，徐进平，王健，周莉，
申请(专利权)人：武汉凯肽来生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：