罗非鱼重组口服蛋白TAT-GH及制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种罗非鱼重组口服蛋白TAT-GH及制备方法和应用。从雄性罗非鱼的脑垂体中提取总mRNA，通过RT-PCR得到cDNA，再通过PCR扩增获得罗非鱼生长激素GH的基因，PCR重叠延伸的方法扩增TAT-GH基因；构建重组质粒pET-32a（+）-TAT-GH。将重组质粒pET-32a（+）-TAT-GH转化大肠杆菌BL21（DE3），在IPTG诱导下，融合蛋白TAT-GH以包涵体的形式得到高效表达，再通过纯化复性得到活性蛋白，喂食罗非鱼幼苗后能有效地促进其生长发育。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因生物工程
，具体涉及一种重组口服生长素蛋白TAT-GH，还涉及一种重组口服生长素蛋白TAT-GH的制备方法，还涉及一种能表达重组口服生长素蛋白TAT-GH的基因工程菌株；还涉及一种重组口服生长素蛋白TAT-GH在促进罗非鱼生长中的应用。
技术介绍
鱼类生长激素(growth hormone,GH)是由鱼脑垂体远端的嗜酸性细胞分泌与合成的一类单链多肽。它在鱼的生长、能量的固定、性腺的发育等方面都具有重要的调节作用，也是水产养殖中一直备受研究者关注的领域。鱼类GH的分离工作始于上世纪70年代，在80年代中后期形成热点。其最初的分·离技术类似于哺乳类GH的分离，通常将鱼的脑垂体或体外培养的分泌液在碱性条件下匀浆，经柱层析分离后，再采用等电点沉淀法得到较高浓度的GH，但此法沉淀得到的GH溶解度低，难以溶解。不少学者改进方法，采用柱层析后经离子交换层析，再用rpHP LC纯化，或是通过葡聚糖凝胶过滤和反相高效液相色谱纯化两步法得到GH。目前，国内外已有二十多种鱼GH被分离纯化出来，并对这些鱼类GH的氨基酸全序列进行了分析和鉴定，也证明了不同物种间的同源性与差异性。鱼生本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离重组的基因，其特征在于，其序列为SEQ ID N0:1所示。2.一种分离重组的融合蛋白，其特征在于，其序列为SEQ ID N0:2所示。3.—种表达权利要求2所述融合蛋白的大肠杆菌基因工程菌株，其特征在于大肠杆菌(Escherichia coli ) BL21 (DE3) pET-32a-TAT-tmGH, WompT hsdSB (rBmB) galdcm (DE3) ； CCTCC NO :M2012148。4.权利要求2所述融合蛋白的制备方法，其步骤为 A.罗非鱼生长激素基因的制备取已处死的新鲜雄性罗非鱼脑垂体，液氮研磨，Trizol法提取GH的总mRNA后，以Oligo (dT)20为引物通过RT-PCR得到cDNA，同时设计GH的PCR上下游引物，扩增得到GH基因；最后克隆到pGEM-T载体中，转化大肠杆菌JM109，用于基因的增殖和保藏；GH 的上游引物 Pl :5’ -CGGGATCCATGAACTCAGTCGTCCTCCA-3’ ；GH 的下游引物 P2 :5’ -CGGAAITCCTACAGAGTGCAGITTGC...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟小林，徐进平，王健，曾辉，
申请(专利权)人：武汉凯肽来生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：