抗TNF-α抗体和其用途制造技术

本发明专利技术涉及针对肿瘤坏死因子α(“TNF-α”)的抗体，和所述抗体例如用于治疗与TNF-α的活性和/或过量产生相关的疾病的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗TNF-α抗体和其用途相关申请案本申请案主张2009年4月16日申请的美国临时申请案第61/170,053号的权益，所述申请案的内容以全文引用的方式并入本文中。序列表参考与本专利技术同时提交的序列表以引用的方式并入本文中。
本专利技术涉及抗TNF-α抗体、包含抗TNF-α抗体的医药组合物和所述抗体的治疗用途。
技术介绍
肿瘤坏死因子α(TNF-α)为由免疫系统的细胞释放且与免疫系统的细胞相互作用的促发炎性细胞因子。已显示TNF-α在包括慢性疾病(诸如类风湿性关节炎、克罗恩氏病(Crohn′sdisease)、溃疡性结肠炎和多发性硬化症)在内的多种人类疾病中上调。举例来说，TNF-α含量升高可见于类风湿性关节炎患者的滑液中且在作为类风湿性关节炎的标志的病理性炎症和关节破坏两者中起重要作用。人类TNF-α为17kDa蛋白质，且活性形式以均三聚体形式存在(佩尼查(Pennica)等人，1984，自然(Nature)312：724-729；戴维斯(Davis)等人，1987，生物化学(Biochemistry)26：1322-1326；Jones等人，1989，自然(Nature)338：225-228)。TNF-α通过与共表达于大多数细胞类型上的两个结构相关但功能不同的细胞表面受体p55和p75相互作用来发挥其生物作用(罗伊斯切尔(Loetscher)等人，1990，细胞(Cell)61：351-9；史密斯(Smith)等人，1990，科学(Science)248(4958)：1019-23)。p55也称作p55R、p55TNFR、CD120a、TNFRI、TNFR1和TNFRSFIa。p75也称作p75R、p75TNFR、CD120b、TNFRII、TNFR2和TNFRSFIb。这两种受体也通过蛋白水解以能够结合TNF-α的可溶性分子形式释放。作为治疗疾病(具体来说，类风湿性关节炎)的方法，对TNF-α活性进行抑制已通过多种不同方式使用诸如抗体和可溶性受体等抑制剂达成。实例包括由伊姆耐斯公司(ImmunexCorporation)以ENBREL出售的依那西普(etanercept)，其为包含两个p75可溶性TNF-受体结构域连接于人类免疫球蛋白Fc部分的重组融合蛋白。由森托科尔公司(CentocorCorporation)以REMICADE出售的英利昔单抗(Infliximab)为具有鼠类抗TNF-α可变结构域和人类IgG1恒定结构域的嵌合抗体。其它抑制剂包括经工程改造的TNF-α分子，其与天然TNF-α形成三聚体且阻止受体结合(斯蒂德(Steed)等人，2003，科学(Science)301：1895-1898；WO03/033720；WO01/64889)。这些抑制TNF-α活性的当前方法阻断TNF-α与p55和p75受体两者的结合(参见例如密斯(Mease)，2005，生物学疗法专家观点(ExpertOpin.Biol.Therapy)5(11)：1491-1504)。由阿波特实验室(AbbottLaboratories)以HUMIRA出售的阿达木单抗(Adalimumab)为重组完全人类抗TNF-α抗体(图斯罗特(Tussirot)和温德林(Wendling)，2004，药物疗法专家观点(ExpertOpin.Pharmacother.)5：581-594)。阿达木单抗特异性结合TNF-α且阻断其与p55和p75细胞表面TNF-α受体的相互作用。阿达木单抗也在活体外通过补体依赖性细胞毒性(“CDC”)和抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(“ADCC”)溶解表面表达TNF-α的细胞。阿达木单抗不结合淋巴毒素(TNF-β)或不使淋巴毒素(TNF-β)失活。阿达木单抗也调节由TNF诱导或调控的生物反应，所述生物反应包括负责白血球迁移的粘附分子(ELAM-1、VCAM-1和ICAM-1，IC50为1-2×10-10M)的含量变化。尽管阿达木单抗为人类抗体，但当投予人类时，其可能会引发免疫反应。所述免疫反应可能引起免疫复合物介导的抗体或片段从循环中清除，并使反复投药不适用于治疗，从而降低对患者的治疗效益且限制抗体的再投予。因此，需要提供克服一种或一种以上这些问题中的改良的抗TNF-α抗体或片段，例如通过产生亲和力比阿达木单抗高从而可以降低的剂量投予的变异体或免疫原性相较于阿达木单抗降低的变异体。对本申请案的第4部分或任何其它部分中的任何参考文献的引用或标明不应视作承认所述参考文献可用作本专利技术的先前技术。
技术实现思路
本专利技术涉及相较于D2E7，与TNF-α的结合得到改良和/或免疫原性降低的抗TNF-α抗体D2E7的变异体。D2E7具有三个重链CDR，本文中称作(以氨基端至羧基端的顺序)CDR-H1(SEQIDNO：5)、CDR-H2(SEQIDNO：6)和CDR-H3(SEQIDNO：7)；以及三个轻链CDR，本文中称作(以氨基端至羧基端的顺序)CDR-L1(SEQIDNO：8)、CDR-L2(SEQIDNO：9)和CDR-L3(SEQIDNO：10)。本专利技术的抗TNF-α抗体和抗TNF-α结合片段一般相较于D2E7在至少一个CDR中具有至少一个氨基酸取代。在某些方面中，至少一个氨基酸取代或取代的组合选自表11、表12和/或表25。其它突变(包括取代、缺失或插入)可选自表13-25中的一者或一者以上。在某些方面中，本专利技术涉及相较于D2E7对TNF-α的结合性质得到改良(例如亲和力得到改良)的抗TNF-α抗体D2E7的变异体。在特定实施例中，本专利技术的抗体对TNF-α的亲和力大于D2E7，例如如由BIAcore所测量KD得到改良和/或如由竞争ELISA所测量亲和力得到改良。在某些方面中，抗TNF-α抗体和抗TNF-α结合片段包括至少一个选自以下的取代：CDR-L2(SEQIDNO：9)中的S3K、CDR-L2(SEQIDNO：9)中的S3R、CDR-L2(SEQIDNO：9)中的S3N、CDR-L2(SEQIDNO：9)中的T4H、CDR-L2(SEQIDNO：9)中的T4Q、CDR-L2(SEQIDNO：9)中的T4V、CDR-L2(SEQIDNO：9)中的T4F、CDR-L2(SEQIDNO：9)中的T4W、CDR-L2(SEQIDNO：9)中的T4Y、CDR-L2(SEQIDNO：9)中的L5R、CDR-L2(SEQIDNO：9)中的L5K、CDR-L2(SEQIDNO：9)中的Q6K、CDR-L2(SEQIDNO：9)中的Q6R、CDR-H1(SEQIDNO：5)中的D1G、CDR-H1(SEQIDNO：5)中的Y2H、CDR-H1(SEQIDNO：5)中的A3G，和CDR-H2(SEQIDNO：6)中的T3N。其它可并入亲和力改良的变异型抗TNF-α抗体和抗TNF-α结合片段中的突变可为去免疫化取代(诸如表11中所述的取代)；以及其它不破坏抗TNF-α抗体和抗TNF-α结合片段结合TNF-α的能力的突变(例如取代)，包括(但不限于)表13至24中所述的已知突变或表25中所述的突变。在某些方面中，抗TNF-α抗体和抗TNF-α结合片段包括至少一个选自以下的取代：CDR-L2中的T4F、CDR-L2中的T4本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.04.16 US 61/170,0531.一种抗TNF-α抗体或抗体的抗TNF-α结合片段，其是一种参照的单克隆抗TNF-α抗体的变异体或抗TNF-α抗原结合片段，所述参照的单克隆抗TNF-α抗体或抗TNF-α抗原结合片段包括：CDR-H1，氨基酸序列为DYAMH(SEQIDNO:5)；CDR-H2，氨基酸序列为AITWNSGHIDYADSVEG(SEQIDNO:6)；CDR-H3，氨基酸序列为VSYLSTASSLDY(SEQIDNO:7)；CDR-L1，氨基酸序列为RASQGIRNYLA(SEQIDNO:8)；CDR-L2，氨基酸序列为AASTLQS(SEQIDNO:9)；和CDR-L3，氨基酸序列为QRYNRAPYT(SEQIDNO:10)；其中，所述变异体包括选自如下的CDR-L1氨基酸取代的组合：Q4G+A11G、Q4H+A11S、Q4R+A11S或G5S+A11S。2.如权利要求1所述的抗TNF-α抗体或抗TNF-α结合片段，其包含选自如下的CDR-L1氨基酸取代的组合：Q4H+A11S、Q4R+A11S或G5S+A11S。3.如权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：菲奥娜·A·阿尔丹，赤松谦子，罗伯特·B·迪布里吉，大卫·B·鲍尔斯，
申请(专利权)人：亚培生物医疗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：