针对ＩＬ－２５的抗体制造技术

本发明专利技术涉及ＩＬ－２５抗体ＶＨ域和包含此类抗体ＶＨ域并且与ＩＬ－２５结合的靶结合成员（例如抗体）。本发明专利技术还涉及包含与ＩＬ－２５结合的靶结合成员（例如抗体）的组合物，产生此类靶结合成员的方法，以及此类靶结合成员用于治疗或预防疾病和病况（例如哮喘、炎症性肠病）的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及针对白细胞介素25(IL_25)的抗体，包括其结合片段。
技术介绍
哮喘哮喘是常见的慢性气道炎性病症。近几十年来，患者数目急剧增加，并且世界卫生组织估计世界范围内大约有300，000, 000人患有哮喘。过敏性哮喘的特征在于，由多种激发性刺激物诱导的不可控的气道反应过度(AHR)，并且与2型炎性浸润物进入肺相关。2型细胞因子在介导针对寄生的蠕虫感染的保护性免疫力、调节效应子功能例如 B细胞生长和IgE分泌、诱导杯状细胞增生和相关的粘液产生、嗜曙红细胞增多、肥大细胞增多和纤维化中具有重要作用(1)。正是这些细胞因子在调节这些效应子功能中所起的关键作用，使它们成为哮喘中的主要治疗靶标。事实上，在过表达这些细胞因子的小鼠模型中，显示出哮喘的显著特征。然而令人惊奇的是，除了抑制IL-13之外，通过阻断特定的2 型细胞因子来改善实验性哮喘的努力却证明是不成功的。IL-13的抑制阻抑AHR和气道炎症，虽然其机理仍然未知0，3)。然而，鉴于哮喘的病理生理学的复杂性以及对其病因学知之甚少，仍然不确定的是，靶向单一的途径最终是否会在治疗上取得成功。最近证明，IL-25/IL_17E(结构上相关的IL-17细胞因子家族的成员)(8)的过表达在体内诱导2型应答(4-6)并且增强对气道激动剂的反应性(7)。1125+小鼠未能有效驱除蠕虫寄生虫；还已经表明，在来自具有哮喘的患者的样品中，无效2型应答的关键指征 IL-25(9，10)上调。炎症性肠病炎症性肠病(IBD)是慢性炎症，其影响大肠或结肠的粘膜层，其通常包括选自下列的一种或多种疾病病况溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)。UC被认为是Th2介导的疾病，其代表性小鼠模型显示出2型细胞因子参与肠炎症的产生(16)。已经在慢性结肠炎的小鼠模型中观察到了 IL-25的产生，伴随从Thl至Th2型应答的转变(17)，并且已经报道了 IL-25mRNA在小鼠整个胃肠道中的高表达(18)。此外，IL-25基因位于14号染色体上的克罗恩病易感区内，虽然其与该疾病的潜在关联仍待研究(19)。此外，IBD可以包括一种或多种选自下列的疾病病况胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、缺血性结肠炎、转向性结肠炎、白塞病、感染性结肠炎和未定型结肠炎。用于治疗IBD的常规治疗法包括抗生素或留体衍生的药物；然而目前这些在诱导或维持患者的临床缓解上是不成功的00)。包括抗-TNF-α试剂的治疗法也是目前可以获得的，虽然其显示出差的功效01，22)。这说明显然需要新的和更有效的用于治疗炎症性肠病的治疗法。抗体抗体的基本结构在本领域中是熟知的。天然存在的抗体通常具有4个多肽链通过二硫键连接的2个相同的重链和2个相同的轻链。重链和轻链各具有恒定区和可变区 (或域)，即VH和VL。可变区主要负责抗原的结合。在每个可变区内，被称作互补决定区 (OTR)的三个亚区与抗原接触。每个可变域的⑶R从N-末端至C-末端编号为⑶R1、⑶R2 和CDR3。N-和-C末端与CDR之间是4个所谓的框架区，其不与抗原接触或接触极少。在下文列举的很多文献中诠释了关于抗体结构的更详细的内容，这些文献通过引用方式并入本文。有多种方式可以产生针对靶抗原的抗体。使用杂交瘤技术产生单克隆抗体是此类方法之一。通常在小鼠或其它啮齿类动物中产生抗体。这可以是产生高亲和性抗体的有用方式。然而，对于随后要用于人类治疗中的此类抗体而言，通常需要将抗体的CDR转移进入人类框架区。这是为了避免在患者中出现人-抗-小鼠抗体应答。Jones 等人和 Riechman 等人(11，12)描述了 CDR 移植(grafting)的一般原理。 即，将小鼠抗体的CDR移植进入受体人抗体的框架区内。在实践中，虽然得到的抗体将与相同的靶抗原结合，如同原始供体小鼠抗体一样，但是，移植的抗体的亲和性通常会大大降低。此外，移植的抗体的热稳定性通常会被破坏。试图恢复并优化原始抗体的性质的多种方式是本领域已知的。例如，框架区内包含一些与某些种系⑶R相关的“典型(canonical)结构”残基，见Chothia & Lesk(13)。另外，Foote & Winter(H)已经鉴定了“微调区”残基(其中有一些也是典型结构残基)，其支持抗原结合环构象及其相对排列，因此被认为在抗体与抗原的适合性的微调中具有重要作用。此外，认为框架区内的其它残基使VH/VL界面稳定并维持该界面。因此，研究抗体人源化的技术人员通常寻找这样的人类框架其中微调区、典型残基和界面残基(“VCI”)尽可能接近地对应于原始供体抗体中的那些残基。然而，每种抗体都代表了对本领域技术人员的独特挑战，不能确定的是，任意一般性的已知的用于CDR移植的方法对于每种情况都是直接适用的。本专利技术人和合作者(Ballantyne等人(15))报道了与IL-25结合的小鼠单克隆抗体2C3的产生，其能够在体内阻断过敏性哮喘中的气道反应过度。迄今为止，该抗体的序列是公众不可获得的。PCT/GB2008/001365,公开日为 2008 年 10 月 30 日，公开号为 W02008/U^63，报道了 2C3抗体的序列及其在阻断气道反应过度中的用途。
技术实现思路
本专利技术涉及基于2C3序列的人源化的(CDR-移植的)抗体。在产生该抗体时，需要克服多种挑战。本专利技术人首先选择了具有最大的VCI同源性的受体(recipient)人类抗体VH链，其具有22个VCI残基中的20个。然而发现，得到的抗体(“RHA”)与IL-25的结合程度显著小于2C3本身与IL-25结合的程度。虽然对该抗体进行了很多进一步的修饰，包括改变VCI指定的氨基酸和那些似乎代表罕见的体细胞突变的残基，但是对抗体结合的改善收效甚微。在试图克服VCI同源性方法在抗体人源化中的失败时，选择了不同的人类VH框架，其具有较低的VCI残基匹配(17/22)，但是具有稍高的总体同源性。得到的抗体提供了比“RHA”抗体更高的结合，虽然其结合仍然不如母体2C3抗体高。为了使结合最大化并且使具有激发抗体应答的风险的非人残基最少化，进行了另外的框架ILCDR变化。发现得到的抗体与2C3相比，具有增强的结合，并且在体内测试对气道反应过度的抑制时发现，该抗体的效力显著高于2C3。该抗体还显示出良好的热稳定性。本专利技术涉及衍生自2C3的人源化VH链。在一些方面，本专利技术涉及包含该链的抗体。 所述抗体可以包含含有2C3 VL⑶R的人源化VL链。因此，在一个方面，本专利技术提供了抗体VH域，其包含SEQ ID NO=I Glu Val Gln Leu ValGlu Ser Gly Ala GluValLysLysProGlyAlaSer ValLys ValSer Cys Lys Ala SerGly Tyr Ser Phe XalXa2TyrThrMetAsnTrpVal ArgGln AlaPro Gly Gln Arg LeuGlu Trp Xa3 Gly LeulieAsnProTyrAsnGlyGly ThrSer TyrAsn Gln Asn Phe LysGly Arg Val Thr LeuThrXa4AspThrSerAlaSer ThrAla TyrLeu Glu Leu本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．抗体ＶＨ域，其包含ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１：Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｇｌｎ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ｘａ１　Ｘａ２　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　Ｍｅｔ　Ａｓｎ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　Ａｒｇ　Ｇｌｎ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｇｌｎ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｔｒｐ　Ｘａ３　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｉｌｅ　Ａｓｎ　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ａｓｎ　Ｇｌｎ　Ａｓｎ　Ｐｈｅ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　Ｘａ４　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｔｙｒ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｘａ５　Ｔｙｒ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　Ａｌａ　Ｍｅｔ　Ａｓｐ　Ｔｙｒ　Ｔｒｐ　Ｇｌｙ　Ｇｌｎ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ，其中：Ｘａ１是Ｓｅｒ或Ｔｈｒ；Ｘａ２是Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ｔｙｒ或Ｍｅｔ；Ｘａ３是Ｍｅｔ或Ｉｌｅ；Ｘａ４是Ｖａｌ或Ａｒｇ；并且Ｘａ５是Ａｓｐ、Ａｓｎ或Ｇｌｙ。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·J·马修斯，
申请(专利权)人：医疗研究局，
类型：发明
国别省市：GB