抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３抗体制造技术

本发明专利技术提供了包含抗原结合结构域的抗体，该抗原结合结构域结合人ＩＬ－１２和人ＩＬ－２３。抗体结合作为单体（人ＩＬ－１２ｐ４０）和作为同二聚体（人ＩＬ－１２ｐ８０）存在的人ＩＬ－１２ｐ４０，并且抗体抑制人ＩＬ－１２与人ＩＬ－１２Ｒβ２的结合和人ＩＬ－２３与人ＩＬ－２３Ｒ的结合，但不抑制人ＩＬ－１２或人ＩＬ－２３或人ＩＬ－１２ｐ４０或人ＩＬ－１２ｐ８０与人ＩＬ－１２Ｒβ１的结合。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及结合人IL-12和IL-23的抗体。技术背景本说明书中作者参考的出版物的书目详细内容在描述结束时按字母顺序归总。本说明书中对任何现有技术的参考不是并且不应当被认为是承认或任何形式的暗示该现有技术形成任何国家中公知常识的一部分。白细胞介素-12(也称为细胞毒性淋巴细胞成熟因子或自然杀伤细胞刺激因子) 是75-kDa的异二聚体蛋白。其由p35亚基构成，所述亚基由一束类似I类细胞因子的四个 α螺旋组成。Ρ35中C-端至C63的11个氨基酸称为二硫键环，因为该区域含有许多接触 p40(IL-12的另一个亚基)的残基，包括p40中与C177的链间二硫键。p40亚基折叠类似其他I类受体(如，生长激素受体(GHIO)的细胞外结构域。p40亚基具有标为D1、D2和D3的三个结构域。每个结构域是β折叠结构，D2结构域含有C177链间二硫键。D2上还存在N-连接的糖基化位点(GlcNAc-GlcNAc-甘露糖， 其中 GlcNAc 是 N-乙酰葡糖胺)(Yoon 等人，2000 Embo J 19 3530-41)。白细胞介素-23是最近(2000年)通过搜索序列数据库发现的，该数据库具有白细胞介素-6螺旋细胞因子家族成员的计算衍生图谱。该搜索引起称为IL-23pl9(pl9)的新细胞因子亚基的发现。该亚基与IL_12p40共表达，引起称为白细胞介素-23(IL-23)的异二聚体蛋白的分泌。认为IL-23pl9类似IL-12p35，因为其含有四个螺旋束(Oppmarm等人，2000，Immunity 13 715-25)。IL-12对其靶细胞类型的特异性作用是通过IL-12R复合物来介导的，该复合物由 IL-URP 1 (Chua 等人，1994 J Immunol 153 1沘_36)和 IL-12R β 2 (Presky 等人，1996 Proc Natl Acad Sci U S A 93 14002-7)构成。IL-23对其靶细胞类型的特异性作用是通过IL-23R复合物来介导的，该复合物由IL-12R0 1和IL-23R构成(Parham等人，2002 J Immunol 168 5699-708) 通过共同的p40亚基来介导IL-12Ri3 1与IL-12和IL-23的结合。这使用竞争试验得到了证明，在该实验中P40亚基的同二聚体(p80)与IL-12竞争与IL_12Ri3 1的结合。 然而，p80 对 IL-12 与 IL-12R0 2 的结合不起作用(Presky 等人，1996 Ann N Y Acad Sci 795 390-3)。接着是IL-12的p35亚基或异二聚体接触面负责结合IL_12Ri3 2，由此给予了 IL-12 对 IL-12R 复合物的选择性(Trinchieri 等人，2003 Immunity 19 641-4)。同样，IL-23的pl9或异二聚体接触面负责结合IL-23R，由此给予了 IL-23对IL-23R复合物的选择性。已经阐明了 IL-12R和IL-23R复合物的信号传导。IL-12R激活Janus激酶 (JAK)-这是信号传导的转录途径的信号传导子和激活子(STAT)。IL-12的实际细胞效应主要是由于STAiM激活引起的(Kaplan等人1996 Nature 382 174-7)。在IL-12R3 2上存在STAT4结合位点，表明该受体对于信号传导是至关重要的(Yao等人，1999Arch Biochem Biophys 368 147-55)。在IL-URβ 2的表达与THl细胞对IL-12应答的相互关系中也证明了这一情况(Rogge 等人，1997 J Exp Med 185 825-31)。IL-23R 激活与 IL-23R 相似的复合物，如JAK-STAT途径。通过IL-23与IL-23R的结合，STAT3得到比STAT4更明显的诱导，并且其他所得到的结合DNA的STAT转录因子复合物是不同的(Parham、Chirica等人 2002 J Immunol 168 5699-708)。IL-12和IL-23的生物效应彼此不同。IL-12是由激活的炎性细胞(单核细胞、 巨噬细胞、嗜中性粒细胞、小胶质细胞、树突细胞)分泌的。主要研究了 IL-12对淋巴细胞的效应，尽管它也影响其他类型的细胞。在炎症过程中，IL-12诱导NK细胞和T细胞产生干扰素-Y (IFN- Y )。然后IL-12可能与IFN- γ联合，诱导T细胞分化成ThI细胞。 这种应答刺激了细胞免疫系统并最大化了巨噬细胞对病原体的杀灭效应和CD8+T细胞的增殖(Trinchieri 2003 Nat Rev Immunol 3 133-46)。IL-2 的过度产生与提高的促炎症反应活性和自体免疫典型的组织损伤相关(Leonard等人，1997 Crit Rev Immunol 17 545-53) ο失调的IL-12产生涉及以下疾病牛皮癣(Yawalkar等人，1998 J Invest Dermatol 111 1053-7 ；de Rie 1999 Dermatology 199101 ；Shaker φ A,2006 Clin Biochem 39 119-25)、克隆氏病(Neurath 等人，1995J Exp Med 182 1281-90 ;Simpson 等 A, 1998 J Exp Med 187 1225-34 ;Camoglio等人，2002 Eur J Immunol 32 261-9)、多发性硬化(Fassbender 等人，1998 Neurology51 753-8 ;Laman 等人，1998 J Neuroimmunol 86 30-45)、类风湿性关节炎(Kim等人，2000 Clin Exp Immunol 119 175-81 ;Leung等人，2000 J Immunol 1646495-502)，此外还有其他的自体免疫疾病。IL-12在这些疾病中的作用尚不清楚，但认为可能涉及ThI应答的过度极化(Gordon等人，2005 Curr Opin Gastroenterol 21431-7)。IL-23通过激活的人巨噬细胞以及树突细胞来分泌(Verreck等人，2004 ProcNatl Acad Sci U S A 101 4560-5)。IL-23主要作用于记忆T-细胞，并且认为通过IL-17A和 IL-17F的调节来促进自体免疫疾病，如通过鼠脾细胞对IL-23应答而分泌IL-17的能力所证明的。在人存在IL-23/IL-17途径，并且已经显示出IL-23是IL-21、IL-22、IFN- γ , TNF-α和IL-17的同等良好诱导剂，这些全部是促炎症反应细胞因子。在体外，IL-6和 TGF-βΙ促进天然T-细胞沿着新发现的T-细胞途径往下(TH17) (Zhou等人，2007 Nat Immunol 8 967-74)。这些细胞进一步通过IL-21的分泌以自分泌的方式得到驱动。最后， 认为IL-23和/或IL-I β在这种Τη17应答中维持了细胞(对于综述，参见Dong 2008 Nat Rev Immunol 8337本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种包含抗原结合结构域的抗体，该抗原结合结构域结合人ＩＬ－１２和人ＩＬ－２３，其中抗体结合作为单体（人ＩＬ－１２ｐ４０）和作为同二聚体（人ＩＬ－１２ｐ８０）存在的人ＩＬ－１２ｐ４０，并且其中抗体抑制人ＩＬ－１２与人ＩＬ－１２Ｒβ２的结合和人ＩＬ－２３与人ＩＬ－２３Ｒ的结合，但不抑制人ＩＬ－１２或人ＩＬ－２３或人ＩＬ－１２ｐ４０或人ＩＬ－１２ｐ８０与人ＩＬ－１２Ｒβ１的结合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】AU20089041782008年8月14日1.一种包含抗原结合结构域的抗体，该抗原结合结构域结合人IL-12和人IL-23，其中抗体结合作为单体(人IL-12p40)和作为同二聚体(人IL-12p80)存在的人IL_12p40，并且其中抗体抑制人IL-12与人IL-12Ri3 2的结合和人IL-23与人IL-23R的结合，但不抑制人IL-12或人IL-23或人IL-12p40或人IL_12p80与人IL_12R3 1的结合。2.如权利要求1中所述的抗体，其中抗体与包含具有SEQID NO :6序列的重链可变区的抗体竞争与人IL-12和/或人IL-23的结合。3.如权利要求1中所述的抗体，其中抗体与包含具有SEQID NO :7序列的轻链可变区的抗体竞争与人IL-12和/或人IL-23的结合。4.如权利要求1中所述的抗体，其中抗体结合具有序列VQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVIC RKNASISV(SEQ ID NO 65)的人 IL_12p40 的一部分。5.如权利要求1中所述的抗体，其中抗体在Asp265上特异性地结合人IL-12p40(SEQ ID NO :1)。6.一种包含抗原结合结构域的抗体，该抗原结合结构域结合人IL-23 (SEQ ID NO 66), 其中抗体与人IL_23(SEQ ID NO :66)的结合水平高于抗体与突变IL-23拟65A (SEQ ID NO: 75)的结合水平。7.如权利要求6中所述的抗体，其中抗体结合作为单体(人IL-12p40)和作为同二聚体(人IL-12p80)存在的人IL-12p40，并且其中抗体抑制人IL-12与人IL-12R β 2的结合和人IL-23与人IL-23R的结合，但不抑制人IL-12或人IL-23或人IL_12p40或人IL_12p80 与人IL-12Ri3 1的结合。8.一种抗体，其包含3个选自以下的重链⑶R序列 HCDRl DYY&H，其中& = M 或 L ；hcdr2 widpengdtex2ah(fqg，其中& = Y、η 或 s ； hcdr3 x3kelryfdv，其中 X3 = C、A、N、D、E、Q、G、H、I、L、P 或 V。9.一种抗体，其包含3个选自以下的轻链⑶R序列 LCDRl RM4)(5SISINLH，其中& = S 或 P ； A = Q 或 R ； LCDR2 FA)(6QSX7S，其中 & = S 或 R ； X7 = I 或 T ； LCDR3 QQSNSX8PLTjJt^ & = W 或 F。10.一种抗体，其包含3个选自以下的重链⑶R序列 HCDRl DYY&H，其中& = M 或 L ；hcdr2 widpengdtex2ah(fqg，其中& = y、h 或 s ； hcdr3 x3kelryfdv，其中x3 = c、a、n、d、e、q、g、h、i、l、p 或 v， 和3个选自以下的轻链cdr序列 LCDRl RM4)(5SISINLH，其中 & = s 或 p ； a = q 或 r ； lcdr2 fa)(6qsx7s，其中 & = s 或 r ； x7 = i 或 t ； lcdr3 QQSNSX8pltjJt^ & = w 或 f。11.如权利要求8或权利要求10中所述的抗体，其中抗体进一步包含选自seqid no 202、seq id no :205、seq id no :208、seq id no :203、seq id no :206、seq id no :209、 seq id no 204或seq id no :207的人重链受体框架序列。12.如权利要求9或权利要求10中所述的抗体，其中抗体进一步包含选自seqid no 210,seq id n0:213、seq id no :216,seq id no :211,seq id no :214,seq id no :212 或 seq id no 215的人轻链受体框架序列。13.如权利要求8或权利要求9中所述的抗体，其中抗体进一步包含抗体人受体框架， 该框架在关键残基处包含至少一个框架区氨基酸置换，所述关键残基选自邻近⑶r的残基、糖基化位点残基、罕见的残基、能够与人il-12的p40亚基相互作用的残基、能够与cdr 相互作用的残基、规范的残基、重链可变区和轻链可变区之间的接触残基；Veriner区内的残基和Chothia限定的VH结构域⑶Rl与Kabat限定的第一重链框架之间重叠区域中的残基。14.如权利要求8或权利要求9中所述的抗体，其中抗体进一步包含抗体人受体框架， 该框架包含至少一个框架区氨基酸置换，其中框架的氨基酸序列与所述人受体框架的序列为至少65%相同，并包含至少70个与所述人受体框架相同的氨基酸残基。15.如权利要求8或权利要求10中所述的抗体，其中抗体包含选自以下的免疫球蛋白重可变区seq id no :6, seq id no 62, seq id no 114, seq id no 142, seq id no :28、 seq id no 87,seq id no 115、seq id no 143,seq id no 29、seq id no 88、seq id n0: 116、seq id no: 144、seq id no 30,seq id no :90,seq id no :117、seq id no: 145、seq id no :3useq id no :91、seq id no :118,seq id no :146、seq id no :33、seq id no :92, seq id no :119、seq id no :147, seq id no :34、seq id no :93、seq id no :120, seq id no :148, seq id no :35、seq id no :94、seq id no :122, seq id no :149, seq id no :36、 seq id no :95,seq id no :124,seq id no :150,seq id no :38、seq id no :96、seq id no: 125、seq id no: 151、seq id no :39, seq id no :97, seq id no: 126、seq id no: 152、seq id no :40,seq id no :99、seq id no :127,seq id no : 153、seq id no :41、seq id no :100, seq id no :128, seq id no :154, seq id no :42, seq id no =iouseq id no :129, seq id no: 155、seq id no :43, seq id no: 102、seq id no: 130、seq id no: 156、seq id no :44,SEQ ID NO: 103、SEQ ID NO: 131、SEQ ID NO: 157、SEQ ID NO :45, SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO :132,SEQ ID NO :158,SEQ ID NO :53,SEQ ID NO :105,SEQ ID NO :133,SEQ ID NO :159, SEQ ID NO :54, SEQ ID NO :106, SEQ ID NO :134, SEQ ID NO :160, SEQ ID NO :55、SEQ ID NO :107,SEQ ID NO :135,SEQ ID NO :161、SEQ ID NO :56、SEQ ID NO :108,SEQ ID NO :136, SEQ ID NO :162, SEQ ID NO :57, SEQ ID NO :109, SEQ ID NO :137, SEQ ID NO :163, SEQ ID NO :58, SEQ ID NO :110、SEQ ID NO: 138、SEQ ID NO: 164、SEQ ID NO :59, SEQ ID NO: 111、 SEQ ID NO: 139、SEQ ID NO: 165、SEQ ID NO :60, SEQ ID NO :112、SEQ ID NO: 140、SEQ ID NO :166, SEQ ID N0:61、SEQ ID NO :113, SEQ ID NO :141 或 SEQ ID N0:167。16.如权利要求9或权利要求10中所述的抗体，其中抗体包含选自以下的免疫球蛋白轻可变区SEQ ID NO 7,SEQ ID NO :169、SEQ ID NO :181、SEQ ID NO 193,SEQ ID NO :32、 SEQ ID NO :170,SEQ ID NO 182,SEQ ID NO 194,SEQ ID N0:37、SEQ ID NO 171,SEQ ID NO :183,SEQ ID NO 195,SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 172,SEQ ID NO 184,SEQ ID NO :196、 SEQ ID NO :46、SEQ ID NO :173、SEQ ID NO :185、SEQ ID NO :197、SEQ ID NO :47、SEQ ID NO :174,SEQ ID NO 186,SEQ ID NO :198、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 175,SEQ ID NO :187、 SEQ ID NO :199, SEQ ID NO 49, SEQ ID NO 176, SEQ ID NO 188, SEQ ID NO 200, SEQ ID NO 50, SEQ ID NO: 177、SEQ ID NO: 189、SEQ ID NO :201、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO: 178、 SEQ ID NO: 190、SEQ ID NO :52, SEQ ID NO :179 或 SEQ ID NO :192。17.如权利要求10中所述的抗体，其中抗体包含两个免疫球蛋白可变区，其中所述两个免疫球蛋白可变区选自SEQ ID NO:6&SEQ ID NO:7SEQ ID NO:6&SEQ ID NO:169SEQ ID NO:28&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:29&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:30&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:31&SEQ ID NO:32SEQ ID NO:33&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:34&SEQ ID NO:51SEQ ID NO:34&SEQ ID NO:47SEQ ID NO:35&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:36&SEQ ID NO:37SEQ ID NO:38&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:38&SEQ ID NO:51SEQ ID NO:38&SEQ ID NO:32SEQ ID NO:38&SEQ ID NO:47SEQ ID NO:38&SEQ ID NO:52SEQ ID NO:39&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:40&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:41&SEQ ID NO:42SEQ ID NO115&SEQ ID NO:190SEQ ID NO115&SEQ ID NO:192SEQ ID NO115&SEQ ID NO:193SEQ ID NO115&SEQ ID NO:194SEQ ID NO115&SEQ ID NO:195SEQ ID NO115&SEQ ID NO:196SEQ ID NO115&SEQ ID NO:197SEQ ID NO115&SEQ ID NO:198SEQ ID NO115&SEQ ID NO:199SEQ ID NO115&SEQ ID NO:200SEQ ID NO115&SEQ ID NO:201SEQ ID NO116&SEQ ID NO:173SEQ ID NO116&SEQ ID NO:174SEQ ID NO116&SEQ ID NO:175SEQ ID NO116&SEQ ID NO:176SEQ ID NO116&SEQ ID NO:177SEQ ID NO117&SEQ ID NO:173SEQ ID NO117&SEQ ID NO:174SEQ ID NO:117&SEQ ID NO:175SEQ ID NO: 43&SEQ ID NO179SEQ ID NO:117&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO: 44&SEQ ID NO179SEQ ID NO:117&SEQ ID NO: 177SEQ ID NO: 44&SEQ ID NO51SEQ ID NO:118&SEQ ID NO: 178SEQ ID NO: 44&SEQ ID NO32SEQ ID NO: 118&SEQ ID NO: 179SEQ ID NO: 44&SEQ ID NO47SEQ ID NO119&SEQ ID NO: 178SEQ ID NO: 44&SEQ ID NO52SEQ ID NO119&SEQ ID NO: 179SEQ ID NO: 45&SEQ ID NO179SEQ ID NO: 119&SEQ ID NO: 51SEQ ID NO: 45&SEQ ID NO179SEQ ID NO119&SEQ ID NO: 189SEQ ID NO: 53&SEQ ID NO41SEQ ID NO119&SEQ ID NO: 46SEQ ID NO: 54&SEQ ID NO179SEQ ID NO119&SEQ ID NO: 47SEQ ID NO55&SEQ ID NO179SEQ ID NO119&SEQ ID NO: 48SEQ ID NO56&SEQ ID NO179SEQ ID NO.119&SEQ ID NO: 49SEQ ID NO57&SEQ ID NO179SEQ ID NO:119&SEQ ID NO: 50SEQ ID NO58&SEQ ID NO42SEQ ID NO:119&SEQ ID NO: 51SEQ ID NO59&SEQ ID NO179SEQ ID NO:119&SEQ ID NO: 52SEQ ID NO:60&SEQ ID NO179SEQ ID NO:120&SEQ ID NO: 178SEQ ID NO:61&SEQ ID NO42SEQ ID NO:120&SEQ ID NO: 179SEQ ID NO:62&SEQ ID NO42SEQ ID NO:122&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:87&SEQ ID NO7SEQ TD NO:124&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:88&SRQ ID NO7SEQ ID NO: 125&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:90&SEQ ID NO7SEQ ID NO:126&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:91&SEQ ID NO7SEQ ID NO:127&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:92&SEQ ID NO7SEQ ID NO:128&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:93&SEQ ID NO7SEQ ID NO:129&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:94&SEQ ID NO7SEQ ID NO:130&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:95&SEQ ID NO7SEQ ID NO:131&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:96&SEQ ID NO7SEQ ID NO:132&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:97&SEQ ID NO7SEQ ID NO:133&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:99&SEQ ID NO7SEQ ID NO:134&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:100&SEQ ID NO7SEQ ID NO:135&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:101&SEQ ID NO7SEQ ID NO:136&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:102&SEQ ID NO7SEQ ID NO:137&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:103&SEQ ID NOSEQ ID NO:138&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:104&SEQ ID NOSEQ ID NO:139&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:105&SEQ ID NOSEQ ID NO:140&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:106&SEQ ID NO:171SEQ ID NO:141&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:106&SEQ ID NO:172SEQ ID NO:142&SEQ ID NO:176SEQ ID NO:107&SEQ ID NO:171SEQ ID ...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·W·克拉克，
申请(专利权)人：赛福伦澳大利亚私人有限公司，
类型：发明
国别省市：AU