本发明专利技术关注Ｐｌａｃ８，即一种牵涉脂肪生成调控的新型靶物。使用ｓｉＲＮＡ方法，发明专利技术人证明了前脂肪细胞和脂肪组织中Ｐｌａｃ８活性的降低诱导脂肪生成的降低。如此，本发明专利技术涉及Ｐｌａｃ８活性的调控剂以及用于鉴定此靶物活性的调控剂的筛选测试，及其调控脂肪生成并且如此治疗肥胖及相关病症的用途，尤其在药物组合物中。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】PIac8活性抑制剂用于调控脂肪生成的用途本专利技术关注PlacS，即一种牵涉脂肪生成调控的新型靶物以及用于鉴定此靶物活性的调控剂的筛选测试。此外，本专利技术涉及PlacS活性的调控剂及其调控脂肪生成并且如此治疗肥胖及相关病症的用途，尤其在药物组合物中。肥胖是许多病症的一项主要风险因素，所述病症包括高血压、冠状动脉疾病、血脂异常(dyslipidemia)、胰岛素抗性和2型糖尿病。由于肥胖流行的重要性，大量的调查已经集中于脂肪细胞生物学，包括产生新脂肪细胞的发育途径。脂肪生成是未分化的间充质前体细胞变为成熟的脂肪细胞的过程。在整个过去的十年期间，已经在阐明脂肪细胞分化的分子机制方面做出了相当大的进展，所述脂肪细胞分化的分子机制牵涉序贯激活来自数个家族的转录因子诸如CCAAT/增强子结合蛋白(C/ΕΒΡα、α、和γ)和核激素受体过氧化物酶体增殖物激活受体Y (PPARy) (Rosen, Ε. D.等，2002)。PPARy被描述为脂肪生成的一种“主要调节剂”，因为在体外和在体内都已经显示了它对于脂肪生成既是足够的也是必要的。最近，已经描述了新的转录因子参与脂肪生成，诸如KLF家族(KLF2、5和KLF15) (Baner jee, S. S.等，2003 ；Gray, S. Μ.等，2002)、Ebf 家族(Jimenez,Μ. Α.等，2007)及 Krox 20 (Chen, Ζ.等，2005)，这提示了脂肪生成过程中发生的转录级联比先前所想的复杂得多。 此外，还已经描述了信号传导分子和/或受体诸如分泌性蛋白质的Wnt家族(Kang S.等， 2007)、Shh蛋白(sonic hedgehog protein)、Notch受体牵涉导致脂肪细胞形成的分子事件。有趣的是，注意到胞外和胞内事件以某种方式偶联以调节脂肪生成。所有这些信号传导途径会聚于受到紧密调节的转录级联，其需要更为完整的了解以潜在地控制脂肪细胞发育，并预防肥胖。脂肪组织中的脂肪贮存是有限的，并且超过此容量导致脂质在其它组织中，特别在肌肉、肝、和内分泌胰腺中积累，而且导致脂肪细胞分泌各种脂肪因子(adipokine)。脂肪组织由位于不同解剖部位的数种沉积物组成，所述位于不同解剖部位的沉积物可以源自独特的前体，而且具有不同的生理学功能和病理生理学作用。与皮下脂肪库(adipose depot) 形成对比，内脏脂肪库可以更多地促成与代谢综合征有关的缺陷。已经在葡萄糖代谢和2型糖尿病中发挥至关重要作用的所有器官，即脂肪组织、 胃肠道、肝、骨骼肌和胰腺中鉴定出大麻素1受体。已经显示了利莫那班(Rimonabant)(临床使用的第一种选择性大麻素受体I(CBlR)拮抗剂)降低食物摄取和体重，如此改善葡萄糖代谢调节。然而，仍需要用于治疗肥胖的新型治疗靶物。已知胎盘8蛋白(PlacS)是一种胞质信号传导分子，尽管已经报告了它具有推定的信号肽(Rogulski，K.等，2005)。最近，生成了 PlacS敲除小鼠，并且其展现出对细菌感染的免疫应答受损(Ledford，J.G.等，2007)。PlacS在免疫细胞中，及在其它细胞类型中的作用和功能仍未知。专利技术人现在已经发现了，PlacS在脂肪细胞分化中发挥至关重要的作用。如此，认为PlacS是用于调控脂肪生成及用于治疗肥胖及相关病症的一种新型相关靶物。还可以使用对PlacS的抑制来降低脂肪生成以降低皮下和内脏脂肪积累。专利技术详述本专利技术被吸引到用于调节脂肪生成和脂肪细胞中的代谢功能的方法。本专利技术在于PlacS活性抑制剂用于调控脂肪生成，特别是用于治疗肥胖及相关病症的用途。本专利技术还关注含有脂肪生成及相关病症的此类调控剂的药物组合物和用于此类调控剂的筛选测试。专利技术人已经鉴定出PlacS在脂肪生成调控中的作用。经由转录物组学 (transcriptomic)方法，他们鉴定出其表达与喂养高脂肪饮食的C57BI/6小鼠分组中的体重增加相关联的基因。然后，他们进行第二项分析以评估通过用利莫那班处理高脂肪饮食喂养小鼠诱导的基因表达变化。保留如下的基因，其先前尚未在脂肪细胞生物学中描述过， 但是其可以牵涉重要的生物学过程诸如信号传导、修饰胞外基质蛋白、和基因转录。这些基因对于脂肪生成而言可以是重要的，特别是因为它们可能牵涉利莫那班降低小鼠中的脂肪质量的机制。在此背景中，PlacS鉴定为牵涉脂肪细胞代谢，特别是新的信号传导途径。更一般地，此基因表现为在脂肪生成和控制肥胖中的脂肪组织发育方面发挥作用。本专利技术在于鉴定PlacS活性的调控剂。此类调控剂可以是能够调控PlacS活性的任何化合物或分子，特别是小分子、脂质和siRNA。可以通过检测药剂调控PlacS活性的能力来鉴定PlacS活性调控剂。PlacS的抑制剂是能够完全或部分降低或抑制PlacS活性的任何化合物。PlacS的抑制剂包括但不限于干扰PlacS与其天然配体在胞内区室中的相互作用的药剂、在转录和翻译水平降低PlacS 表达的药剂、及抑制牵涉PlacS的胞内信号的药剂。在一个实施方案中，可以使用完全或部分抑制PlacS转录的小分子来降低PlacS 活性。可以使用本领域技术人员公知的方法来鉴定此类调控剂，像报告系统，其在于与报告基因以符合读码框方式连接且在合适的细胞系中表达的PlacS启动子；报告基因产物的活性可以定量测量。如此，通过例如抑制激活转录因子来抑制报告基因表达的化合物可以认为是潜在的候选物。可以在此类报告系统中使用的报告基因是众多的，而且是本领域中公知的。例如， 此类报告基因可以是容许绿色荧光蛋白(GFP)、萤光素酶、β-半乳糖苷酶等表达的基因。因此，本专利技术的一个方面提供了一种用于筛选PlacS活性抑制剂的方法，其包括下列步骤a)用包含与报告基因连接的PlacS启动子的报告构建体转染细胞系；b)在容许所述报告基因表达的条件中培养所述细胞系；c)将候选化合物添加入所述细胞培养物中，并d)将抑制剂化合物鉴定为是那些具有降低或抑制所述报告基因表达的能力的化合物。要在上文所描述的用于PlacS转录调控剂的筛选测试中使用的预测的PlacS启动子对应于SEQ ID NO. 23。在另一个实施方案中，使用小干扰RNA(SiRNA)或小发夹RNA(shRNA)经由RNA 干扰来调控PlacS表达。因此，在一个方面，本专利技术涉及双链核酸分子，包括小核酸分子，诸如能够介导针对PlacS基因表达的RNA干扰(RNAi)的短干扰核酸(siNA)、短干扰 RNA (siRNA)、双链RNA (dsRNA)、微小RNA (miRNA)、和短发夹RNA (shRNA)分子，包括此类小核酸分子的混合物及此类小核酸分子的合适的配制剂。已经在秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)系统中首次描述了 RNAi介导的基因沉默现象，其中报告了长双链RNA分子的显微注射。RNA介导的基因失活机制在迄今已经调查的各种生物体中似乎略有不同。然而，在所有系统中，RNA介导的基因沉默基于由内切核酸酶Argonauts诱导的对靶mRNA的转录后降解，所述内切核酸酶Argonauts是所谓的RISC复合物的一部分。降解的序列特异性是由加载入RISC复合物中的特异性反义RNA 链的核苷酸序列本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．用于调控脂肪生成的Ｐｌａｃ８活性抑制剂。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】EP08291041.52008年11月7日1.用于调控脂肪生成的PlacS活性抑制剂。2.依照权利要求1的抑制剂，其降低脂肪生成。3.依照权利要求1或2的抑制剂，其用于治疗肥胖及相关病症。4.依照权利要求1或2的抑制剂，其用于降低内脏和/或皮下脂肪积累。5.依照前述权利要求中任一项的抑制剂，其中所述抑制剂是小分子。6.依照前述权利要求中任一项的抑制剂，其中所述抑制剂是小干扰RNA。7.依照权利要求7的抑制剂，其中所述siRNA是具有与SEQID NO. 5或SEQID NO. 6或 SEQ ID NO. 7对应的序列的ShRNA08.PlacS活性抑制剂用于制备用于调控脂肪生成的药物的用途。9.具有序列S...
【专利技术属性】
技术研发人员：迪亚纳·霍尔，
申请(专利权)人：赛诺菲安万特，
类型：发明
国别省市：FR
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