环介导等温扩增检测人巨细胞病毒的方法、检测用试剂盒和引物组技术

可快速、灵敏检测人巨细胞病毒的LAMP扩增用特异核酸引物组，包含扩增人巨细胞病毒基因UL122和US14特异碱基序列的正向内引物FIP、正向外引物F3、反向内引物BIP、反向外引物B3，以及第一环引物LF和/或第二环引物LB。一种人巨细胞病毒的检测方法，以人巨细胞病毒的UL122和US14基因核酸序列的一部分或其互补链为靶，通过LAMP法用所述的引物选择性扩增靶区域，确认是否存在扩增产物。一种HCMV基因检测用试剂盒，包含所述正向内引物、反向内引物、正向外引物、反向外引物、第一环引物、第二环引物。本发明专利技术适合检测人巨细胞病毒的UL122和US14基因。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基于环介导等温扩增(LAMP)技术检测人巨细胞病毒 (HumanCytomegalovirus, HCMV)的快速检测技术。具体涉及有效用于HCMV特定基因片段的核酸扩增的引物与引物组，涉及LAMP方法所用的生物试剂。
技术介绍
人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)的感染极其普遍，40%的普通人群中可以检出HCMV抗体。6岁以上人群58. 9%感染HCMV，80岁以上人群90. 8%感染HCMV。 尽管HCMV多呈隐性感染，但在免疫功能受限或低下人群中可致病，比如在新生儿、HIV感染者、器官移植患者、恶性肿瘤患者等特定人群中。HCMV在孕妇中发生垂直传播，是新生儿缺陷的首要病因。HCMV对胎儿/新生儿可引起先天性或围产期感染。HCMV在免疫正常人群中引起单核细胞增多症。输血后获得性CMV感染的表现类同单核细胞增多症。HCMV在免疫受损人群中引起CMV肺炎、胃肠道疾病与视网膜炎。既往检测HCMV的方法中，传统技术包括细胞培养、载玻片培养法、以及较酶联免疫吸附法(ELISA法)更为特异的PP65抗原血症试验。

【技术保护点】
１．检测人巨细胞病毒的ＬＡＭＰ扩增用特异核酸引物组，其特征在于包含扩增人巨细胞病毒基因ＵＬ１２２特异碱基序列的正向内引物ＦＩＰ、正向外引物Ｆ３、反向内引物ＢＩＰ、反向外引物Ｂ３，以及第一环引物ＬＦ和／或第二环引物ＬＢ：ＵＬ１２２－Ｆ３：ＣＣＧＡＴＣＣＴＣＴＧＡＧＡＧＴＣＴＧＣＵＬ１２２－Ｂ３：ＡＧＴＧＴＣＣＴＣＣＣＧＣＴＣＣＴＣＵＬ１２２－ＦＩＰ：ＧＧＧＴＧＡＣＡＣＣＡＧＡＧＡＡＴＣＡＧＡＣＣＴＡＧＴＧＴＧＧＡＴＧＡＣＣＴＡＣＧＧＵＬ１２２－ＢＩＰ：ＣＣＧＣＧＡＣＴＡＴＣＣＣＰ位的核酸序列的一部分或其互补链互补。ＴＣＴＧＴＣＣＴ　ＣＣＴＣＴＴＣＣＴＣＡＴＣＡＣＴＣＴＧＣＵＬ１２２－ＬＦ：ＡＧＧＣＴＡＣＡＡＴＡＧＣＣＴＣＴＴＣＣＴＣＵＬ１２２－ＬＢ：ＣＴＧＡＧＡＡＣＡＧＴＧＡＴＣＡＧＧＡＡＧＡＡＡ所述引物与基因ＵＬ１２２的１７２０７７－１７２３４２ｂ

【技术特征摘要】
1.检测人巨细胞病毒的LAMP扩增用特异核酸引物组，其特征在于包含扩增人巨细胞病毒基因UL122特异碱基序列的正向内引物FIP、正向外引物F3、反向内引物BIP、反向外引物B3，以及第一环引物LF和/或第二环引物LB UL122-F3 CCGATCCTCTGAGAGTCTGC UL122-B3 :AGTGTCCTCCCGCTCCTCUL122-FIP :GGGTGACACCAGAGAATCAGACCTAGTGTGGATGACCTACGG UL122-BIP CCGCGACTATCCCTCTGTCCT CCTCTTCCTCATCACTCTGC UL122-LF :AGGCTACAATAGCCTCTTCCTC UL122-LB CTGAGAACAGTGATCAGGAAGAAA所述引物与基因UL122的172077-172342bP位的核酸序列的一部分或其互补链互补。2.检测人巨细胞病毒的LAMP扩增用特异核酸引物组，其特征在于包含扩增人巨细胞病毒基因US14特异碱基序列的正向内引物FIP、正向外引物F3、反向内引物BIP、反向外引物B3，以及第一环引物LF和/或第二环引物LB US14-F3 TGTGATAGATTAGTGTTTCG US14-B3 :ACCTCCACACTTTTGACUS14-FIP :GCTACATCGCCACCAAAAT-GTGGCGTAAAGTATCAGC US14-BIP GCACGTCTTGGAAAAGGAC-CTTCTACTTACACCTGGTTAC US14-LF :ACGTCATCCGCAGCT US14-LB :AGAGACACAGCAAAGTCT所述引物与基因US14的172077-172342bP位的核酸序列的一部分或其互补链互补。3.—种人巨细胞病毒的检测方法，其特征在于，以人巨细胞病毒的UL122基因库登陆号BK000394基因序列的172077-172342bP位的核酸序列的一部分或其互补链为靶，通过 LAMP法用权利要求1所述的引物选择性扩增所述靶区域，确认是否存在扩增产物。4.一种人巨细胞病毒的检测方法，其特征在于，以人巨细胞病毒的US14基因库登陆号BK000394基因序列的203423-203633bP位的核酸序列的一部分或其互补链为靶，通过 LAMP法用权利要求2所述的引物选择性扩增所述靶区域，确认是否存在扩增产物。5.根据权利3所述的人巨细胞病毒的检测方法，其特征在于，所述选择性扩增所述靶区域，确认是否存在扩增产物，是指1)提取DNA作模板；2)环介导等温扩增①配制扩增反应液10X Hiermopo 1反应缓冲液、400-1600uM dNTP、2_6mM硫酸镁、 UuM权利要求1所述正向内引物、l_3uM权利要求1所述反向内引物、0. 2-0. 3uM权利要求1所述正向外引物、0. 2-0. 3uM权利要求1所述反向外引物、l_2uM权利要求1所述第一环引物、l-2uM权利要求1所述第二环引物和1-1. 5M甜菜碱；其中lOXHiermoPol反应缓冲液含有200mM pH8. 8的三羟基甲基...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨劲，吕杭军，孟忠华，
申请(专利权)人：浙江省血液中心，
类型：发明
国别省市：86